Array-ELISA檢測六項腫瘤標志物診斷結直腸癌的臨床價值分析

傅桂霞

(青島市第九人民醫院檢驗科，山東 青島 266002)

Array-ELISA檢測六項腫瘤標志物診斷結直腸癌的臨床價值分析

傅桂霞

(青島市第九人民醫院檢驗科，山東 青島 266002)

目的探討微陣列酶聯免疫法(Array-ELISA)檢測六項腫瘤標志物診斷結直腸癌(CRC)的臨床價值。方法選擇49例CRC患者作為CRC組，選擇19例同期進行結直腸手術的良性病變患者作為良性組，另取同期71例健康體檢者作為對照組。采集3組患者的靜脈血，通過Array-ELISA技術進行六項腫瘤標志物(AFP、CEA、PSA、CA125、CA153及CA199)檢測。比較3組血清六項腫瘤標志物檢測結果、CRC組ROC AUC結果、以及CRC組PRE與6項腫瘤標志物的相關參數。結果(1)CRC組血清CEA、AFP、CA199及CA125水平均高于良性組與對照組(P<0.05)。3組PSA與CA153水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)。(2)單項檢測中CEA(AUC=0.916,P=0.001)具有最高的診斷價值，Logistic回歸模型建立的PRE面積為0.932，均高于單項指標檢測。(3)本組CRC患者中的CEA特異度、靈敏度與準確率在單項中最高；聯合檢測中Logistic回歸預測變量PRE的特異度、靈敏度與準確率高于CEA(P<0.05)。結論Array-ELISA對CRC患者六項腫瘤標志物均有理想的檢測效果，但單項腫瘤標志物的特異度、靈敏度具有一定的局限性，六項指標聯合檢測可以有效提高CRC的檢出率。

Array-ELISA；六項腫瘤標志物；結直腸癌；臨床價值

結直腸癌(colorectal cancer,CRC)是臨床最為常見的惡性腫瘤，由于早期無特異性的表現，多數患者就診時往往已步入晚期，繼而喪失了最佳的治療時機[1]。因此，盡早采取有效的診斷與治療措施是延長CRC患者生存時間的關鍵。研究發現，單項腫瘤標志物對CRC的特異性與敏感性具有一定的局限性，而多項腫瘤標志物則可以提高CRC的診斷率，且對轉移、復發與術后療效具有顯著的評價作用[2]。微陣列酶聯免疫法(Array-ELISA)是生命科學中的一項高新科技檢測技術，其技術平臺主要包括現代微陣列技術、酶促化學發光技術及低溫電荷耦合器成像技術。為了進一步完善CRC患者的臨床診療方案，本研究采用Array-ELISA法對49例CRC患者進行了六項腫瘤標志物檢測，并采用ROC曲線與Logistic回歸分析來探討六項腫瘤標志物對CRC的臨床診斷價值，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選擇2016年1月至2016年12月本院收治的49例CRC患者作為CRC組，其中男性26例，女性24例；平均年齡(65.2±5.2)歲；選擇同期于本院進行結直腸手術的19例良性病變患者作為良性組，其中男性10例，女性9例；平均年齡(65.5±5.3)歲。(1)所有患者均經組織病理學檢查證實；(2)原發性病變；(3)本次研究內容已告知患者或其家屬，并取得其知情同意。排除標準：(1)合并血液系統、免疫系統疾病；(2)近期有感染史。另取同期于本院進行體檢的71例健康體檢者作為對照組(均無結直腸疾病史，臨床檢查未見異常)，其中男性36例，女性35例；平均年齡(65.7±5.4)歲。3組研究對象在性別及年齡構成比較中差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2檢測方法

在晨起空腹狀態下，采集3組患者的靜脈血3 mL，放置20 min后，離心5 min，控制室溫在1 800×g，使血清分離，對腫瘤標志物[糖類抗原 125(CA125)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特異性抗原(PSA)、糖類抗原 199(CA199)、甲胎蛋白(AFP)和糖類抗原153 (CA153)]進行檢測。(1)試劑與儀器：ECLIA分析儀由德國羅氏公司提供，均配置原廠校準品、試劑與質控物。Array-ELISA六項腫瘤標志物檢測試劑盒由北京華大吉比愛生物技術有限公司提供。(2)Array-ELISA原理：采用雙抗體夾心試劑盒，以微陣列形式將CA153、CEA、AFP、CA199、CA125及PSA特異性抗體組織排布在微孔板內，其中加入待檢測血漿標本或標準品，待發生反應后洗滌，添加酶標抗體工作液給予持續性溫育反應，完成反應后再次洗滌，最后添加發光液，根據待測標志物的濃度來增加發光信號。通過生物芯片閱讀設備準確采集與處理微孔板內微陣列信號、圖像，結合數據處理軟件，獲取到六項腫瘤標志物標本內的定量數據結果。(3)Array-ELISA檢測步驟：將六項腫瘤標志物標本、50 μL待測標本及質控品依次加入微孔板內；第1次溫育；采用封口膜將其封口，并振蕩45 min，溫度控制在37 ℃；5次洗液洗板，拍干；之后加入50 μL酶標抗體工作液，第2次溫育；再予5次洗板，拍干；最后在每個孔內加入發光液A與B混合物40 μL，馬上放入到生物芯片閱讀設備內進行檢測。

1.3觀察指標

(1)觀察3組血清六項腫瘤標志物檢測結果。參照試劑參考指標：CA153<31.3 U/mL、CA199<37 U/mL、CA125<35 U/mL、CEA0.00～5.00 ng/mL、AFP 0.00～7.00 ng/mL、PSA 0.00～4.00 ng/mL，<參考指標為陰性，≥參考指標為陽性。(2)觀察CRC組的ROC AUC結果。以AFP、CEA、PSA、CA125、CA153及CA199為檢驗變量，將診斷結果作為狀態變量進行ROC曲線分析。(3)觀察CRC組PRE與六項腫瘤標志物的相關參數。通過Forward condition法實施Binary Logistic回歸分析[3]，去除無用變量，分析其余變化，得到CRC的概率預測方程，即P=1/[1+e-(-1.253+0.068AFP+0.033CA199-0.065CA154-0.018CA125)]，計算出個體預測值的變量PRE，并以似然比檢測Logistic回歸模型。

1.4統計學分析

通過SPSS15.0對六項腫瘤標志物的數據分布情況進行狀態檢驗，非正態分布以Mann Whitney U及Kruskal-Wallis檢驗，正態分布以方差分析；計數資料、特異性與敏感性對比以χ2檢驗。采用Logistic回歸選擇變量，建立回歸方程與新變量，各項單項指標與新變量進行ROC曲線分析。

2 結果

2.1 3組血清六項腫瘤標志物檢測結果對比

CRC組血清CEA、AFP、CA199及CA125水平均高于良性組與對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。3組PSA與CA153水平對比差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2 CRC組ROC AUC評價

單項檢測中，CEA(AUC=0.916,P=0.001)具有最高的診斷價值，CA153(AUC 0.576)與PSA(AUC=0.553)ROC曲線幾乎成對角線，診斷價值較低；Logistic回歸模型建立的PRE面積為0.932，均高于單項指標檢測。見表2。

表1 3組血清六項腫瘤標志物檢測結果對比

*P<0.05，與良性組比較；#P<0.05，與對照組比較。

表2 CRC組ROC AUC評價

2.3 CRC組PRE與6項腫瘤標志物相關參數評價

本組CRC患者中的CEA特異度、靈敏度與準確率在單項中最高；聯合檢測中Logistic回歸預測變量PRE的特異度、靈敏度與準確率高于CEA(P<0.05)。見表3。

表3 CRC組PRE與6項腫瘤標志物相關參數評價

*P<0.05，與CEA比較。

3 討論

近年來，隨著醫學檢驗技術的不斷發展與完善，CRC患者除了采用影像學與病理學診斷外，血清腫瘤標志物檢測也得到了臨床的廣泛關注[4]。腫瘤標志物又稱為腫瘤標記物，是惡性腫瘤細胞中的特征性存在，或由惡性腫瘤細胞異常形成的物質，或是宿主對腫瘤刺激反應而形成的物質，可作為評價腫瘤發生、進展、判斷抗腫瘤治療效果的一類物質。腫瘤標志物主要存在于腫瘤患者體液、血液、組織及排泄物內，可以通過生物學、免疫學及化學方法檢測到[5-6]。然而，研究發現，單個腫瘤標志物的特異性與敏感性有限，所以國際上普遍采用多項標志物聯合方案進行檢驗，以便保證診療質量[7]。目前，臨床主要采用酶免疫分析、放射免疫分析、時間分辨熒光免疫分析、化學發光免疫分析、生物芯片技術及ECLIA技術進行腫瘤標志物檢驗[8]。上述傳統檢測方法各具有優勢，所以在較長一段時間，各項方式以互補方式應用。

現階段，醫學界所發現的腫瘤標志物約100余種，而選擇正確的標志物組合對腫瘤診斷具有至關重要的作用[9]。美國癌癥學會、美國臨床生化學會等研究發現，六項腫瘤標志物PSA、CEA、AFP、CA199、CA125及CA153是評價腫瘤最為明確、穩定及敏感度高的標志物，幾乎可以適用于任何常見的腫瘤，對臨床診斷與評價抗腫瘤治療效果具有重要的意義[10-11]。CEA是檢測CRC最為靈敏的指標，但因單項檢測存在一定的假陰性與假陽性，所以臨床易發生漏診。多項研究指出，為了有效降低誤診與漏診的發生概率，采用多個腫瘤標志物聯合檢測來提高診斷CRC診斷的準確率與靈敏度十分必要[12-13]。Array-ELISA試劑盒可以對六項腫瘤標志物進行檢測，不僅縮短了檢測時間，且一次性檢出，控制了單項檢測的成本[14]。Array-ELISA的檢測原則是在相互無影響的基礎上，將腫瘤標志物抗體等多類特異性生物活性物以固定的微陣列方式排列在每個微孔板板孔中，當血漿內抗原/抗體特異性結合于包被抗體/抗原后，再結合于酶標抗體而形成免疫復合物，添加發光液，由生物芯片分析，繼而獲取到多項定量檢測指標。本研究采用Array-ELISA技術對CRC患者的六項腫瘤標志物進行檢測，結果顯示CRC組血清CEA、AFP、CA199及CA125水平均高于良性組與對照組(P<0.05)。3組PSA與CA153水平對比差異無統計學意義(P>0.05)。同時，本研究采用Logistic回歸分析，擬合最佳回歸曲線與ROC曲線，觀察六項腫瘤標志物聯合診斷CRC的效果，以及特異度、靈敏度及準確率。結果提示，單項檢測中CEA(AUC=0.916,P=0.001)具有最高的診斷價值，說明CEA是CRC診斷的最佳單項標志物，這與部分研究結果相符[15]。采用聯合檢測時，Logistic回歸分析所得出的預測變量PRE面積為0.932，均高于單項指標檢測。此結果可見，聯合檢測能夠有效提高CRC的診斷效能。此外，本組CRC患者中的CEA特異度、靈敏度與準確率在單項中最高，聯合檢測中Logistic回歸預測變量PRE的特異度、靈敏度與準確率高于CEA(P<0.05)，進一步說明聯合檢測利于CRC的檢出。

總之，Array-ELISA對CRC患者六項腫瘤標志物均有理想的檢測效果，但單項腫瘤標志物診斷CRC的特異度、靈敏度具有一定的局限性，六項指標聯合檢測可以有效提高CRC的檢出率。臨床可以通過六項腫瘤標志物結合影像學及個體情況對CRC患者進行綜合評價，以便提高診療效果。

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ClinicalvalueofArray-ELISAindetectingsixtumormarkersindiagnosisofcolorectalcancer

FU Gui-xia

(DepartmentofLaboratory,QingdaoNinthPeople’sHospital,Qingdao266002,Shandong,China)

Objective：To evaluate the clinical value of Array-ELISA in the detection of six tumor markers in colorectal cancer (CRC).Methods49 cases of CRC patients as CRC group,19 cases of benign lesions were selected for colorectal surgery as the benign group,71 healthy subjects another same medical examination as the control group.The venous blood of three groups of patients was collected,and six tumor markers (AFP,CEA,PSA,CA125,CA153 and CA199) were detected by Array-ELISA technique.The serum markers of six tumor markers,the results of CRC,ROC and AUC in the three groups were observed and compared,and the parameters related to PRE and 6 tumor markers in group CRC were observed.ResultsThe serum CEA,CRC,CA199 and CA125 levels in CRC group were higher than those of benign group and control group (P<0.05).There was no significant difference between the three groups of PSA and CA153 (P>0.05).The single detection of CEA (AUC=0.916,P=0.001) had the highest diagnostic value of the Logistic regression model to establish the area for the PRE 0.932,were higher than the single index detection.The patients with CRC CEA in specificity,sensitivity and accuracy was the highest in the individual,combined detection in Logistic regression prediction variable PRE specificity,sensitivity and accuracy was higher than that of CEA (P<0.05).ConclusionArray-ELISA marker detection effect has the ideal of CRC patients with six tumor,but single tumor marker specificity and sensitivity has certain limitations,combined detection of six indexes can effectively improve the detection rate of CRC.

Array-ELISA;Six tumor markers;Colorectal cancer;Clinical value

10.3969/j.issn.1005-3697.2017.05.038

2017-05-14

傅桂霞(1971-)，女，主管檢驗師。E-mail：fuguixia71@126.com

時間： 2017-10-10 02∶28

http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20171010.0228.078.html

1005-3697(2017)05-0781-04

R735.3

A

(學術編輯廖濤)

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