PCR技術(shù)應(yīng)用在乙型肝炎檢驗(yàn)中的價(jià)值探析

盧天龍

【摘要】 目的 分析在乙型肝炎檢驗(yàn)中應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)的效果。方法 200例乙型肝炎患者， 根據(jù)隨機(jī)抽簽法分為觀察和對(duì)照組， 各100例。對(duì)照組通過(guò)化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢驗(yàn)， 觀察組選擇PCR技術(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)， 比較兩種方法的診斷準(zhǔn)確率。結(jié)果 觀察組診斷準(zhǔn)確率為96%， 對(duì)照組診斷準(zhǔn)確率為81%， 兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 PCR技術(shù)對(duì)于乙型肝炎具有較高的診斷準(zhǔn)確率， 能夠準(zhǔn)確檢出乙型肝炎病毒， 值得廣泛應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎；聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)；檢驗(yàn)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.28.012

【Abstract】 Objective To analyze the effect of polymerase chain reaction （PCR） technology applied in hepatitis B test. Methods A total of 200 hepatitis B test patients were divided by random lottery method into observation group and control group， with 100 cases in each group. The control group was tested by chemiluminescence method， and the observation group was tested by PCR technology. The diagnostic accuracy rates of the two methods were compared. Results The observation group had diagnostic accuracy rate as 96%， which was 81% in the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion PCR technology provides higher diagnostic accuracy for hepatitis B， and can accurately detect hepatitis B virus. So it is worthy of wide application.

【Key words】 Hepatitis B； Polymerase chain reaction technology； Test

乙型肝炎是一類(lèi)傳染病， 具有非常強(qiáng)的傳染性， 在全世界范圍內(nèi)都屬于影響健康的嚴(yán)重傳染病， 一些患者還因?yàn)槁愿腥具M(jìn)展為肝硬化和肝癌[1， 2]。準(zhǔn)確的診斷、及時(shí)的干預(yù)是減少傳染的重要方法， 本研究具體分析在乙型肝炎檢驗(yàn)中選擇PCR技術(shù)的診斷效果， 總結(jié)如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2015年1月～2016年12月本院200例乙型肝炎患者進(jìn)行研究， 根據(jù)隨機(jī)抽簽法分為觀察和對(duì)照組， 各100例。觀察組患者男62例， 女38例， 平均年齡（36.2±6.3）歲；

對(duì)照組患者男64例， 女36例， 平均年齡（37.5±6.1）歲。兩組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取兩組患者3 ml靜脈血液作為檢驗(yàn)標(biāo)本， 通過(guò)進(jìn)行離心處理， 獲取血清， 置于冰箱中保存以備使用， 冰箱溫度設(shè)置為零下20℃。觀察組通過(guò)PCR技術(shù)檢驗(yàn)， 乙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ┎少?gòu)于中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司， 按照試劑說(shuō)明書(shū)完成全部操作。熒光定量PCR擴(kuò)增和分析結(jié)果選擇ABI 7500 PCR儀完成（美國(guó)應(yīng)用生物公司）。對(duì)照組通過(guò)化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)， 選擇科美試劑和科美化學(xué)發(fā)光儀完成檢驗(yàn)， 按照試劑說(shuō)明書(shū)完成全部操作。

1. 3 觀察指標(biāo) 以臨床病理診斷結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)， 比較兩組對(duì)于乙型肝炎的診斷準(zhǔn)確率。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組患者診斷為乙型肝炎的患者96例， 診斷準(zhǔn)確率為96%；對(duì)照組患者診斷為乙型肝炎的患者81例， 診斷準(zhǔn)確率為81%；兩組診斷準(zhǔn)確率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

以往臨床診斷乙型肝炎使用化學(xué)發(fā)光法的更多， 該方法具體是在電極表面經(jīng)電化學(xué)出現(xiàn)的一種特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)， 通過(guò)化學(xué)發(fā)光劑對(duì)抗體進(jìn)行標(biāo)記， 經(jīng)抗原-抗體反應(yīng)以及磁珠分離技術(shù)， 按照發(fā)光劑在電極上發(fā)出的光強(qiáng)度定量或定性檢測(cè)待測(cè)抗原或抗體[3]。但是大量實(shí)踐發(fā)現(xiàn)， 該方法進(jìn)行乙型肝炎檢測(cè)有假陰性出現(xiàn)的可能， 確診率受到影響[4]。PCR技術(shù)也叫體外基因擴(kuò)增技術(shù)， 屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域的產(chǎn)物， 當(dāng)前在分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等多個(gè)學(xué)科都有廣泛應(yīng)用[5]。其能夠直接檢測(cè)DNA復(fù)制水平， 從而可以使假陰性出現(xiàn)的可能得到最大程度避免[6]。PCR技術(shù)的作用原理基本相當(dāng)于天然復(fù)制DNA的過(guò)程， 構(gòu)成部分包括變性-復(fù)性（退火）-延伸， 模版DNA通過(guò)加熱溫度達(dá)到大約93℃， 保持一段時(shí)間， 之后使經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈或模板DNA雙鏈DNA完成解離形為單鏈， 便于結(jié)合其引物。等到溫度下降到55℃， 模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列會(huì)和引物完成配對(duì)結(jié)合；在TapDNA聚合酶的作用下， DNA模板-引物復(fù)合物將dNTP當(dāng)成反應(yīng)原料， 將靶序列當(dāng)成模版， 依據(jù)堿基配對(duì)以及半保留復(fù)制原理， 合成新的一條互補(bǔ)于模板DNA鏈的半保留復(fù)制鏈。將變性-退火-延伸三個(gè)過(guò)程進(jìn)行多次重復(fù)、循環(huán)， 能夠獲取大量半保留復(fù)制鏈。endprint

本研究通過(guò)分別利用化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)以及PCR技術(shù)檢驗(yàn)， 結(jié)果顯示， 觀察組患者診斷為乙型肝炎的患者96例， 診斷準(zhǔn)確率為96%；對(duì)照組患者診斷為乙型肝炎的患者81例， 診斷準(zhǔn)確率為81%；兩組診斷準(zhǔn)確率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

乙型肝炎患者在康復(fù)期間， 當(dāng)乙型肝炎病毒轉(zhuǎn)錄翻譯能力逐漸降低， 相應(yīng)血清中乙肝表面抗原 （HBsAg）水平也會(huì)下降， 出現(xiàn)假陰性情況， 從而容易出現(xiàn)漏診或者誤診[7]。但是PCR通過(guò)熒光標(biāo)記乙型肝炎病毒， 對(duì)乙型肝炎病毒DNA的轉(zhuǎn)錄、翻譯進(jìn)行檢測(cè)， 能夠完全避免由于DNA復(fù)制水平而導(dǎo)致血清中抗體出現(xiàn)假陰性， 從而有效降低誤診以及漏診情況， 保證檢驗(yàn)準(zhǔn)確率[8-10]。

綜上所述， 對(duì)乙型肝炎患者選擇PCR技術(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)， 能夠獲取較高診斷準(zhǔn)確率， 可用于推廣。

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[收稿日期：2017-06-21]endprint