阿爾茨海默病患者接受多奈哌齊治療前后血漿β淀粉樣蛋白-42水平的研究

河南省新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院（453003）潘飛 許彤 趙瑾 李玉鳳

阿爾茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是最常見的老年性癡呆中的一種，是一種進(jìn)行性發(fā)展的致死性神經(jīng)退行性疾病，以進(jìn)行性記憶和認(rèn)知功能障礙為主要臨床特征。其特征性病理學(xué)改變包括：神經(jīng)細(xì)胞外的老年斑（senile plaques，S P）、神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的神經(jīng)元纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangle，NFT）及區(qū)域性神經(jīng)細(xì)胞死亡（神經(jīng)元與神經(jīng)突觸異常丟失）等[1]。SP的主要成分則是由β-淀粉樣蛋白前體蛋白（APP）水解生成的β-淀粉樣蛋白（Aβ）組成，NFT主要由雙股螺旋纖維（paired helical filament，PHF）構(gòu)成，其主要成分是過度磷酸化tau蛋白的各種異構(gòu)體。隨著當(dāng)今社會(huì)逐步進(jìn)入老齡化，AD的發(fā)病率逐年升高，對(duì)社會(huì)造成了重大影響。

Aβ為病理狀態(tài)下由跨膜蛋白APP經(jīng)β-分泌酶和γ分泌酶的協(xié)同作用裂解而來，非溶性Aβ在大腦沉積形成神經(jīng)炎性斑，是AD發(fā)病的核心環(huán)節(jié)[2]。Aβ-40和Aβ-42是Aβ中最常見的殘基亞型，但Aβ-42較Aβ-40疏水性強(qiáng)，具有更強(qiáng)的毒性作用，也是老年斑的主要成分，與AD疾病的關(guān)系較為密切[3]。研究表明，AD患者的腦脊液中Aβ-42水平下降[4]（由于Aβ-42在腦內(nèi)沉積，使得腦脊液中Aβ-42含量減少），其診斷AD的靈敏度為86%，特異性可達(dá)90%。而Aβ-42在神經(jīng)細(xì)胞中的沉積可能是通過降低蛋白磷酸酶2A（Protein phosphates 2A, PP2A）的活性來實(shí)現(xiàn)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的毒理作用，從而影響AD患者的認(rèn)知功能[5]。研究發(fā)現(xiàn)，Aβ-42同樣也存在于外周血細(xì)胞中，事實(shí)上，AD患者的生化改變不僅在大腦中，而且也發(fā)生于血管和血細(xì)胞里，同時(shí)雖然腦脊液是反應(yīng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞生化改變最直接的體液組織，但由于腦脊液標(biāo)記物取材不易，代價(jià)偏高，因此AD血液標(biāo)記物仍是目前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)，用血液生化方法檢測(cè)早期AD可以進(jìn)行有針對(duì)性的干預(yù)治療。而由于外周血液中富含APP和代謝所需要的相關(guān)蛋白酶，因此，外周血可以作為研究Aβ-42的一個(gè)良好載體[6]。

所以，AD患者外周血中Aβ-42的動(dòng)態(tài)變化是否可以作為AD診斷和判斷病情進(jìn)展的生物標(biāo)志物之一，以推測(cè)AD病理改變情況還需進(jìn)一步探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 全部病例選自2012年10月～2015年10月年新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院收治的符合標(biāo)準(zhǔn)的病例60例，其中5例由于不合作而脫落，因此最終共計(jì)收得入組病例55例。所有病例均來源于河南地區(qū)漢族人群，其中男性21例，女性34例，年齡在50～80歲，平均年齡（67.41±4.35）歲，平均受教育年限（5.84±2.07）年。入組標(biāo)準(zhǔn)：①AD診斷標(biāo)準(zhǔn)符合美國(guó)精神病學(xué)會(huì)精神障礙診斷和統(tǒng)計(jì)手冊(cè)第四修訂版（Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders-IV, DSM-IV）的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②頭顱CT或MRI符合AD診斷；③父母均為漢族；④入組前一個(gè)月內(nèi)未服用膽堿酯酶抑制劑或擬膽堿類藥物。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①血管性癡呆、假性癡呆及其他可能引起癡呆的疾病；②意識(shí)障礙；③患有嚴(yán)重的不穩(wěn)定軀體疾病，合并癲癇、活動(dòng)性潰瘍、明顯的肝、腎、肺、代謝和內(nèi)分泌異常、明顯的泌尿系梗阻及嚴(yán)重的心血管疾病患者。④未按試驗(yàn)方案規(guī)定用藥的病例或療程未結(jié)束而出現(xiàn)過敏反應(yīng)或嚴(yán)重不良反應(yīng)者。

另選擇正常對(duì)照組55例。正常老年對(duì)照者均來自新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院的職工體檢者或患者家屬，均為河南地區(qū)漢族人群，年齡為50～80歲，其中男性26例，女性29例，年齡在60～80歲，平均年齡（67.50±5.13）歲，平均受教育年限（6.59±2.34）年。在年齡、性別和受教育年限等方面與病例組相比差異無顯著性(P>0.05)。入組標(biāo)準(zhǔn)：①無嚴(yán)重軀體疾病；②目前精神狀況良好，既往無各類嚴(yán)重精神障礙；③否認(rèn)二系三代有任何精神疾病遺傳史；④與實(shí)驗(yàn)組的受教育年限、年齡和性別方面無顯著性差異；⑤MMSE>27分。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①有神經(jīng)系統(tǒng)疾病史或神經(jīng)系統(tǒng)疾病家族史；②目前患有嚴(yán)重的軀體疾病和精神系統(tǒng)疾病、長(zhǎng)期物質(zhì)濫用史和內(nèi)分泌疾病者；③有癲癇病史或癲癇發(fā)作病史者。④知情后不合作者；⑤患有影響記憶力的其他疾病患者；⑥ MMSE≤27分。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料的收集：根據(jù)入組標(biāo)準(zhǔn)確定病例組和對(duì)照組，并分別進(jìn)行血漿β淀粉樣蛋白-42（Aβ-42）濃度測(cè)定。各病例組治療24周后再次進(jìn)行血漿β淀粉樣蛋白-42（Aβ-42）濃度測(cè)定。血漿β淀粉樣蛋白-42（Aβ-42）濃度測(cè)定，使用北京TAD有限公司生產(chǎn)的β淀粉樣蛋白-42（Aβ-42）酶聯(lián)免疫分析試劑盒對(duì)所有受試者血液樣本進(jìn)行分析，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2 給藥方法：病例組給予多奈哌齊藥物常規(guī)治療。第1～6周各單藥組多奈哌齊劑量為5mg/晚（5mg/片），飯后30分鐘溫開水送服。若無嚴(yán)重心律失常、昏厥、癲癇或黑便等不良反應(yīng)發(fā)生，則第7～24周加量至10mg/晚（10mg/片）。

1.2.3 數(shù)據(jù)管理：所有入組人員的基本資料（包括性別、年齡、學(xué)歷等）、病例組的臨床資料以及正常對(duì)照者和治療前后血漿Aβ-42水平均使用Microsoft Excel 2010軟件進(jìn)行管理，所有計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。

1.2.4 臨床數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析在SPSS20.0軟件中進(jìn)行。治療前正常對(duì)照組、和AD組的血漿Aβ-42水平，AD組與對(duì)照組比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)進(jìn)行，AD組治療前后比較采用配對(duì)樣本t 檢驗(yàn)進(jìn)行。雙側(cè)P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

分析血漿Aβ-42水平，對(duì)比AD組和正常對(duì)照組發(fā)現(xiàn)：治療前AD組Aβ-42為21.50±5.10ng/L，正常對(duì)照組的Aβ-42為16.49±3.63 ng/L，治療前AD組血漿Aβ-42水平明顯高于正常對(duì)照組，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.02，P<0.01）。具體見Aβ-42為17.65±3.84 ng/L，治療前AD組血漿Aβ-42水平明顯高于治療后，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=15.00，P＜0.01）。具體見附表2。

對(duì)比治療后AD組和正常對(duì)照組發(fā)現(xiàn)：治療后AD組Aβ-42為17.65±3.84 ng/L，正常對(duì)照組的Aβ-42為16.49±3.63ng/L，治療后AD組血漿Aβ-42水平稍高于正常對(duì)照組，兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.63，P＞0.05）。具體見附表3。

3 討論

Aβ是由跨膜糖蛋白APP分泌而來，在大腦沉積形成神經(jīng)炎性斑，是AD發(fā)病的核心環(huán)節(jié)，而Aβ-42是最常見的殘基亞型，與疾病關(guān)系更為密切，Aβ-42在AD的病因研究中越來越受到重視[7]。研究證實(shí)，Aβ-42主要存在于神經(jīng)元和外周血細(xì)胞中，而AD患者的生化改變不僅發(fā)生在腦脊液中，而且也發(fā)生于外周血中。但由于腦脊液標(biāo)記物取材不易，而血液取材方便，簡(jiǎn)便易行，具有一定優(yōu)勢(shì)，因此外周血作為Aβ-42的一個(gè)良好載體仍被廣泛研究應(yīng)用[6]。

本研究利用ELISA測(cè)定血漿Aβ-42水平發(fā)現(xiàn)，AD患者與正常對(duì)照組相比較，血漿Aβ-42水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），并且AD患者經(jīng)過多奈哌齊24周規(guī)范治療后血漿Aβ-42水平明顯降低，病情有所改善，說明血漿Aβ-42水平可以在一定程度反映腦內(nèi)SP程度，進(jìn)而反映AD嚴(yán)重程度。考慮由于外周血中的Aβ-42不會(huì)像腦脊液中的Aβ-42在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中那樣沉積，因此AD患者外周血中的Aβ-42水平往往比正常人偏高，國(guó)內(nèi)外的附表1。

對(duì)比AD組治療前后發(fā)現(xiàn)：治療前AD組Aβ-42為21.50±5.10 ng/L，治療后AD組一些研究也證實(shí)了此結(jié)論[8][9]。

附表1 AD組治療前與對(duì)照組血漿Aβ-42水平比較（±s，ng/L）

附表1 AD組治療前與對(duì)照組血漿Aβ-42水平比較（±s，ng/L）

組別 例數(shù) Aβ-42 t P治療前AD組 55 21.50±5.10 6.02 ＜0.01對(duì)照組 55 16.49±3.63

附表2 AD組治療前后血漿Aβ-42水平比較（±s，ng/L）

附表2 AD組治療前后血漿Aβ-42水平比較（±s，ng/L）

組別 例數(shù) Aβ-42 t P治療前AD組 55 21.50±5.10 15.00 ＜0.01治療后AD組 55 17.65±3.84

附表3 AD組治療后與對(duì)照組血漿Aβ-42水平比較（±s，ng/L）

附表3 AD組治療后與對(duì)照組血漿Aβ-42水平比較（±s，ng/L）

組別 例數(shù) Aβ-42 t P治療后AD組 55 17.65±3.84 1.63 ＞0.05對(duì)照組 55 16.49±3.63

AD患者經(jīng)過多奈哌齊24周規(guī)范治療后血漿Aβ-42水平明顯降低，病情有所改善，說明多奈哌齊對(duì)于治療AD有一定作用。作為第二代膽堿酯酶抑制劑，其作用機(jī)制主要是通過可逆性地抑制乙酰膽堿酯酶，從而引起乙酰膽酰水解使得受體部位的乙酰膽堿含量增加，而研究表明多奈哌齊可能還包括有其他作用機(jī)制，尤其是通過增強(qiáng)PP2A的活性以及調(diào)節(jié)糖原合成酶激酶-3β（Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β）和煙堿型乙酰膽堿受體（Nicotinic acetylcholine receptors, nAChRs）的活性來抑制Aβ-42所帶來的神經(jīng)細(xì)胞毒理作用，減輕淀粉樣蛋白的神經(jīng)毒性，起到神經(jīng)保護(hù)作用，都可能是它影響患者認(rèn)知功能和精神癥狀的作用通路。

綜上所述，說明多奈哌齊對(duì)于治療AD有一定作用，能改善AD癥狀。血漿Aβ-42水平可以在一定程度反映AD嚴(yán)重程度，作為一項(xiàng)便于操作且客觀的檢查，將對(duì)AD篩查，診斷及治療提供有力的證據(jù)，值得臨床上推廣。