高效液相色譜、|示差折光測定糯米藕中果糖和葡萄糖含量

李紅梅　尤繼明　韓華　楊抗震

摘要：建立了高效液相色譜＼|示差折光測定糯米藕中果糖和葡萄糖含量的實驗方法。色譜柱采用Waters NH2柱（250 mm×4.6mm，5 μm），以乙腈∶水=80∶20為流動相，采用示差折光檢測器測定糯米藕中果糖和葡萄糖的含量。果糖和葡萄糖的線性范圍為2～40 mg/mL，檢出限為0.5 mg/mL，加標回收率為97.46%～101.32%，相對標準偏差1.81%～2.52%。該方法簡單、快速、準確、重現性好，適用于糯米藕中果糖和葡萄糖的定量分析。

關鍵詞：糯米藕；葡萄糖；果糖；高效液相色譜；示差折光檢測

中圖分類號：TS207.3

文獻標識碼：A文章編號：16749944（2017）18022102

1引言

糯米藕又稱蜜汁藕、桂花糯米藕、香糯蓮藕等，是江蘇省地方傳統特色食品之一，也是特色加工農產品之一。糯米藕是以鮮藕為主要原料，配以水、糯米、白砂糖、桂花等輔料，經清洗、切節、灌糯米，蒸煮或不蒸煮，切片或不切片，包裝、高溫殺菌等等工序制成的蓮藕制品，以其香甜、香氣濃郁而享有口碑，是我國特有的傳統食品之一，深受人們的喜愛，而其中的果糖和葡萄糖＼[1，2＼]含量還未見報道。目前，文獻報道的還原糖的分析方法有滴定法、光度法＼[3～5＼]、毛細管電泳法＼[6＼]、離子色譜法＼[7～9＼]、液相色譜法＼[10～18＼]、質譜法＼[19＼]等。示差折光檢測器（Refractive Index Detector）是一種高度穩定和靈敏的液相色譜和凝膠滲透色譜檢測器，可用于檢測在紫外光范圍內吸光度不高的化合物，如聚合物、糖、有機酸和甘油三酸酯。因此，本研究應用高效液相色譜＼|示差折光方法對糯米藕中果糖和葡萄糖含量的測定進行了探究。

2材料與方法

2.1材料和儀器

糯米藕（企業提供）、果糖 葡萄糖；乙腈（色譜純），Tedia公司；實驗用水，超純水。

E2695/2414液相色譜＼|示差折光檢測器，Waters公司；Synergy超純水機，美國密理博公司；BSA224S電子天平，Sartorius公司。

2.2實驗方法

2.2.1色譜條件選擇

色譜柱：Waters NH2柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈∶水=80∶20；檢測池溫度：40℃；柱溫：40℃；進樣量10 μL；流速1.0 mL/min。

色譜柱方面，實驗選擇了C18和NH2柱，因為這兩種柱子在實驗室中比較常見，是分析實驗中常用柱子。實驗中發現糖在C18柱子中不會被保留，只有在氨基柱子上能夠分離分析出，所以在實驗中選擇了氨基柱作為分析實驗用柱。流動相的選擇中，在乙腈∶水=80∶20時候，標準品達到很好的基線分離。

2.2.2標準溶液配制

準確稱取果糖和葡萄糖標準品，用流動相溶解分別配制成2、5、10、20、40 mg/mL的混標溶液，搖勻，經0.45 μm 濾膜過濾，取濾液備用，作為標準品溶液。

2.2.3樣品溶液配制

糯米藕樣品粉碎勻漿后，稱取糯米藕5 g，置于100 mL燒杯中，加入30 mL水，用玻璃棒攪拌使試樣完全溶解，轉移至100 mL容量瓶中，然后再用10 mL水洗燒杯三次并轉移至上述100 mL容量瓶中，用流動相定容，搖勻，經0.45 μm濾膜過濾，取濾液作為樣品溶液。

3結果與討論

3.1線性關系的考察

精密吸取兩種糖混合標準溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以對照品峰面積為縱坐標，以對照品溶液濃度（mg/mL）為橫坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程跟相關系數見圖1。兩種糖在2～40 mg/mL之間線性關系良好。并以信噪比等于3為標準，測得果糖跟葡萄糖的檢出限為0.5 mg/mL。

3.2精密度試驗

精密吸取混合標準品溶液10 μL重復進樣6次，記錄色譜圖峰面積，并測定峰面積的平均值和相對標準偏差，測定結果見表1。連續6次實驗結果顯示，果糖和葡萄糖精密度實驗相對標準偏差為0.17%、0.08%，本實驗測定果糖和葡萄糖精密度良好，具有良好的準確度。

3.3重復性實驗

取同一樣品，按照供試樣品溶液制備方法重復測定6次，記錄色譜圖，測定結果見表2。

結果表明，重復性實驗果糖相對標準偏差為0.99%，葡萄糖相對標準偏差為0.84%。用該方法測果糖和葡萄糖含量重復性良好。

3.4回收率實驗

在上述優化好的條件下，分別在糯米藕樣品中添加標樣，進行添加回收率和精密度實驗。測定結果見表3，回收率在97.46%～101.32%之間，重復測定7次，計算各組分的相對標準偏差在1.81%～2.52%之間。表明高效液相色譜＼|示差折光法能夠滿足實際樣品的測定需求。

3.5樣品測定

取6批糯米藕按2.3.3方法制備樣品溶液，精密吸取樣品供試液10μL，標準品混合溶液10 μL，分別注入高效液相色譜儀，以外標法計算含量，見表4，樣品中果糖跟葡萄糖含量見表4。果糖和葡萄糖標準品及樣品的HPLC色譜圖見圖2，3，從圖中可知通過上述條件標準品和樣品都能夠達到很好的基線分離，果糖和葡萄糖出峰時間分別在6.5 min和7.0 min左右，結果令人滿意。

4結論

采用高效液相色譜＼|示差折光方法來測定糯米藕中果糖和葡萄糖含量，對實驗條件進行了優化，色譜柱采用Waters NH2柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈∶水=80∶20為流動相分離效果較好，并對該條件了進行了實驗方法的考察和實際樣品的測定，結果表明該法穩定、準確、快速，適用于糯米藕中果糖和葡萄糖的含量測定。endprint

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Separation and Identification of Fructose and Glucose

in Lotus Root Filled With Sticky Rice by High Performance

Liquid Chromatography-Refractive Index Detector

Li Hongmei1，2， You Jiming1，2， Han Hua1，2， Yang Kangzhen1，2

（1.National Organic Food Quality Supervision and Inspection Institute， Baoying 225800， China；

2.Baoying Products Quality Supervision and Inspection Institute， Baoying 225800， China）

Abstract： This paper established a high performance liquid chromatography method for separation and determination of fructose and glucose in Lotus Root filled with Sticky Rice. The analytical column was Waters NH2 （ 250mm×4.6mm， 5μm）.The mobile phase was acentonitrile-water （80：20， V/V）. The samples were determined by a refractive index detector. The calibration curves had good linearity in the range of 2～40mg/mL for fructose and glucose.The detection limit for fructose and glucose were 0.5 mg/Ml.The average recoveries of fructose and glucose were 97.46%～101.32% and theRSD was 1.81%～2.52%. The method was convenient， rapid and effective， which is suitable for qualitatively analysis of fructose and glucose in lotus root filled with sticky rice.

Key words： lotus root filled with sticky rice； fructose； glucose； HPLC； Refractive Index Detectorendprint