酶聯免疫吸附試驗測定HBsAg弱陽性標本的處理

王德軒

【摘要】目的：探討酶聯免疫吸附試驗測定HBsAg弱陽性標本的處理。方法：采用酶聯免疫吸附測定法和膠體金層析法進行HBsAg弱陽性標本檢查。結果：本次研究對66份弱陽性標本用膠體金法進行檢查，發現49份標本呈現陽性。再采用酶聯免疫吸附測定法進行復查后，有53份標本呈現陽性，弱陽性標本2份，11份假陽性標本。結論：醫院在對HBsAg弱陽性標本檢驗的環節中，可以先采用膠體金層析法進行檢查，然后再對陰性患者采用酶聯免疫吸附測定法進行復查，可以提升檢查的精確性。

【關鍵詞】HBsAg弱陽性標本；酶聯免疫吸附測定；乙肝病毒；膠體金層析法

乙型肝炎病毒表面抗原是一類常見的臨床檢驗項目，一般采用酶聯免疫吸附測定的方式對HBsAg弱陽性標本進行檢測，這種方法的成本比較低，而且效率高，檢測方式簡單，靈敏度可以得到保障，但是在檢測中會有外界因素的干擾。在實際的檢測中會出現弱陽性標本，在復查后與第一次檢查的結果存在出入。為了進一步探討標本的情況，本次研究進行了一系列的研究。

1資料與方法

1.1一般資料

標本來源為本院2016年10月至2017年3月，門診及住院檢測乙肝表面抗原的患者。HBsAg試劑盒采用山東3V生物工程集團有限公司生產的產品，在復查中采用的試劑盒是上海晶抗生物工程有限公司生產的產品。膠體金層析法試紙用的是北京藍十字生物藥業有限公司生產的產品。

1.2方法

相關的操作方法完全按照說明書的內容進行，在采用酶聯免疫吸附測定的環節中，每次都采用質控血清進行室內質控，在檢查完成后，如果患者的檢查結果為弱陽性，那么患者的OD值一般在0.1-0.4之間，可以采用膠體金層析法進行復查，然后患者于第二天采用酶聯免疫吸附測定法進行檢查。

2結果

本次研究中，有66份采用酶聯免疫吸附測定檢測的弱陽性的標本，然后采用膠體金層析法進行復查，總共有49份標本呈現出陽性。66份標本于第二天采用酶聯免疫吸附測定的方法進行檢查，有53份標本是陽性，2份呈現弱陽性，11份標本呈現陰性。1份弱陽性的標本采用膠體金層析法檢測中呈現陽性，將原有的標本的陰性血清進行稀釋，將其濃度稀釋到原來的10%，然后采用酶聯免疫吸附測定雙孔測定的方式呈現陽性。另1份呈弱陽性的標本在采用膠體金層析法檢測后，沒有出現任何的反應。由于膠體金層析法的靈敏度只有2ng/ml，但是酶聯免疫吸附測定法的靈敏度卻高達0.5ng/ml，所以導致檢測結果存在誤差的主要原因在于膠體金層析法的靈敏度比較低。

在對11份采用酶聯免疫吸附測定呈現假陽性的標本進行復查后，發現采用相同的試劑，有5份標本的血清不能充分的凝固，這5例標本都是在冬季檢測。在醫院的部分實驗室，由于室內溫度不能控制的特別好，在對實驗條件進行改善后，效果也更加的精確。患者在冬季采血一般快到中午才能采集完血液，而且檢驗結果要在當天內出，所以這種快速的檢測方法，導致血液在凝固的過程中會產生假陽性特征。盡管很多標本已經通過肉眼觀察到凝固，但是還是存在凝固不充分的情況，很多纖維蛋白還是與聚乙烯板孔結合，導致不能徹底的清洗，導致假陽性的出現。3份標本出現了溶血的現象，在對標本進行充分檢測后，沒有出現假陽性。2份標本出現了污染的情況，這2份標本的前一孔都是陽性標本。1份標本結果無法解釋，需要進行進一步的觀察和論證。

3討論

酶聯免疫吸附試驗在酶免疫測定技術中應用非常廣泛，這種方法將抗原和抗體吸附在同一個載體上，采用酶標記的方式，對抗原的反應進行分析，然后再采用洗滌的方式將游離的部分清除。常見的酶聯免疫吸附試驗主要有雙抗體夾心法和間接法。前者在大分子抗原的檢測中廣泛應用，后者在進行特異抗體檢測中廣泛應用。

酶聯免疫吸附試驗首次是在1971年開始使用，其速度非常快，而且敏感性高，操作簡單，已經制定了各項標準，使這項技術近年來快速發展，并且得到了非常廣泛的應用。在早期這種方法的特異性并不是特別高，導致了實際應用效果不是特別好。但是，如今，酶聯免疫吸附試驗在不斷的改進，材料也在不斷的完善，特別是基因工程應用在其中，對單克隆抗體進行阻斷的酶聯免疫吸附試驗可以提升實驗的特異性，而且如今在酶聯免疫吸附試驗充分借助計算機技術，使酶聯免疫吸附試驗更加的簡便和實用，成為最廣泛的檢測方法。

如今，酶聯免疫吸附試驗在不同的細菌和病毒診斷中都得到廣泛的使用，在動物免疫的環節中，酶聯免疫吸附試驗可以輔助診斷牛結核病、藍舌病等。

酶聯免疫吸附試驗的基本原理是將酶分子和抗體分子結合，這種結合的方式不會將抗體的免疫學特征改變，而且也不會對生物學的活性產生任何的影響。采用酶標記抗體的方式，可以與相同載體上的抗原發生特異性的結合。然后將底物溶液滴加后，可以在酶的作用下形成還原反應，呈現出顏色的變化。所以，通過顏色的變化，醫護人員可以分析患者是否產生了免疫反應，顏色變化的深淺與標本中的抗體或抗原含量呈正比。這種顏色的變化反應借助酶聯免疫吸附試驗進行，可以提升酶化學反應的敏感性。

酶聯免疫吸附試驗的特征非常的明顯，其活性非常突出，而且敏感性高。在室溫下反應非常的穩定，而且反應產物很容易呈現。酶聯免疫吸附試驗中容易受到外界因素的影響，容易產生假陽性或者假陰性，導致實驗結果不精確。實驗室人員的文化素質、思想素質和心理素質等都會導致實驗出現誤差。實驗人員應該具備良好的心理素質，提升自身的道德水平。在工作中如果存在標本混淆的情況，會導致嚴重后果的產生。實驗室工作人員還應該完善自身的技術能力，掌握專業的基本原理，認真學習新的知識，努力提升自己的業務水平。在繁忙的工作中，提升自己的心理素質，做到有條不紊，沉著冷靜的處理各類問題。

在進行酶聯免疫吸附試驗前，操作人員應該對實驗的物理參數非常的了解，了解實驗室的環境溫度和反應溫度等。科學規范的使用儀器，防止溶液溢出容器外，防止血清的殘留，加樣器的吸頭要清洗干凈，防止污染的產生，加樣的次序應該按照說明書進行。防止各類結果產生誤差，要重新進行各項實驗。在手工洗板加入液體中，不要產生太大的沖擊力，洗滌的次數不能過多，嚴格的按照說明書的操作進行。

現在，在對HBsAg進行檢測中，一般都是采用酶聯免疫吸附測定法，但是如果標本呈現弱陽性，就會導致判斷失誤的情況。而且在采用酶聯免疫吸附測定法的過程中，會受到很多因素的影響，常常會出現假陽性問題，其S/CO值非常低。在國外酶聯免疫吸附測定中，會呈現出一段灰色區域的范圍，會顯示檢測結果的可疑性。但是在國內進行HBsAg測定中，不會呈現出灰色的區域，各個醫療機構對灰色區域的理解還存在一定的差異。在報告的模式上，只是顯示陰性和陽性，所以在不同的時間內檢測的結果會呈現出一定的差異。而且操作的流程也會存在一定的差異，醫院在實際的檢測工作中，由于條件受到限制，他們在進行膠體金試紙條法和酶聯免疫吸附測定法測定時，需要對呈現弱陽性的標本進行重新的檢測。本次研究中，有66例標本采用了酶聯免疫吸附測定后呈現出弱陽性，其中假陽性的標本有11份，占總份數的16.7%，有3.0%的標本是弱陽性。說明在初次檢測的環節中，出現了非常高的假陽性，也會有一定的弱陽性標本，其主要原因在于，酶聯免疫吸附測定法的靈敏度還受到一定的限制，我國的酶聯免疫吸附測定法進行HBsAg弱陽性標本測試中所使用的試劑盒具有一定的窗口期，如果試劑盒使用時超過了窗口期，就會導致血液的檢測結果呈現陰性。在對病毒感染的檢測中，需要一定的過程，而且病毒的復制速度非常快，在定性實驗中，只能分析患者的血液是陰性還是陽性。我國生產的酶聯免疫吸附測定試劑的檢出要求還不夠精確。相關的研究表明，我國無償獻血人群的HBsAg的檢出率只有0.27%，所以這項指標會比HBV檢測的水平低，很多感染者還是不能被檢出，存在著潛在傳播病毒的風險。在臨床工作的人群在檢測中，只能檢測到一個灰色區域。

在進行HBsAg檢測中，影響檢測精度的因素非常多，標本之間也會出現互相感染的情況，標本在收集后會出現溶血的情況。這時醫院應該對弱陽性的標本采用膠體金層析法檢查，針對陽性標本，可以直接生成報告。對陰性標本于第二天再采用酶聯免疫吸附測定進行復查，對弱陽性標本繼續觀察。

參考文獻

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