小劑量辛伐他汀對(duì)心腎綜合征患者補(bǔ)體水平及補(bǔ)體受體表達(dá)的影響

王治++黃進(jìn)　李益民++嚴(yán)雪嬌

[摘要] 目的 觀察心腎綜合征（CRS）患者服用小劑量辛伐他汀后血清補(bǔ)體C3、C4水平及外周血單核細(xì)胞Ⅰ型（CR1）、Ⅱ型（CR2）補(bǔ)體受體mRNA表達(dá)的變化。 方法 隨機(jī)入選2012年1～12月在南京市胸科醫(yī)院門(mén)診和病房住院的CRS患者56例，根據(jù)NYHA心功能分級(jí)進(jìn)行心功能分級(jí)，根據(jù)簡(jiǎn)化的MDRD公式計(jì)算估計(jì)的腎小球?yàn)V過(guò)率。入選對(duì)象每晚睡前服用辛伐他汀10 mg，連續(xù)服用8周。入選后次日清晨及治療第8周清晨抽取空腹靜脈血，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清C3、C4水平；采集外周靜脈血提取外周血單個(gè)核細(xì)胞，提取總RNA并行RT-PCR檢測(cè)CR1及CR2 mRNA的表達(dá)。 結(jié)果 CRS患者血清C3水平治療后較治療前降低[（1.14±0.35）和（1.22±0.31）g/L，P < 0.05]，外周血單核細(xì)胞CR1 mRNA治療后較治療前表達(dá)增強(qiáng)（0.76±0.10和0.70±0.11，P < 0.05）。 結(jié)論 CRS患者服用小劑量辛伐他汀后，血清C3水平降低及外周血單核細(xì)胞CR1核酸表達(dá)上調(diào)可能共同參與患者心腎功能的改善。

[關(guān)鍵詞] 辛伐他汀；心腎綜合征；心功能；腎功能；C3；Ⅰ型補(bǔ)體受體

[中圖分類(lèi)號(hào)] R541 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）09（b）-0094-04

Department of Cardiology， Nanjing Chest Hospital， Jiangsu Province， Nanjing 210029， China

[Abstract] Objective To investigate the effects of low-dose Simvastatin on serum levels of C3， C4 and mRNA levels of type Ⅰ （CR1） and Ⅱ （CR2） complement receptor in patients with cardiorenal syndrome （CRS）. Methods Totally 56 patients with CRS were enrolled from January to December in 2012 and treated with Simvastatin （10 mg once per night） for 8 weeks. The serum levels of C3 and C4 were measured. Peripheral blood mononuclear cells were extracted from patients before and after treatment with Simvastatin. RT-PCR was performed to detect the mRNA expression of CR1 and CR2. The left ventricular ejection fraction was determined by Doppler spectrum analysis. Results After therapy， the mean levels of serum C3 was significantly decreased in patients with CRS [（1.14±0.35） vs （1.22±0.31） g/L， P < 0.05]. Contrarily， the mean mRNA level of CR1 increased after therapy （0.76±0.10 vs 0.70±0.11， P < 0.05）. Conclusion The down-regulation of serum level of C3 as well as up-regulation of CR1 after treatment with low-dose Simvastatin is probably associated with improvement of heart and renal function in patients with CRS.

[Key words] Simvastatin； Cardiorenal syndrome； Heart function； Renal function； Complement 3； Type Ⅰ complement receptor

心力衰竭是各種致病因素作用于心臟嚴(yán)重影響心臟功能的結(jié)果，是各種器質(zhì)性心臟病的終末階段。隨著社會(huì)老年化，部分心力衰竭患者中出現(xiàn)腎功能不全的現(xiàn)象引起研究人員的注意，2004年美國(guó)國(guó)家心肺和血液研究所將之稱(chēng)為心腎綜合征（CRS），臨床分為五型。Ⅰ型，急性CRS，指由于心功能急劇惡化導(dǎo)致的急性腎損傷；Ⅱ型，慢性CRS，指由于慢性心力衰竭而導(dǎo)致的進(jìn)行性和/或持久性腎功能不全，通常認(rèn)為是心力衰竭發(fā)展到終末期的一種表現(xiàn)，也稱(chēng)為狹義的CRS；Ⅲ型，急性腎心綜合征，指腎功能急劇惡化導(dǎo)致急性心臟功能失調(diào)；Ⅳ型，慢性腎心綜合征，指慢性腎臟疾病導(dǎo)致的心功能降低，心室肥大；Ⅴ型，繼發(fā)性CRS，指由系統(tǒng)性疾病（系統(tǒng)性紅斑狼瘡、淀粉樣變性等疾病）導(dǎo)致的心腎功能異常。其中Ⅱ型CRS臨床多見(jiàn)，也稱(chēng)為狹義CRS[1-2]。一旦合并心腎功能不全，患者的病死、病殘率增加[3-4]。探討CRS發(fā)生機(jī)制及防治措施是研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。近來(lái)有研究顯示，他汀能夠減輕慢性心力衰竭患者左室重構(gòu)、改善心臟收縮功能。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)小劑量辛伐他汀能夠改善狹義CRS患者的心、腎功能[5-8]。本研究進(jìn)一步探討小劑量辛伐他汀對(duì)CRS患者補(bǔ)體C3、C4水平及Ⅰ型（CR1）、Ⅱ型（CR2）補(bǔ)體受體的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料endprint

隨機(jī)入選2012年1～12月在南京市胸科醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“我院”）門(mén)診和病房住院的心力衰竭合并腎功能不全患者56例，男35例，女21例，平均年齡（68±11）歲，均符合狹義CRS診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]。根據(jù)紐約心功能分級(jí)（NYHA）標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行心功能分級(jí)[10]。根據(jù)慢性腎臟病臨床實(shí)踐指南[11]及eGFR公式，eGFR=175×[肌酐（mg/dL）]-1.234×[年齡（歲）]-0.179×性別（男性=1，女性=0.79），計(jì)算患者的eGFR[mL/（min·1.73m2）]。根據(jù)NYHA標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅱ級(jí)24例，Ⅲ級(jí)26例，Ⅳ級(jí)6例。根據(jù)eGFR測(cè)定值，其中合并輕度腎功能不全[60 mL/（min·1.73m2）

1.2 方法

1.2.1 所有患者入院后次日睡前開(kāi)始服用辛伐他汀（杭州默沙東制藥有限公司），10 mg/次，一次頓服，連續(xù)服用8周。入院時(shí)及隨訪期間記錄患者一般臨床資料。

1.2.2 生化檢測(cè)：入院后次日及服用他汀第8周時(shí)清晨抽取空腹靜脈血4 mL，離心后取血清應(yīng)用OLMPUS全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝功能、腎功能及血脂水平。

1.2.3 血清補(bǔ)體C3、C4水平的測(cè)定：入院后次日及服用他汀第8周時(shí)清晨抽取空腹靜脈血4 mL，采血前24 h禁高脂飲食及飲酒，禁食12 h以上；離心后取血清應(yīng)用免疫散射比濁法測(cè)定。儀器為美國(guó)Beckman Coulter公司全自動(dòng)特種蛋白分析儀，試劑、定標(biāo)液均購(gòu)自該公司。

1.2.4 人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）的分離及RT-PCR檢測(cè)：入院后次日及服用他汀第8周時(shí)清晨抽取外周空腹靜脈血4 mL，采用密度梯度離心法提取PBMC。總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄體系參照文獻(xiàn)[12]。美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心（NCBI）數(shù)據(jù)庫(kù)檢索人Ⅰ型補(bǔ)體受體（CR1）、Ⅱ型補(bǔ)體受體（CR2）及β-actin mRNA序列。應(yīng)用Primer 5.1軟件設(shè)計(jì)引物。各種引物序列、擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度及退火溫度見(jiàn)表1。PCR反應(yīng)體系、反應(yīng)條件及各樣品mRNA的相對(duì)表達(dá)量的測(cè)定參照文獻(xiàn)[12]。

1.2.5 心臟彩超檢查：所有患者在入選時(shí)及治療8周后應(yīng)用惠普5500型彩色多普勒超聲進(jìn)行檢查。患者取左側(cè)臥位，在左室長(zhǎng)軸切面用M型取樣，分別測(cè)量左室收縮末期內(nèi)徑、左室舒張末期內(nèi)徑，應(yīng)用Teich法測(cè)定左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SAS 6.12統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)或秩和配對(duì)檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

辛伐他汀治療前后患者血清C3、CR1 mRNA相對(duì)表達(dá)量比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。辛伐他汀治療前后患者血清C4、CR2 mRNA相對(duì)表達(dá)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

心血管疾病和腎臟疾病之間炎癥標(biāo)志物所發(fā)揮的重要作用引起國(guó)內(nèi)外研究人員的廣泛重視。慢性心力衰竭與機(jī)體免疫系統(tǒng)激活之間的相互聯(lián)系和作用成為研究的熱點(diǎn)[13-15]。眾多研究顯示，慢性心力衰竭患者中免疫系統(tǒng)的激活有多種炎癥介質(zhì)及其他成分的參與[16]。目前尚無(wú)指導(dǎo)CRS治療的有效循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。近來(lái)，他汀類(lèi)具有獨(dú)立于調(diào)脂作用之外的潛在益處引起研究人員的關(guān)注。有研究提示，他汀類(lèi)具有抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)、抑制腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等炎癥因子以及恢復(fù)心臟自主神經(jīng)功能等作用，從而在慢性心力衰竭防治中發(fā)揮重要的作用[17]。筆者前期研究顯示，慢性心力衰竭患者服用小劑量辛伐他汀8周后心、腎功能均得到改善，而患者血脂水平?jīng)]有顯著變化，提示他汀發(fā)揮了獨(dú)立于調(diào)脂作用之外的效應(yīng)[5]。

補(bǔ)體系統(tǒng)是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，補(bǔ)體系統(tǒng)激活級(jí)聯(lián)反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的一系列補(bǔ)體活化成分具有細(xì)胞毒性、免疫調(diào)節(jié)、調(diào)理、清除免疫復(fù)合物、炎癥介質(zhì)等各種效應(yīng)。既往研究表明，補(bǔ)體系統(tǒng)的激活參與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生和發(fā)展，是伴隨動(dòng)脈硬化的慢性炎性反應(yīng)的重要組成部分[18]。近來(lái)有臨床研究顯示，腎動(dòng)脈粥樣硬化是心力衰竭患者發(fā)生腎功能不全的一項(xiàng)獨(dú)立危險(xiǎn)因素[19]。

在補(bǔ)體各成分中，C3的血清含量最高，也是經(jīng)典、替代途徑激活的交匯點(diǎn)，是補(bǔ)體系統(tǒng)的核心。人類(lèi)C3分子主要由肝細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生。經(jīng)典途徑及旁路途徑共同形成C3轉(zhuǎn)化酶。C3轉(zhuǎn)化酶將C3裂解為活性片段C3b，從而與靶細(xì)胞相結(jié)合，進(jìn)一步形成C5轉(zhuǎn)化酶，并在其表面形成膜攻擊復(fù)合體，引起靶細(xì)胞溶解[20]。國(guó)內(nèi)外眾多研究顯示，C3、C4、C5b～9等各種補(bǔ)體成分與臨床冠心病、收縮功能減退及臨床預(yù)后相關(guān)[21-22]。動(dòng)物研究顯示，在缺血/再灌注損害模型中腎小管的損傷依賴(lài)于局部C3的合成，局部C3合成的缺乏能夠減少缺血后急性腎功能衰竭的發(fā)生[23]。近來(lái)也有研究顯示，C3介導(dǎo)糖尿病腎病的腎臟損傷[24]。

CR1廣泛表達(dá)于中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、B細(xì)胞、紅細(xì)胞及腎小球足突細(xì)胞等細(xì)胞，CR1的配體主要為C3b/C4b，其主要功能主要為I因子的輔助因子之一，協(xié)同I因子裂解C3b和C4b，抑制C3轉(zhuǎn)化酶與C5轉(zhuǎn)化酶的活性并促進(jìn)其降解；CR1還作為調(diào)理素受體，增強(qiáng)吞噬細(xì)胞對(duì)C3b/C4b包被顆粒及微生物的吞噬作用。CR2主要表達(dá)于人成熟B細(xì)胞、單核細(xì)胞、某些T細(xì)胞及濾泡樹(shù)突狀細(xì)胞上，可特異性結(jié)合C3d。CR2主要功能是對(duì)B細(xì)胞的分化、增殖、記憶和免疫球蛋白產(chǎn)生起重要的調(diào)節(jié)作用[21]。Java等[25]研究發(fā)現(xiàn)，上皮細(xì)胞CR1不僅參與內(nèi)源性補(bǔ)體調(diào)控，還是一種免疫黏附受體，結(jié)果提示腎小球足突細(xì)胞CR1表達(dá)減少介導(dǎo)補(bǔ)體參與腎臟損害。本研究顯示，CRS患者服用小劑量辛伐他汀后心、腎功能改善，推測(cè)可能與C3水平降低，改善左室收縮功能及腎小管損傷，從而延緩腎功能惡化。而外周血單核細(xì)胞CR1核酸表達(dá)較服用前有所上調(diào)，可能通過(guò)抑制并降解C3轉(zhuǎn)化酶，從而減少免疫復(fù)合物的形成，減輕全身及腎臟局部免疫炎性反應(yīng)，從而改善腎臟功能。

綜上所述，CRS患者服用小劑量辛伐他汀后，血清C3水平降低及外周血單核細(xì)胞CR1核酸表達(dá)上調(diào)可能共同參與患者心腎功能的改善。

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（收稿日期：2017-05-16 本文編輯：李亞聰）endprint