EB病毒感染對兒童傳染性單核細胞增多癥T細胞亞群的影響

崔強華,孫 莉,吳 琳,方 萍

(1.陜西省漢中市人民醫院兒科 723000；2.西安交通大學第二附屬醫院呼吸內科，西安 710004)

論著·臨床研究doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2017.25.012

EB病毒感染對兒童傳染性單核細胞增多癥T細胞亞群的影響

崔強華1,孫 莉1,吳 琳1,方 萍2

(1.陜西省漢中市人民醫院兒科 723000；2.西安交通大學第二附屬醫院呼吸內科，西安 710004)

目的觀察EB病毒(EBV)感染對兒童傳染性單核細胞增多癥(IM)T細胞亞群的影響。方法選取2013年1月至2016年1月陜西省漢中市人民醫院兒科收治的80例IM患兒作為研究對象，所有患兒均接受抗病毒治療，觀察患兒治療后的EBV-DNA轉陰率。比較EBV-DNA陽性及陰性患兒的T細胞亞群分布，分析EBV-DNA未轉陰的相關因素。結果經過治療后，67例(83.75%)患兒EBV-DNA轉陰。治療后，EBV-DNA陰性組CD3+和CD8+比例低于EBV-DNA陽性組，CD4+比例和CD4+/CD8+高于EBV-DNA陽性組，差異有統計學意義(P<0.05)。對患兒EBV-DNA未轉陰的相關因素進行分析：性別、白細胞計數(WBC)及淋巴細胞計數與EBV-DNA轉陰無相關性(P>0.05)，干擾素的使用、年齡及初始Ct與EBV-DNA未轉陰具有相關性(P<0.05)。結論EB病毒感染可以引起IM患兒T細胞亞群的紊亂，臨床上應采取積極的抗病毒治療。

皰疹病毒4型，人；傳染性單核細胞增多癥；T細胞亞群

傳染性單核細胞增多癥(infectious mononucleosis，IM)是由EB病毒(EBV)感染導致的急性傳染病，患者以兒童和青少年為主，但部分患兒可能出現爆發性肝炎、心肌炎、噬血細胞綜合征等嚴重的并發癥[1-2]。研究發現，IM患兒存在免疫功能異常，患兒自然殺傷細胞(NK)和T細胞功能過度激活，導致免疫性損傷[3]。本研究旨在觀察EBV感染對IM患兒T細胞亞群的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2013年1月至2016年1月陜西省漢中市人民醫院收治的80例IM患兒作為研究對象，其中男45例，女35例，年齡2～10歲，平均(5.9±2.4)歲。納入標準[4]：(1)所有患兒均以發熱、咽炎及扁桃體炎等癥狀入院，并經過血常規及白細胞分類計數檢查；(2)患兒血清EBV衣殼抗原IgM抗體(EB-VCA-IgM)檢測陽性；(3)患兒家長均自愿參與本研究，并簽署知情同意書。排除標準：(1)合并有心肌炎、肝炎、溶血性貧血及血小板減少的病情危急的患兒；(2)入院前2周內有免疫調節劑及糖皮質激素使用史的患兒。選取健康兒童40例作為空白組，男22例，女18例，年齡2～11歲，平均(5.9±2.7)歲。兩組兒童的性別、年齡差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2治療方法 所有患兒在基礎護理及對癥治療(臥床休息、降低體溫及預防感染等)的基礎上使用更昔洛韋(亞寶藥業集團股份有限公司，批號：151201)10 mg/(kg·d)靜脈滴注，部分患兒聯合應用注射用重組人干擾素αIb(深圳科興生物工程有限公司，批號：201607054)肌內注射，10～30萬U每天1次，或者30～50萬U隔日1次。患兒治療持續7 d。

1.3觀察指標 (1)所有患兒在治療前及治療7 d后檢測EB病毒DNA(EBV-DNA)水平。EBV-DNA檢查采用熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)，引物由上海生工生物工程股份有限公司合成，ABI Prism7300熒光定量PCR儀購自上海迪普生物技術有限公司。將咽拭子或全血標本按照說明書進行處理和DNA提取，并加入26 μL的DNA檢測體系中，將反應管放入樣品槽中進行擴增及檢測：50 ℃預反應2 min，94 ℃預變性5 min，每個循環包括94 ℃10 s，60 ℃ 40 s，共進行50個循環。標本熒光強度曲線達到閾值時所需循環數(Ct值)≤39為陽性，記錄患兒治療前后的Ct值。(2)比較治療7 d后EBV-DNA陽性及陰性患兒的臨床資料，包括年齡、性別、初始的Ct值、白細胞計數(WBC)及淋巴細胞計數以及治療過程中干擾素的使用情況。分析患兒EBV-DNA未轉陰的影響因素。(3)患兒在治療前及治療7 d后均采集空腹靜脈血5 mL，對照組在疫苗接種前采集空腹血5 mL，加入抗凝試管中。取100 μL抗凝血置于計數管內，檢測CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+及NK細胞(CD16+CD56+)，試劑盒由貝克曼庫爾特商貿(中國)有限公司提供。比較不同時刻EBV-DNA陽性及陰性患兒的T淋巴細胞亞群變化。

2 結 果

2.1EBV-DNA陽性及陰性患兒的基線資料比較 治療7 d后，67例(83.75%)患兒EBV-DNA轉陰。EBV-DNA陽性及陰性患兒的性別、初始WBC及初始淋巴細胞計數的差異無統計學意義(P>0.05)，干擾素的使用、年齡及初始Ct值的差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

2.2患兒EBV-DNA未轉陰的相關因素分析 對患兒EBV-DNA未轉陰的相關因素進行分析：性別、WBC及淋巴細胞計數與EBV-DNA轉陰無顯著相關性(P>0.05)，干擾素的使用、年齡及初始Ct與EBV-DNA未轉陰有相關性(P<0.05)，見表2。

2.3患兒治療前后外周血T淋巴細胞亞群變化 與空白組相比，兩組患兒治療前CD3+和CD8+比例升高，CD4+、CD19+、CD16+CD56+比例和CD4+/CD8+降低，差異有統計學意義(P<0.05)。與治療前相比，患兒治療7 d后，CD3+和CD8+比例降低，CD4+、CD19+、CD16+CD56+比例和CD4+/CD8+升高，差異有統計學意義(P<0.05)。治療后，觀察組的CD3+和CD8+比例低于對照組，CD4+、CD19+、CD16+CD56+比例和CD4+/CD8+高于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)；治療后CD16+CD56+的差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表1 EBV-DNA陽性及陰性患兒的基線資料比較

表2 患兒EBV-DNA未轉陰的相關因素分析

表3 各組的淋巴細胞變化

g*：P<0.05，與空白組比較；**：P<0.05，與EBV-DNA陽性組比較；#:P<0.05，與治療前比較

3 討 論

IM是由EBV感染引起的單核-巨噬細胞系統的急性增生性疾病，小兒較易發。近年來，IM的發病率呈現上升趨勢，且診斷具有一定的困難，應該引起臨床上的重視[5]。目前，臨床上關于EBV感染及抗病毒治療在IM患兒中的療效尚存在一定的爭議[6-7]。但是大量臨床及基礎研究證明IM患兒存在繼發性的免疫損傷，故抗病毒藥物單獨應用效果不理想。

本研究選取40例健康兒童作為對照組，兩組IM患兒的淋巴細胞均明顯增加，CD4+/CD8+比例下降，患兒出現免疫功能紊亂。對這一結果進行分析：B淋巴細胞是EBV的主要潛伏細胞，病毒增殖時細胞表面可表達多種抗原，并經抗原提呈細胞提呈后激活CD8+淋巴細胞，引發細胞毒效應，殺傷受到感染的B淋巴細胞，導致CD4+淋巴細胞大量消耗，外周血中CD4+細胞數量下降，患兒出現CD4+/CD8+下降甚至倒置[8]。CD19+是B淋巴細胞的表面標記，本研究中，除T細胞亞群分布發生改變外，IM患兒的B淋巴細胞顯著降低，盡管EBV不能直接作用于B淋巴細胞，但是可以通過IM急性期過度增殖的T細胞殺傷B細胞，導致B淋巴細胞免疫功能缺陷[9-10]。NK細胞在抗病毒免疫中發揮重要的作用，與對照組兒童相比，IM患兒NK細胞比例降低，但是經過治療后患兒的NK細胞無明顯上升，這一結果說明NK細胞在IM患兒病毒復制期的免疫作用有限。

熒光定量聚合酶鏈反應檢測EBV-DNA是近年來發展的技術，可以定量反映體內的EBV-DNA水平，并準確反映EBV感染和病毒的復制情況。EBV-DNA的載量與器官損害程度及疾病種類、疾病的嚴重程度及病死率呈正相關，臨床上可以根據EBV-DNA拷貝數大小來判斷病情嚴重程度[11-12]。經過治療后，患兒的EBV-DNA滴度明顯下降，癥狀好轉，67例患兒EBV-DNA轉陰，但是13例患兒的EBV-DNA仍為陽性；EBV-DNA陰性患兒的CD4+/CD8+比例顯著高于陽性患兒，EBV-DNA轉陰后患兒免疫功能恢復。盡管EBV-DNA陽性患兒治療后的T細胞亞群恢復水平不及陰性患兒，但仍較治療前明顯好轉。其原因為本研究所有患兒均接受積極的抗病毒治療，更昔洛韋是臨床常用的廣譜抗病毒藥物，能夠有效抑制病毒復制[13]。

對EBV-DNA未轉陰的相關因素進行分析：干擾素使用、年齡及初始Ct與EBV-DNA轉陰具有顯著相關性。初始Ct值反映患兒體內病毒復制水平，與疾病嚴重程度相關；3歲以下患兒的免疫系統尚未發育完善，故恢復較慢；干擾素的抗病毒作用主要為廣譜的病毒抑制作用，能夠誘導細胞對感染病毒產生抗性，干擾細胞內病毒基因的轉錄及蛋白的翻譯，從而限制或xg抑制病毒的復制；同時，干擾素對細胞免疫及體液免疫均具有調節作用，對巨噬細胞及NK細胞的免疫功能也有一定的增強作用[14-15]。上述結果說明，對于病情嚴重、低齡或免疫功能較低下的患兒，應該酌情應用干擾素。

綜上所述，EBV感染可以引起IM患兒T細胞亞群的紊亂，臨床上應采取積極的抗病毒治療。

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InfluenceofEpstein-BarrvirusinfectiononTcellsubsetinchildrenwithinfectiousmononucleosis*

CuiQianghua1,SunLi1,WuLin1，FangPing2

(1.DepartmentofPediatrics,HanzhongMunicipalPeople′sHospital,Hanzhong,Shaanxi723000,China；2.DepartmentofRespirationMedicineSecondAffiliatedHospitalofXi′anJiaotongUniversity,Xi′an,Shaanxi710004,China)

ObjectiveTo observe the influence of Epstein-Barr virus(EBV) infection on T cell subsets in children with infectious mononucleosis(IM).MethodsEighty children patients with IM in the Hanzhong Municipal People′s Hospital from January 2013 to January 2016 were chosen as the study subjects and received the anti-virus therapy.The negative conversion rate of EBV-DNA after treatment was observed.The distributions of T cell subsets were compared between the children patients with EBV-DNA positive and patients with EBV-DNA negative.The related factors of EBV-DNA non-negative conversion were analyzed.ResultsAfter treatment,67 children cases (83.75%) were EBV-DNA negative conversion.The proportions of CD3+and CD8+after treatment in the EBV-DNA negative group were lower than those in the EBV-DNA positive group,and the proportion of CD4+and CD4+/CD8+were higher than those in the EBV DNA positive group,the difference had statistical significance (P<0.05).In the analysis on the related factors in the children patients with EBV DNA non-negative conversion,the gender,WBC count and lymphocyte count had no significant correlation with EBV-DNA negative conversion(P>0.05),while interferon use,age and initial Ct demonstrated significant correlation with EBV-DNA non-negative conversion(P<0.05).ConclusionEBV infection can lead to disturbance of T cell subsets in children with IM,so clinic should adopt an active anti-virus treatment.

herpesvirus 4,human；infectious mononucleosis;T cell subsets

R725

A

1671-8348(2017)25-3491-03

2016-12-13

2017-06-11)

國家自然科學基金資助項目(81000009)。

崔強華(1970-)，本科，副主任醫師，主要從事兒童呼吸疾病方面的研究。