次氯酸鈉溶液與不同濃度臭氧水溶液沖洗根管殺菌效果的體外研究

李海燕 李媛 薛雯

(鄭州市第一人民醫(yī)院 河南 鄭州 450000)

次氯酸鈉溶液與不同濃度臭氧水溶液沖洗根管殺菌效果的體外研究

李海燕 李媛 薛雯

(鄭州市第一人民醫(yī)院 河南 鄭州 450000)

目的體外比較次氯酸鈉溶液與不同濃度臭氧水溶液沖洗根管的殺菌效果。方法取離體牙30顆，構(gòu)建根管內(nèi)糞腸球菌(E.faecalis)體外感染模型，分為3組，各10顆。A組應(yīng)用1.339 mg/L的臭氧水溶液沖洗、B組應(yīng)用3.994 mg/L的臭氧水溶液沖洗，C組應(yīng)用5.25%的次氯酸鈉溶液沖洗，對(duì)3組沖洗前、沖洗24 h與沖洗后7 d的菌落進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果沖洗前和沖洗24 h后，3組菌落計(jì)數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；沖洗7 d后，3組菌落數(shù)均高于治療前，且B組

臭氧水溶液；次氯酸鈉溶液；根管沖洗；殺菌

在根管治療中，通常需要實(shí)施根管預(yù)備、消毒、充填3個(gè)環(huán)節(jié)，在根管預(yù)備環(huán)節(jié)中進(jìn)行清洗，清除根管內(nèi)細(xì)菌、殘余牙髓等是整個(gè)根管治療過(guò)程中至關(guān)重要的步驟[1]。在沖洗過(guò)程中，沖洗液的選取對(duì)于滅菌效果有直接影響，同時(shí)也會(huì)影響進(jìn)一步治療效果[2]。本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，旨在比較次氯酸鈉溶液與不同濃度臭氧水溶液沖洗根管的殺菌效果，以為臨床沖洗方案的選擇提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料選取離體牙30顆，均為完成根尖發(fā)育的單直根管離體牙，經(jīng)X線(xiàn)檢查，未出現(xiàn)隱裂等情況；清理牙齒表面，4 ℃鹽水浸泡保存。構(gòu)建根管內(nèi)糞腸球菌(E.faecalis)體外感染模型，所選取菌落為自南京便診生物科技有限公司購(gòu)入的糞腸球菌ATCC 29212。實(shí)驗(yàn)儀器主要包括超凈工作臺(tái)，恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，電熱手提高壓蒸汽消毒器，旋渦混合器等。實(shí)驗(yàn)試劑主要包括15%乙二胺四乙酸(elhylene diamine tetraacetic acid，EDTA)溶液，腦心浸液肉湯(brain heart infusion broth，BHI)培養(yǎng)基，新型低聚合收縮后牙樹(shù)脂F(xiàn)iltekTMP90等。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1離體牙處理 取備用離體牙，去除牙冠，牙根均為10 mm，拔除牙髓，不銹鋼K-File通暢根管，采用15%EDTA輔助超聲蕩洗根管2 min，然后蒸餾水沖洗1 min，再用Filtek P 90行根尖封閉。

1.2.2糞腸球菌的培養(yǎng) 在常溫下對(duì)E.faecalis進(jìn)行復(fù)蘇，首先取BHI固體培養(yǎng)基，接種菌液50 μl，置于37 ℃恒溫箱，行48 h的厭氧培養(yǎng)，通過(guò)染色處理，在顯微鏡下觀察其形態(tài)，確認(rèn)E.faecalis的培養(yǎng)純度。

1.2.3建立感染模型 在BHI培養(yǎng)基中放入標(biāo)本，高溫高壓滅菌20 min，37 ℃恒溫厭氧培養(yǎng)48 h，觀察培養(yǎng)基；運(yùn)用紫外分光光度計(jì)調(diào)整菌液濃度，在600 nm處使E.faecalis單克隆菌液的濁度達(dá)到0.5 Abs，放置于超凈臺(tái)上，向各標(biāo)本中注入200 μl菌液，繼續(xù)37 ℃恒溫厭氧培養(yǎng)21 d[3]。

1.2.4感染根管的處理及取樣 按照隨機(jī)數(shù)表法將樣本分為3組，A組應(yīng)用1.339 mg/L的臭氧水溶液沖洗、B組應(yīng)用3.994 mg/L的臭氧水溶液沖洗，C組應(yīng)用5.25%的次氯酸鈉溶液沖洗。沖洗時(shí)按下頜牙位進(jìn)行操作，在沖洗過(guò)程中，注射器針頭應(yīng)盡可能深插，以感受到無(wú)嵌塞、阻力、回流通暢為宜，同時(shí)對(duì)針頭進(jìn)行左右、上下移動(dòng)；每次沖洗結(jié)束后，應(yīng)用蒸餾水沖洗根管，靜置1 min。根管沖洗前后取樣，選取合適的無(wú)菌紙尖插入到根管中，直至根尖孔的位置，保持根管壁和紙尖相接觸，持續(xù)取樣1 min。

1.2.5細(xì)菌鑒定 按照簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣方法從各組各選取2例，將0.1 ml取樣液接種于BHI培養(yǎng)基上，結(jié)合菌落的具體形態(tài)，染色后確定是否存在微生物生長(zhǎng)。

1.2.6稀釋平板計(jì)數(shù) 選取6個(gè)試管并編號(hào)為1至6，每根管中均注入無(wú)菌蒸餾水900 μl；向1號(hào)試管中注入10 μl E.faecalis懸液，將其放置于漩渦器上進(jìn)行2～3次的充分振蕩，確保完全混合；再?gòu)?號(hào)試管中抽吸10 μl注入到2號(hào)試管，按上述方法操作，確保其充分混合，直至6號(hào)試管完成上述操作。取3套無(wú)菌平皿，自6號(hào)試管開(kāi)始，依次滴平皿取樣計(jì)數(shù)，每根試管分別取20 μl，按照序號(hào)依次加入平皿中，直至4號(hào)試管，各平皿分取3個(gè)樣品，取平均值。待平皿中液體干燥后，將其放入37 ℃的恒溫箱中培養(yǎng)保存，取出培養(yǎng)板，統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板上的菌落平均數(shù)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，各組菌落數(shù)均以?xún)蓸颖拘蟹菂?shù)檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

沖洗前和沖洗24 h后，3組樣本菌落計(jì)數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；沖洗7 d后，3組菌落數(shù)均高于治療前，且B組

表1 3組樣本沖洗前后菌落計(jì)數(shù)比較(×106 CFU/ml)

3 討論

在根管治療中，根管沖洗是非常重要的環(huán)節(jié)，尋找一種理想的沖洗液對(duì)根尖周病治療和牙髓病治療尤為關(guān)鍵。臭氧水溶液自身具有較強(qiáng)的殺菌和抑菌功效，其毒性較低，被廣泛用于根管治療[4]。本研究結(jié)果顯示，臭氧水溶液和次氯酸鈉溶液均有較強(qiáng)的瞬間滅菌效果，但沖洗后7 d結(jié)果顯示，3.994 mg/L的臭氧水溶液的沖洗滅菌效果顯著優(yōu)于1.339 mg/L的臭氧水溶液和5.25%的次氯酸鈉溶液。考慮其原因可能為：①臭氧具有較強(qiáng)的滲透性，可入侵到菌體內(nèi)部，直接影響細(xì)胞膜內(nèi)面的脂多糖和細(xì)胞膜外殼脂蛋白，導(dǎo)致其出現(xiàn)通透性畸變，引起胞內(nèi)物質(zhì)外流，使得細(xì)胞溶解死亡；②臭氧可對(duì)細(xì)胞漿內(nèi)的甘油磷酸脫氫酶進(jìn)行氧化分解，同時(shí)還影響細(xì)菌糖酵解途徑，阻斷細(xì)菌能量來(lái)源，進(jìn)而抑制其生長(zhǎng)繁殖。本研究結(jié)果提示，臭氧水溶液的滅菌效果可能與其濃度存在一定關(guān)系，因此，在實(shí)際應(yīng)用中，可適當(dāng)增加溶液濃度以提高滅菌效果。此外，臭氧本身穩(wěn)定性較差，容易被氧氣分解，因此在使用時(shí)，必須現(xiàn)配現(xiàn)用，避免影響其殺菌強(qiáng)度。

綜上所述，臭氧水溶液和次氯酸鈉溶液用于根管沖洗，均具有瞬間滅菌的效果，且臭氧水溶液濃度與滅菌效果可能存在一定關(guān)系。

[1] 朱地,于海利,劉麗梅.臭氧水溶液對(duì)牙本質(zhì)微硬度影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].口腔醫(yī)學(xué)研究,2015,31(5):520-521.

[2] 陳國(guó)賢,鄒康元,袁慧娟.臭氧水溶液治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍50例的臨床療效觀察[J].廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2016,34(1):90-92.

[3] 董波,朱地,王建平.臭氧水溶液去除根管內(nèi)玷污層的掃描電鏡觀察[J].口腔醫(yī)學(xué)研究,2009,25(6):736-738.

[4] 朱地,盧志山,孟磊,等.幾種根管沖洗液對(duì)L929細(xì)胞毒性的實(shí)驗(yàn)研究[J].口腔醫(yī)學(xué)研究,2012,28(2):132-135.

R 781.05

10.3969/j.issn.1004-437X.2017.20.027

2017-01-26)