竺黃醒腦膠囊抗血栓形成作用的實驗研究※

李寶芬 閆國強 董晶晶

(河北省滄州中西醫結合醫院中藥制劑室，河北 滄州 061001)

竺黃醒腦膠囊抗血栓形成作用的實驗研究※

李寶芬 閆國強 董晶晶

(河北省滄州中西醫結合醫院中藥制劑室，河北 滄州 061001)

目的研究竺黃醒腦膠囊對血栓形成的抑制作用，為臨床應用提供理論依據。方法采用角叉菜膠致大鼠血栓形成模型和實驗性腦血栓形成模型，分別觀察竺黃醒腦膠囊的相關藥理作用。結果大鼠皮下注射角叉菜膠后，多數大鼠的尾尖部在24 h內出現黯紅色血栓形成區，并逐漸向尾根部擴大，24～48 h顏色加深變黑，且與正常尾部分界明顯。模型1組大鼠黑尾長度較正常1組增加(P<0.05)，說明造模成功。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組黑尾長度均低于模型1組(P<0.05，P<0.01)，說明給藥治療有效。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組兩兩比較差異均無統計學意義(P>0.05)。模型1組大鼠血液流變學指標均較正常1組升高(P<0.05)，說明造模成功。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組血液流變學指標均低于模型1組(P<0.05，P<0.01)，說明給藥治療有效。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組兩兩比較差異均無統計學意義(P>0.05)。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量2組及阿司匹林2組吸光度(OD)/腦質量均低于模型2組(P<0.05，P<0.01)，說明給藥治療有效。竺黃醒腦膠囊小劑量2組OD/腦質量高于阿司匹林2組(P<0.05)，竺黃醒腦膠囊中、大劑量2組及阿司匹林2組OD/腦質量兩兩比較差異均無統計學意義(P>0.05)。結論竺黃醒腦膠囊對血栓形成有一定的抑制作用，研究結果為臨床用藥提供了必要的藥理學依據。

血栓形成；藥物療法；中藥療法；膠囊；動物，實驗

竺黃醒腦膠囊是河北省滄州中西醫結合醫院腦病科應用多年的方劑，由天竺黃、石菖蒲、清半夏、郁金、地龍、川芎、赤芍、薏苡仁等組成，具有滌痰散濁、活血祛毒功效，用于痰濁內蘊、瘀血阻絡所致半身不遂，舌強語謇，肢體麻木，口眼歪斜，體胖有痰，或伴見昏沉不適，視物模糊，納差惡心，口中黏膩，舌質黯紅、苔黃膩、脈弦滑或弦澀等癥；腦梗死或腦出血恢復期見上述證候者。經多年臨床應用，取得了較好的臨床療效。本實驗以角叉菜膠致大鼠血栓形成和實驗性腦血栓形成為模型，觀察竺黃醒腦膠囊抑制血栓形成的作用，旨在為竺黃醒腦膠囊的臨床應用提供合理的科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 Wistar大鼠(清潔級)120只，雄性，體質量230～250 g，由河北省滄州中西醫結合醫院動物實驗中心提供，動物合格證號：1303083。動物飼料為消毒飼料，墊料為消毒墊料，亦由該動物實驗中心提供。實驗室使用許可證號：SYXK(冀)2011-0047，動物室環境：室溫為20～23 ℃，相對濕度為40%～60%。

1.1.2 實驗藥物和試劑 竺黃醒腦膠囊，由河北省滄州中西醫結合醫院提供，規格為每粒裝0.5 g，批號120103。用蒸餾水制成相當于所需含生藥濃度的混懸液備用。臨床成人體質量按70 kg計，每日用量7.5 g，即0.107 g/kg。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量組為0.38、0.76、1.52 g/kg，分別相當于臨床用藥的3.5、7、14倍。阿司匹林腸溶片(山西太原藥業有限公司，國藥準字H14021955)，臨床成人體質量按70 kg計，每日用量150 mg,即2.14 mg/kg。大鼠用量按相當于臨床用藥的7倍計算，即15 mg/kg。角叉菜膠(Sigma公司，批號：110506)；鹽酸腎上腺素注射液(天津金耀氨基酸有限公司，國藥準字H12020526)；凝血酶(天津金耀氨基酸有限公司，批號1110211)；二磷酸腺苷(ADP，Sanland chemicai CO.LTD)；伊文思蘭(美國Fluka公司)。水合氯醛(天津市大茂化學試劑廠)；硫酸鈉(Na2SO4，天津市天大化學試劑廠)；丙酮(天津市天力化學試劑有限公司)。

1.1.3 儀器 全自動血流變分析儀(LBY-N7500B型，北京普利生儀器有限公司)；得力6220直尺(得力集團有限公司)；可調電動勻漿機(FS-1型，常州華冠儀器制造有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 竺黃醒腦膠囊對角叉菜膠致大鼠血栓形成的影響

1.2.1.1 動物選擇及分組 將60只Wistar大鼠隨機分為6組，正常1組、模型1組、阿司匹林1組及竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組，每組10只。

1.2.1.2 模型制備及給藥方法 阿司匹林組(0.015 g/kg)及竺黃醒腦膠囊小(0.38 g/kg)、中(0.76 g/kg)、大(1.52 g/kg)劑量1組連續灌胃給藥14 d，每日1次，容積為1 mL/100 g體質量，正常1組及模型1組予等容積純凈水。末次給藥前48 h，除正常1組外，其余各組大鼠足跖部皮下注射1%角叉菜膠(0.05 mL/100 g體質量)誘發大鼠血栓形成[1]。

1.2.1.3 觀察指標及方法 末次給藥后40 min，測量黑尾長度，腹主動脈取血，檢測血液流變學指標(紅細胞聚集指數、全血黏度)。

1.2.2 竺黃醒腦膠囊對實驗性腦血栓形成的影響

1.2.2.1 動物選擇及分組 將60只Wistar大鼠隨機分為6組，正常2組、模型2組、阿司匹林2組及竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量2組，每組10只。

1.2.2.2 模型制備及給藥方法 阿司匹林2組(0.015 g/kg)及竺黃醒腦膠囊小(0.38 g/kg)、中(0.76 g/kg)、大(1.52 g/kg)劑量2組連續灌胃給藥7 d，每日1次，容積為1 mL/100 g體質量，正常2組及模型2組予等容積純凈水。末次給藥后40 min，分別腹腔注射10%水合氯醛麻醉，仰位固定，頸部正中切口，分離結扎右側頸外動脈，于右側頸總動脈遠心方向插入三通管。阿司匹林2組及竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量2組大鼠經三通管注入血栓誘導劑[ADP(1.25 mmol/L)：凝血酶(12.5 U/mL)：鹽酸腎上腺素注射液(1 mg/mL)按照100∶200∶5的比例]0.1 mL/100 g體質量，模型2組大鼠注入等容積0.9%氯化鈉注射液，正常2組注入等容積0.9%氯化鈉注射液。5 min后，注入0.2%伊文思蘭0.5 mL/100 g體質量，再過5 min，迅速斷頭，取兩大腦半球，稱質量，置勻漿器中，加入0.5% Na2SO4溶液3 mL及丙酮7 mL，制成勻漿，密封放置60 min以上，3 000 r/min離心10 min，取上清液，以0.9%氯化鈉注射液調零，在620 nm處測吸光度(OD)。

1.2.2.3 觀察指標及方法 以OD/腦質量表示伊文思蘭的含量，以此表示腦血栓的嚴重程度[2]。

2 結 果

2.1 各組大鼠黑尾長度比較 大鼠皮下注射角叉菜膠后，多數大鼠的尾尖部在24 h內出現黯紅

色血栓形成區，并逐漸向尾根部擴大，24～48 h顏色加深變黑，且與正常尾部分界明顯。各組大鼠黑尾長度比較見表1。

組 別n劑量(g/kg)黑尾長度正常1組10——模型1組10—3．2±1．08?竺黃醒腦膠囊小劑量1組100．381．9±0．61△△竺黃醒腦膠囊中劑量1組100．761．5±0．36△△竺黃醒腦膠囊大劑量1組101．521．8±0．95△阿司匹林1組100．0151．6±0．58△△

與正常1組比較，*P<0.05；與模型1組比較，△P<0.05，△△P<0.01

由表1可見，模型1組大鼠黑尾長度較正常1組增加(P<0.05)，說明造模成功。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組黑尾長度均低于模型1組(P<0.05，P<0.01)，說明給藥治療有效。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組兩兩比較差異均無統計學意義(P>0.05)。

2.2 各組大鼠血液流變學指標變化比較 見表2。

組 別n劑量(g/kg)紅細胞聚集指數全血黏度(低切)(mPa·s)全血黏度(中切)(mPa·s)全血黏度(高切)(mPa·s)正常1組10—1．99±0．128．31±0．914．93±0．394．17±0．27模型1組10—3．07±0．22?22．53±2．23?10．05±0．59?7．34±0．40?竺黃醒腦膠囊小劑量1組100．382．53±0．15△△12．94±1．62△△6．79±0．62△△5．11±0．40△△竺黃醒腦膠囊中劑量1組100．762．46±0．10△△12．18±1．28△△6．35±0．42△△4．95±0．38△△竺黃醒腦膠囊大劑量1組101．522．44±0．11△△12．49±0．94△△6．47±0．50△△5．12±0．39△△阿司匹林1組100．0152．34±0．13△△12．72±1．10△6．57±0．42△△5．44±0．35△△

與正常1組比較，*P<0.05；與模型1組比較，△P<0.05，△△P<0.01

由表2可見，模型1組大鼠血液流變學指標均較正常1組升高(P<0.05)，說明造模成功。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組血液流變學指標均低于模型1組(P<0.05，P<0.01)，說明給藥治療有效。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量1組及阿司匹林1組兩兩比較差異均無統計學意義(P>0.05)。

2.3 各組大鼠OD/腦質量比較 見表3。

由表3可見，注入血栓誘導劑后，腦勻漿上清液吸收度增大，說明伊文斯蘭通過血腦屏障滲入腦實質的量增加，造模成功。正常組注入0.9%氯化鈉注射液，無血栓形成，腦勻漿上清液中幾乎檢測不到伊文斯蘭的吸收度。竺黃醒腦膠囊小、中、大劑量2組及阿司匹林2組OD/腦質量均低于模型組(P<0.05，P<0.01)，說明給藥治療有效。竺黃醒腦膠囊小劑量2組OD/腦質量高于阿司匹林2組(P<0.05)，竺黃醒腦膠囊中、大劑量2組及阿司匹林2組OD/腦質量兩兩比較差異均無統計學意義(P>0.05)。

組 別n劑量(g/kg)OD/腦質量正常2組10——模型2組10—0．194±0．0260竺黃醒腦膠囊小劑量2組100．380．163±0．0255?△竺黃醒腦膠囊中劑量2組100．760．104±0．0371??竺黃醒腦膠囊大劑量2組101．520．125±0．0354??阿司匹林2組100．0150．075±0．0354??

與模型2組比較，*P<0.05，**P<0.01；與阿司匹林2組比較，△P<0.05

3 討 論

中醫學認為，機體在臟腑陰陽失調的基礎上，加之勞倦內傷、憂思惱怒、飲酒飽食、勞逸過度，致使瘀血阻滯，痰瘀互結，氣血失和，從而腦脈痹阻，發為中風。近年來，我們根據老年病的病變特點及腦系疾病的病理生理基礎，結合大量的臨床實踐經驗，提出了對中風發病機制的新認識，并形成了一套治療中風的新思路與新方法。我們認為中風病位在腦，痰濁瘀毒是中風發生發展的主要病理機制。腦為髓之海，髓乃津液所化生，故腦病多為津液病。津液運化失常，則化生水濕，水濕久之，蘊結不散，釀生痰濁，痰濁既生，毒易相兼。濁毒客腦，擾于血循，凝滯不暢，壅塞為瘀。腦處極頂，氣血斡旋，易郁多滯。氣郁清竅，血滯脈絡，互助為虐。血瘀脈絡，水津不布，蓄淀成濁。人至老年，腎氣漸衰，腎內寓元陽，為陽氣之本，元陽不足，濁瘀則無以消散。濁瘀相兼，互為因果，蒙蔽清竅，敗壞腦絡。滌痰散濁、活血祛毒法是根據中風的痰濁瘀毒病理機制而制定的中醫治療方法。

竺黃醒腦膠囊選方使用具有滌痰散濁、活血祛毒功效的常用中藥酌定劑量后合理配伍而成，主要有天竺黃、石菖蒲、清半夏、郁金、地龍、川芎、赤芍、薏苡仁、茯苓、鹽澤瀉、梔子、防風等。現代藥理研究表明，天竺黃可顯著延長血漿復鈣時間，在血凝實驗中，該藥能延長凝血時間[3]；石菖蒲對心血管系統有保護作用，石菖蒲揮發油β-細辛醚在一定濃度下有使豚鼠冠狀血管擴張的作用，臨床常用于冠心病、肺心病等屬于痰濁氣滯之胸痹的治療，其機制可能與其能增加冠脈流量有關[4]。石菖蒲加冰片能降低血小板活化，有抗血小板黏附和聚集、抑制血栓形成的作用[5]；半夏有較明顯的抗心律失常作用，能顯著延長大鼠實驗性體內血栓形成時間，并有延長凝血時間的傾向[6]；郁金能降低紅細胞聚集性，提高紅細胞的變形能力及抗氧化免疫黏附能力，減少自由基對紅細胞膜的損傷，延長其壽命，維持正常的血液黏度[7]；地龍提取物可延長血栓形成時間，既抗凝又止血，還有明顯的降壓作用[8]；川芎對腦缺血、缺氧再灌注損傷及腦梗死損傷都具有保護作用，川芎嗪能改善微循環，增加腦皮質流量，促進神經系統恢復[9]；茯苓能保護免疫器官，增強機體免疫功能[10]；薏苡仁具有抗動脈血栓形成和抗凝血作用[11]；澤瀉具有利尿、降血糖、降血脂及抗動脈粥樣硬化作用[12]。近年來，隨著物質生活水平的提高和生活節奏的加快，冠心病、原發性高血壓、腦血管疾病的發病率大大提高，這些疾病的發生與血液流變學異常、血液黏度增加、紅細胞聚集能力增強等有關，我們綜合上述各單味藥的藥理作用及組方原理，根據疾病發生的有關影響因素，設計了竺黃醒腦膠囊的藥效學實驗模型。

本實驗結果顯示，竺黃醒腦膠囊可明顯減弱角叉菜膠引起的大鼠血栓，顯著降低血栓大鼠的紅細胞聚集指數及高、中、低切全血黏度，竺黃醒腦膠囊各劑量組均療效顯著，與陽性對照藥阿司匹林腸溶片達到相似的治療效果。在改善實驗性腦血栓的嚴重程度方面，竺黃醒腦膠囊小劑量組療效不如陽性藥阿司匹林腸溶片及竺黃醒腦膠囊中、大劑量組，提示竺黃醒腦膠囊對血栓形成有一定的抑制作用，建議臨床應用時的劑量參考竺黃醒腦膠囊中劑量。這一結果為臨床用藥提供了必要的藥理學依據。

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Experimentalstudyontheactionofanti-thrombosisofZhuhuang-xingnaocapsule

LIBaofen*,YANGuoqiang,DONGJingjing.*

PreparationRoomofChinesemedicine,CangzhouHospitalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicineinHebeiProvince,Hebei,Cangzhou061001

ObjectiveTo study the inhibitory effect of Zhuhuang-xingnao capsule on thrombosis for providing theoretical basis for clinical application.MethodsThe rats were treated with carrageen glue to induced thrombosis model and experimental cerebral thrombosis model, and the related pharmacological effects of Zhuhuang-xingnao capsule were observed respectively.ResultsAfter subcutaneous injection of carrageen glue, the tail tip of the majority of rats appeared a dark red thrombosis area within 24 h, and gradually expanded to the tail root, and the color deepened and darkened in 24～48 h with the normal tail boundaries clear. The length of black tail in model group 1 was higher than that in normal group 1 (P<0.05), which indicated that the model was successful. The length of black tail in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 1 and aspirin group 1 were shorter than that in model group (P<0.05,P<0.01), which indicated that the treatment was effective. There was no statistical difference among in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 1 and aspirin group 1 (P>0.05). The hemorheology indexes in model group 1 were higher than those in normal group (P<0.05), which indicated that the model was successful. The hemorheology indexes in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 1 and aspirin group 1 were lower than those in model group (P<0.05,P<0.01), which indicated that the treatment was effective. There was no statistical difference among in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 1 and aspirin group 1 (P>0.05). The optical density (OD)/brain mass in small,medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 2 and aspirin group 2 were lower than those in model group 2 (P<0.05,P<0.01), which indicated that the treatment was effective. The OD/brain mass in small dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 2 was higher than that in aspirin group 2 (P<0.05). There was no statistical difference among the medium and high dosage of Zhuhuang-xingnao capsule group 2 and aspirin group 2 (P>0.05).ConclusionZhuhuang-xingnao capsule has a certain inhibitory effect on thrombosis, and the results provide the necessary pharmacological basis for clinical medication.

Thrombosis; Pharmacotherapy; Traditional Chinese medicine therapy; Capsule; Animal; Experiment

R543.053；R-331；R283.65

A

1002-2619(2017)09-1364-05

2017-01-17)

(本文編輯：習 沙)

10.3969/j.issn.1002-2619.2017.09.022

※ 項目來源：國家中醫藥管理局關于全國中藥特色技術傳承人才培訓項目(編號：2015481601003)

李寶芬(1969—)，女，主任中藥師，學士。從事中藥新制劑的開發研究及中藥材鑒定工作。