miRNA-506在漿液性卵巢癌組織中的表達及臨床意義

李明娥,陳遞林,鄭華珠,馬利國,蔡如玉,邵 茵,宋振坤

(暨南大學第二臨床醫學院,深圳市人民醫院婦科,深圳 518020;*通訊作者,E-mail:dilin-c@163.com)

miRNA-506在漿液性卵巢癌組織中的表達及臨床意義

李明娥,陳遞林*,鄭華珠,馬利國,蔡如玉,邵 茵,宋振坤

(暨南大學第二臨床醫學院,深圳市人民醫院婦科,深圳 518020;*通訊作者,E-mail:dilin-c@163.com)

目的 探討miRNA-506在漿液性卵巢癌中的表達及臨床意義。 方法 采用qRT-PCR方法檢測43例漿液性卵巢癌組織及10例良性漿液性卵巢腫瘤組織中miRNA-506的表達水平,并分析其與臨床病理指標的關系。 結果 ①漿液性卵巢癌組織中miRNA-506的相對表達量顯著低于良性漿液性卵巢腫瘤組織中的表達量(P<0.01)。②Ⅲ-Ⅳ期漿液性卵巢癌組織中miRNA-506相對表達量顯著低于Ⅰ-Ⅱ期者(P<0.01);高級別漿液性卵巢癌組織中miRNA-506相對表達量顯著低于低級別者(P<0.01);有淋巴結轉移者miRNA-506相對表達量顯著低于無淋巴結轉移者(P<0.01);CA125>500 U/ml者miRNA-506相對表達量顯著低于CA125≤500 U/ml者(P<0.01)。 結論 漿液性卵巢癌組織中miRNA-506呈低表達狀態,miRNA-506表達下降與漿液性卵巢癌的發生發展及侵襲轉移密切相關。

漿液性卵巢癌; miRNA-506; qRT-PCR

卵巢癌死亡率居女性生殖道常見腫瘤之首。而漿液性卵巢癌(serous ovarian cancer,SOC)為最常見的類型。由于卵巢解剖位置在盆腔深部,起病隱匿,早期無特異性癥狀與體征,約70%的患者發現時已屬晚期,預后極差。近年來雖有新的化療藥物的應用,但5年生存率仍然無明顯改善,嚴重威脅著女性健康。因此,從分子水平探討其發病機制有極其重要的臨床意義。

微小RNA(microRNA或miRNA)為一類非編碼小RNA,具有高度保守性、組織特異性和時序性。研究證實miRNAs在腫瘤的形成、發展、侵襲及轉移等方面發揮著十分重要的作用[1,2]。有研究顯示miRNA-506在大腸癌、宮頸癌細胞中呈低表達狀態[3,4],目前,有關miRNA-506在漿液性卵巢癌中的研究報道尚缺乏、機制不明。

本研究擬通過采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)方法檢測良性漿液性卵巢腫瘤組織及漿液性卵巢癌組織中miRNA-506的表達水平,并分析其與卵巢癌臨床病理指標之間的關系，以探討miRNA-506在漿液性卵巢癌發生發展中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.2 實驗試劑

TRIGene總RNA提取試劑購自美國GenStar公司,Goscript Reverse Transcription System、GoTaqQpcr Master Mix購自美國Promega公司。miRNA-506莖環逆轉錄引物購自廣州賽哲生物公司,上游引物5′-TGGTGTCGTGGAGTCGGC-3′,下游引物5′-CCGCCTATTCAGGAAGGTGTTAC-3′,U6內參的上游引物5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′,下游引物5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。

1.3 實驗方法

1.3.2 qRT-PCR檢測miRNA-506的表達 取1 μg總RNA行逆轉錄反應(嚴格按照Goscript Reverse Transcription System試劑說明操作),反應條件為:42 ℃60 min,70 ℃ 5 min。PCR擴增條件為:95 ℃變性10 min,95 ℃15 s,60 ℃30 s,72 ℃15 s,40個循環。記錄每個反應管中的熒光信號到達設定閾值的循環數即Ct值,實驗結果采用qRT-PCR中的相對定量法進行分析,以2-ΔΔCt來表示miRNA-506的相對表達量,其中ΔΔCt=(CtmiRNA-506-CtU6)卵巢癌-(CtmiRNA-506-CtU6)卵巢良性腫瘤,根據2-ΔΔCt進行統計分析,比較各組間miRNA-506的表達差異。所有的實驗至少重復3次,取平均值。

1.4 統計學分析

因數據呈明顯偏態分布,采用兩獨立樣本比較的Wilcoxon秩和檢驗分析,miRNA-506相對表達量以平均秩表示,P<0.01為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 漿液性卵巢癌及良性漿液性卵巢腫瘤miRNA-506的表達比較

漿液性卵巢癌組織中miRNA-506相對表達量為19.74,良性漿液性卵巢腫瘤組織中miRNA-506相對表達量為33.22。漿液性卵巢癌組織中miRNA-506的相對表達量低于良性漿液性卵巢腫瘤(Z=2.81,P=0.004<0.01)。

2.2 漿液性卵巢癌組織中miRNA-506表達與臨床病理指標的關系

卵巢癌組織不同的FIGO分期及組織學分級中,miRNA-506表達量不同,其中Ⅲ期和Ⅳ期中miRNA-506的相對表達量明顯低于Ⅰ期和Ⅱ期(P<0.01);在高級別癌組織中miRNA-506相對表達量明顯低于低級別癌組織(P<0.01)。而且miRNA-506的表達還與淋巴結轉移、CA125水平密切相關,有淋巴結轉移組miRNA-506相對表達量明顯低于無淋巴結轉移組(P<0.01);CA125>500U/ml組患者miRNA-506相對表達量低于CA125≤500 U/ml組(P<0.01,見表1)。

表1漿液性卵巢癌組織miRNA-506的表達與臨床病理指標的關系比較

Table1CorrelationofmiRNA-506expressionwithclinicalparametersinserousovariancancer

臨床病理指標nmiRNA?506相對表達量(平均秩)ZPFIGO分期3500000 Ⅰ-Ⅱ212886 Ⅲ-Ⅳ221545組織學分級3490000 高級別301185 低級別132640淋巴結轉移3110001 有101120 無332527CA125水平3290001 ≤500U/ml292638 >500U/ml141293

3 討論

微小RNA(microRNA)是近年來發現的一類非編碼單鏈小RNA,首次報道見于1994年Lee對新秀麗線蟲的研究。miRNA作為一類具有21-25個核苷酸單鏈非編碼小RNA,通過對目標基因的轉錄后調控,參與細胞生長、增殖、分化、凋亡等生命過程[5]。近年來,研究發現多種miRNA在腫瘤發生、發展、侵襲與轉移等過程中起著十分重要的調控作用,miRNA異常表達與惡性腫瘤的發生發展密切相關,根據其調控的靶基因不同,其在惡性腫瘤中發揮著抑癌基因或癌基因的作用[6]。

miRNA-506是目前新發現的miRNA之一,在調節細胞增殖、分化、遷移和侵襲中起著關鍵作用。有研究報道，在靈長類動物的睪丸中證實miRNA-506是X染色體連鎖的10個miRNA簇中的一種,整個miRNA簇在靈長類物種之間具有高度保守性[7,8]。Yang等[9]研究報道miRNA-506在腎透明細胞癌標本中的表達顯著下調,通過靶向負調控FLOT1表達,從而抑制細胞生長和轉移,miRNA-506低表達與其晚期臨床分期及極差的預后相關。MiRNA-506在乳腺癌和乳腺癌癌旁正常組織與非惡性乳腺上皮細胞表達相比是普遍下調的,在乳腺癌細胞中,過表達miRNA-506通過靶向抑制YAP表達破壞細胞周期,抑制細胞增殖和轉移的能力[10,11]。MiRNA-506在結腸癌組織細胞中呈低表達狀態,高表達miRNA-506的患者預后良好[12]。

本研究結果顯示與良性漿液性腫瘤組織相比,漿液性卵巢癌組織中miRNA-506的表達顯著下調,在Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌組織中miRNA-506相對表達量明顯低于Ⅰ/Ⅱ期癌組織;在高級別癌組織中其相對表達量明顯低于低級別卵巢癌組織;有淋巴結轉移的患者miRNA-506相對表達量明顯低于無淋巴結轉移的患者;在CA125>500 U/ml組中其相對表達量明顯低于CA125≤500 U/ml組。該研究結果表明,miRNA-506表達與漿液性卵巢癌的臨床病理指標關系密切,與疾病進展呈負相關,與患者血清CA125水平呈負相關。由此推測miRNA-506表達缺失可能與漿液性卵巢癌的發生發展密切相關,其可能發揮抑癌基因的作用,從基因調控水平為漿液性卵巢癌的發病機制提供理論依據和方向;miRNA-506的表達水平與漿液性卵巢癌的惡性程度相關,提示miRNA-506可能是影響漿液性卵巢癌患者預后的因素之一,可能為判斷漿液性卵巢癌患者預后的潛在預測標志物;miRNA-506表達水平與患者血清CA125水平呈負相關,為漿液性卵巢癌尋找新的診斷標志物提供了新思路。

[1] Wang R, Wang Z X, Yang JS,etal. MicroRNA-451 functions as a tumor suppressor in human non-small cell lung cancer by targeting ras-related protein 14 (RAB14)[J].Oncogene,2011,30(23): 2644-2658.

[2] Deng M, Tang H, Zhou Y,etal. miR-216b suppresses tumor growth and invasion by targeting KRAS in nasopharyngeal carcinoma[J]. J Cell Sci, 2011, 124(Pt 17): 2997-3005.

[3] Zu C, Liu T, Zhang G. MicroRNA-506 inhibits malignancy of colorectal carcinoma cells by targeting LAMC1[J]. Ann Clin Lab Sci, 2016, 46(6): 666-674.

[4] Zhang M, Xu Q, Yan S,etal. Suppression of forehead box Q1 by microRNA-506 represses the proliferation and epithelial-mesenchymal transition of cervical cancer cells[J]. Oncol Rep,2016,35(5): 3106-3114.

[5] Xie H, Lee L, Scicluna P,etal. Novel functions and targets of miR-944 in human cervical cancer cells[J]. Int J Cancer,2015,136(5): E230-E241.

[6] Chen XP, Chen YG, Lan JY,etal. MicroRNA-370 suppresses proliferation and promotes endometrioid ovarian cancer chemosensitivity to cDDP by negatively regulating ENG[J]. Cancer Lett,2014,353(2): 201-210.

[7] Zhang R, Peng Y, Wang W,etal. Rapid evolution of an X-linked microRNA cluster in primates[J]. Genome Res, 2007, 17(5): 612-617.

[8] Li J, Liu Y, Dong D,etal.Evolution of an X-linked primate-specific microRNA cluster[J]. Mol Biol Evol, 2010,27(3): 671-683.

[9] Yang FQ, Zhang HM, Zhang HM,etal. MiR-506 is down-regulated in clear cell renal cell carcinoma and inhibits cell growth and metastasis via targeting FLOT1[J]. PLoS One,2015,10(3): e0120258.

[10] Yu F, Lv M, Li D,etal. MiR-506 Over-Expression Inhibits Proliferation and metastasis of breast cancer cells[J]. Med Sci Monit, 2015,21: 1687-1692.

[11] Hua K, Yang W, Song H,etal. Up-regulation of miR-506 inhibits cell growth and disrupt the cell cycle by targeting YAP in breast cancer cells[J]. Int J ClinExp Med,2015,8(8):12018-12027.

[12] Zhang Y, Lin C, Liao G,etal. MicroRNA-506 suppresses tumor proliferation and metastasis in colon cancer by directly targeting the oncogene EZH2[J]. Oncotarget, 2015, 6(32): 32586-32601.

ExpressionofmiRNA-506inserousovariancanceranditsclinicalsignificance

LI Ming’e,CHEN Dilin*,ZHENG Huazhu,MA Liguo,CAI Ruyu,SHAO Yin,SONG Zhenkun

(DepartmentofGynecology,ShenzhenPeople’sHospital,SecondClinicalMedicalCollegeofJinanUniversity,Shenzhen518020,China;*Correspondingauthor,E-mail:dilin-c@163.com)

ObjectiveTo explore the expression of miRNA-506 in serous ovarian cancer and its clinical significance.MethodsThe expression of miRNA-506 in 43 cases of serous ovarian cancer tissues and 10 cases of benign serous ovarian tumors tissues were detected by quantitative real-time polymerase chain reaction, and the difference of miRNA-506 expression was analyzed in patients with different clinical-pathological features.Results①The expression of miRNA-506 in serous ovarian cancer was significantly lower than that in benign serous ovarian tumors(P<0.01).②The expression of miRNA-506 in type Ⅲ/Ⅳ serous ovarian cancer tissue was significantly lower than that in type Ⅰ/Ⅱ group(P<0.01). The expression of miRNA-506 in high grade ovarian cancer was significantly lower than that in low grade group(P<0.01). The expression of miRNA-506 in patients with lymph node metastasis was significantly lower than that in patients without lymph node metastasis(P<0.01). The expression of miRNA-506 in CA125>500 U/ml group was lower than that in CA125≤500 U/ml group(P<0.01).ConclusionThe expression of miRNA-506 in serous ovarian cancer is low, which may be associated with the tumor growth, development, invasion, metastasis of serous ovarian cancer.

serous ovarian cancer; miRNA-506; qRT-PCR

R737.31

A

1007-6611(2017)09-0954-03

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.09.020

深圳市科技研發基金資助項目(JCYJ20140416122811949)

李明娥,女,1966-12生,博士,主任醫師,E-mail:mingeli007@126.com

2017-06-15