腦心舒口服液中蜂王漿的質量分析研究

鄭艷青，張靜，任菲菲，閆雪，劉德麗

（山東省德州市食品藥品檢驗檢測中心，山東 德州 253015）

腦心舒口服液中蜂王漿的質量分析研究

鄭艷青，張靜，任菲菲，閆雪，劉德麗

（山東省德州市食品藥品檢驗檢測中心，山東 德州 253015）

目的：以腦心舒口服液中的蜂王漿為研究對象，建立腦心舒口服液中蜂王漿的質量評價方法。方法：采用薄層色譜法（TLC）對樣品中的蜂王漿進行定性鑒別；采用高效液相色譜法（HPLC）測定樣品中蜂王漿的10-羥基-2-癸烯酸含量。結果：樣品的薄層色譜斑點不一，10-羥基-2-癸烯酸含量在0.029mg/支～1.969mg/支。結論：各廠家生產所投藥材質量和數量差異較大。

腦心舒口服液；蜂王漿；10-羥基-2-癸烯酸；薄層色譜法；高效液相色譜法

腦心舒口服液由蜜環菌濃縮液和蜂王漿兩味藥組成，具有滋補強壯，鎮靜安神之功效，用于身體虛弱，心神不安，失眠多夢，神經衰弱，頭痛眩暈屬上述證候者[1]。腦心舒口服液為常用中成藥，生產企業共有109家，涉及批準文號109個[2]。質量標準收載于《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第二十冊，《國家中成藥標準匯編經絡肢體腦系分冊》，國家藥品監督管理局國家藥品標準WS3-B-3975-98-2002和WS-11356（ZD-1356）-2002。處方制法均一致，但各標準均不相同。各個標準都有10-羥基-2-癸烯酸的薄層鑒別項，但大部分企業執行的國家藥品標準WS3-B-3975-98-2002無成分含量測定項，不能夠保證產品質量。

蜂王漿中含有豐富的脂肪酸，具有活化細胞、促使傷口愈合、促進內分泌、增加食欲、增強體力、防治骨質疏松、延緩衰老、安神、抗菌、抗癌、抗輻射等多種生理活性，具有極高的醫藥和保健價值[3-7]，在本方中對藥品的療效起著至關重要的作用。蜂王漿的功效成分是10-羥基-2-癸烯酸[8]，至今未在自然界其他物質中發現此化合物[9]。本實驗對13個廠家生產的33批腦心舒口服液中的蜂王漿質量進行系統的研究，為標準的提高提供一定的依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Mettler XS105DU電子天平；LC-20A島津高效液相色譜儀、Kromasil C18色譜柱、SPD-20A紫外檢測器；Agilen1200高效液相色譜儀、Kromasil C18色譜柱、G1314B VWD檢測器。

1.2 試藥

10-羥基-2-癸烯酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110812-200506，純度97.6%），10-羥基-2-癸烯酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110812-201507，純度99.2%）；甲醇、乙腈為色譜純；無水乙醇、石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、冰醋酸、三氯甲烷、環己烷、磷酸為分析純，水為超純水。腦心舒口服液33批樣品，均為山東省17地市市售品種，來自13個不同生產企業。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 標準所用方法取樣品20 mL，加正丁醇10 mL、乙酸乙酯15 mL，密塞，振搖，靜置。取上清液，蒸干，加乙酸乙酯0.5 mL，溶解，作為供試品溶液。另取10-羥基-2-癸烯酸對照品適量，加乙酸乙酯制成每1 mL約含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2015年版四部通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（5∶1∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰[1]。結果見圖1。

2.1.2 修訂后所用方法將展開劑和顯色劑稍作調整，以石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯-冰醋酸(3∶1∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.2%高錳酸鉀溶液[10]。薄層色譜圖見圖2。

2.2 10-羥基-2-癸烯酸成分測定

2.2.1 色譜條件C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（22∶78），體積流量1.0 mL/min，柱溫30℃；檢測波長207 nm；進樣量10 μL。對照品、樣品及陰性對照的色譜圖見圖3。

圖1 標準方法-不同批次樣品色譜圖

圖2 修訂方法-不同批次樣品色譜圖

圖3 10-羥基-2-癸烯酸對照品、樣品及陰性對照色譜圖

2.2.2 溶液的制備對照品溶液的制備：精密稱取10-羥基-2-癸烯酸對照品10.02mg（純度97.60%），置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含97.80 μg的貯備液（10℃以下保存）。?供試品溶液的制備：取本品2 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至近刻度，超聲處理（功率300 W，頻率40 kHz）10 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 線性關系與檢出限精密量取10-羥基-2-癸烯酸對照品貯備液0.5，1，2，3，4 mL,分別置25 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10 μL，在色譜條件下依次進樣，以峰面積為縱坐標，對照品的濃度（μg/mL）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程，

Y＝44.175X－1.8902，r＝1.0000，線性范圍為1.9559～15.6472 μg/mL。按信噪比3∶1計，檢出限為78.2362 ng/mL。

2.2.4 精密度試驗精密吸取同一對照品溶液10 μL，按“2.2.1”項下色譜條件，連續進樣6次，記錄峰面積，RSD為0.16%，表明儀器精密度良好。

2.2.5 重復性試驗取同一批次樣品6份，按“2.2.2”項下制備供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進樣，測定10-羥基-2-癸烯酸峰面積，結果RSD值為0.58%。

2.2.6 穩定性試驗取同一供試品溶液，分別在制備后0，2，4，8，12，24 h進行測定，10-羥基-2-癸烯酸峰面積的RSD值為0.22%。表明樣品溶液在24 h內穩定。

2.2.7 加樣回收率試驗分別精密吸取已知含有量的樣品1 mL，共6份，置25 mL量瓶中，分別加入質量濃度為97.80 μg/mL的對照品溶液1 mL。按“2.2.2”項下制備供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進樣，結果見表1。

2.2.8 樣品測定

取33批腦心舒口服液樣品，分別按“2.2.2”項下制備供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進行測定，結果見表2。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）

表2 腦心舒口服液測定結果

續表

3 討論

本實驗采用薄層色譜法（TLC），對33批腦心舒口服液進行蜂王漿主成分10-羥基-2-癸烯酸的鑒別，按照標準規定的鑒別方法，以環己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（5∶1∶0.5）為展開劑，以5%香草醛硫酸溶液為顯色劑[1]，展開效果不理想，將展開劑和顯色劑稍作調整，以石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯-冰醋酸（3∶1∶0.1）為展開劑，以0.2%高錳酸鉀溶液為顯色劑[10]，樣品主斑點清晰可見，含量由低到高，斑點的大小也由小到大，1批肉眼看不到主斑點，說明1個廠家蜂王漿的投料存在問題。有報道原衛生部頒標準第二十冊的TLC，在10-羥基-2-癸烯酸對照品上方有一大斑點，與10-羥基-2-癸烯酸的Rf值接近，極易視其為邊緣效應而認為是10-羥基-2-癸烯酸[11]。綜上所述，按照國家藥品標準WS-11356（ZD-1356）-2002標準的規定，展開后的色譜圖斑點清晰，分離效果較好。

本實驗采用HPLC對33批腦心舒口服液進行蜂王漿主成分10-羥基-2-癸烯酸的考察，根據測定結果，企業間含量差異較大，參照國家藥品標準WS-11356（ZD-1356）-2002標準中含量測定的規定，每支含10-羥基-2-癸烯酸不得少于2.0mg，僅有一個廠家的樣品是合格的，說明藥材質量差異較大或者部分企業未按規定處方量投料。15號樣品與26號樣品是同廠家同批號，但是含量結果差別較大，分別進行了人員比對和儀器比對，含量結果與原檢驗結果一致，含量仍差別較大。查閱文獻，一直以來人們認為10-羥基-2-癸烯酸具有一定的熱穩定性[12]，在高溫下含量變化不明顯[13]，但近年來研究發現，10-羥基-2-癸烯酸在蜂王漿產品中不穩定，如蜂王漿口服液中的10-羥基-2-癸烯酸穩定性差[14]，有研究表明，蜂王漿成品冷藏時的含量穩定[15]，這也與藥品說明書的貯藏（密封，置陰涼處）一致。同廠家同批號含量不同可能與運輸過程或者經營單位的貯存環境有關。

腦心舒口服液現行質量標準有多個，大部分企業執行的質量標準太低，基本不能控制藥品質量。國家食品藥品監督管理局標準參差不齊，無法有效地控制腦心舒口服液的質量。建議將現行的腦心舒口服液質量標準進行整合統一，提高后收入《中華人民共和國藥典》，切實可行地來保證腦心舒口服液的安全、有效。

[1] 國家藥品監督管理局國家藥品標準.WS3-B-3975-98-2002,腦心舒口服液[S].2002.

[2] 國家食品藥品監督管理總局.[EB/OL]http://www.sda.gov.cn/WS01/CL0001/.

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[4] Nakajima Y,Tsuruma K,Shimazawa M, et al.Comparison of bee products based on assays of antioxidant capacities[J]. BMC Complement Altern Med,2009,9:4.

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[9] 倪輝,楊遠帆,彭鶯.蜂王漿中10-HAD的研究進展[J].中國蜂業,2006,57(3):9-10.

[10] 國家藥品監督管理局國家藥品標準.WS-11356(ZD-1356)-2002,腦心舒口服液[S].2003.

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The Analysis of the Quality of Naoxinshu Oral Liquid in Toyal Jelly

Zheng Yan-qing, Zhang Jing, Ren Fei-fei,Yan Xue,Liu De-li
(Dezhou Food and Drug Control/Testing Center, Shangdong Province, Shandong Dezhou 253015, China)

Objective：Royal jelly in naoxinshu oral liquid was used as the research object, and the quality evaluation method of royal jelly in naoxinshu oral liquid was established.Methods：Thin layer chromatography (TLC) was used for quality identi fi cation of royal jelly, and high performance liquid chromatography (HPLC) was used to detect the content of 10- hydroxy -2- acid in royal jelly .Results：The spots of TLC is different in size, the content of 10- hydroxy -2- acid of the samples were between 0.029mg pev vial～1.969mg pev vial.Conclusion：The quality and quantity of the medicinal materials produced in each manufacturer are quite different.

Naoxinshu Oral Liquid; Royal Jelly; 10-hydroxy-2-decenoic Acid; TLC; HPLC

R286

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.09.007

2017 - 05 - 02

鄭艷青，女，副主任中藥師。研究方向：中藥及中成藥的檢驗。通訊作者E-mail：zhengqujin@126.com

本文編輯：魯守琴