全蝎保健酒的增強免疫力功能研究

范治云，曲見松，李志坤，趙艷霞，祝清芬

（山東省食品藥品檢驗研究院，山東濟南250101）

全蝎保健酒的增強免疫力功能研究

范治云，曲見松，李志坤，趙艷霞，祝清芬

（山東省食品藥品檢驗研究院，山東濟南250101）

研究全蝎保健酒對小鼠免疫功能的影響。將SPF級ICR雄性小鼠200只隨機分為4個實驗組，每個實驗組動物分為空白對照組、溶媒對照組、低、中、高劑量組（0.85、1.7、5.1 g/kg·bw）5組?？瞻讓φ战M給予純化水，溶媒對照組給予15%的酒基，連續灌胃30 d，每日1次。檢測全蝎保健酒對刀豆蛋白A（Concanavalin A）誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化能力、遲發型變態反應、血清溶血素水平、抗體生成細胞數、小鼠碳廓清能力、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力及NK細胞活性等免疫指標的影響。與溶媒對照組比較，全蝎保健酒高劑量組能顯著增強小鼠的脾淋巴細胞增殖能力（P＜0.05），能明顯促進小鼠遲發型變態反應（P＜0.05），能顯著提高小鼠抗體生成細胞數水平（P＜0.05）；高、中劑量組可顯著增強NK細胞活性（P＜0.05）；但全蝎酒各劑量組對小鼠胸腺/體重比值、脾臟/體重比值、血清溶血素水平、碳廓清能力及巨噬細胞吞噬雞紅細胞作用無明顯影響（P＞0.05）。全蝎保健酒具有增強小鼠免疫力的功能。

全蝎保健酒；免疫功能；小鼠

Abstract：To study the impact of Quanxie health-care wine on immunity function in mice.A total of 200 SPF ICR male mice were randomly divided into 5 batches，each of which consisted of negative control group，vehicle control group and high，medium and low dosage （0.85，1.7，5.1 g/kg·bw）of Quanxie health-care wine group.The negative control group was given purified water，the vehicle control group was given 15%wine base，and each mouse was orally administered once a day，for 30 days.The immune indexes including ConA-induced lymphocyte transformation ability，delayed type hypersensitivity，serum hemolysin level，antibody producing cell count，carbon clearance ability，macrophage phagocytosis of chicken erythrocytes capacity and NK cell activity were detected.Compared with the vehicle control group，high dosage of Quanxie health-care wine group could significantly strengthen the ConA-induced lymphocyte transformation ability of mice （P＜0.05），enhance the delayed type hypersensitivity of mice（P＜0.05）and increase the level of antibody producing cell（P＜ 0.05）；the medium and low dosage of Quanxie health-care wine group could significantly strengthen NK cell activity.However，Quanxie health-care wine had no significant effects on ratio of spleen weight to body weight，ratio of thymus weight to body weight，serum hemolysin level，carbon clearance ability and macrophage phagocytosis of chicken erythrocytes capacity（P＞0.05）.Quanxie health-care wine can enhance immunity function in mice.

Key words：Quanxie health-care wine；immunity function；mice

全蝎保健酒由全蝎、人參、制何首烏等藥材提取液加酒基調制而成。蝎子強身治病民間有數千年的歷史，《本草綱目》記載蝎子入藥可治如下疾病：“諸風癔疹，及中風半身不遂，口眼歪斜，語澀，手足抽掣。小兒驚惶風搐，大人疴瘧，耳聾疝氣，諸風瘡，女人帶下陰脫”等。近幾年對全蝎用于炎癥[1]、腫瘤的研究也有大量報道[2-3]。中國藥典記載：人參大補元氣，復脈固脫，補脾益肺；制何首烏補肝腎，益精血。本文依照《保健食品檢驗與評價技術規范》中有關增強免疫力功能的檢測方法，研究全蝎酒的增強免疫力的作用，為其作為保健品應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 受試物

全蝎保健酒，批號：201408300101，規格：125 mL/瓶，性狀：金黃色液體，由某酒業有限公司提供。保存條件：密閉，常溫干燥處，保質期：24個月。

1.2 實驗動物

SPF 級 ICR 小鼠，200只，雄性，體重 18 g～22 g，購自濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，許可證號：SCXK（魯）20140007。飼養環境：屏障級動物實驗室，許可證號：SYXK（魯）2013 0012。溫度：20℃～25℃，日溫差≤3℃，濕度：40%～70%，換氣次數：≥10次/h。照明時間：12 h明暗交替。

1.3 儀器與試劑

BSA4202S電子天平：德國Sartorius公司；二氧化碳培養箱：德國memmert公司；紫外可見分光光度計：日本島津公司；酶標儀：美國MD公司；3k30離心機：德國希格瑪公司；顯微鏡：奧林巴斯公司；恒溫水浴鍋：上海樹立儀器儀表有限公司。

RPMI1640細胞培養液、胎牛血清、HBSS液、Triton試劑、0.2 moL/L tris-HCl緩沖液等：自索萊寶公司；刀豆蛋白 A（Concanavalin A，縮寫 ConA）、MTT：Sigma-Aldrich公司；YAC-1細胞：山東省醫學科學院；綿羊紅細胞（SRBC）、補體（豚鼠血清）、雞紅細胞臨用制備。

1.4 方法

1.4.1 實驗分組及受試物給予方式

小鼠按體重隨機分為4個免疫大組，每免疫大組小鼠50只，分為溶媒對照組、受試物低、中、高劑量組及空白對照組5個小組，每小組10只。免疫一組用于遲發型變態反應（DTH）實驗、血清溶血素的測定、抗體生成細胞數的測定；免疫二組用于小鼠碳粒廓清實驗及臟器體重比值的測定；免疫三組用于小鼠淋巴細胞轉化實驗和小鼠NK細胞活性測定；免疫四組用于小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗。設全蝎酒低、中、高劑量分別為0.85、1.7、5.1 g/kg·bw（按合生藥材計），相當于人體推薦量的5、10、30倍劑量。臨用前用提供單位提供的曲酒將受試物配制成含15%的酒精的相應受試物溶液。各組小鼠灌胃體積為20 mL/kg，溶媒對照組給予同等體積的15%的酒精，空白對照組給予同等體積的純化水，每天灌胃1次，連續30 d。

1.4.2 淋巴器官臟器/體重比值測定

每周稱量所有動物體重，結束時處死小鼠。取出免疫二組小鼠的胸腺和脾臟，稱重并計算臟/體比值。臟/體/%=臟器重量/動物體重×100。

1.4.3 ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉化實驗及NK細胞活性測定

末次給予受試樣品后，處死小鼠，無菌操作下取脾，研磨制成單個脾細胞懸液后分成兩份（1號和2號），過200目篩網后HBSS液洗2次，用RPMI 1640培養液調整細胞濃度至3×106個/mL（1號懸液）和2×107個/mL（2號懸液）。1號懸液用MTT法檢測經ConA誘導的小鼠淋巴細胞的增殖能力；以2號懸液為效應細胞，取對數生長期的YAC-1細胞，調整細胞終濃度至4×105個/mL作為靶細胞，依照LDH測定法進行檢測，酶標儀492 nm處測定光密度值，計算NK細胞活性。

1.4.4 遲發型變態反應（DTH）、血清溶血素測定及抗體生成細胞檢測

小鼠腹腔注射0.2 mL 2%（體積比）SRBC致敏后4 d，測量左后足跖厚度，然后在測量部位皮下注射20%（體積比）SRBC，每只小鼠注射 20 μL，注射后于24 h測量左后足跖部厚度，同一部位測量3次，取平均值。以攻擊前后足跖厚度的差值表示遲發型變態反應的程度。將小鼠摘除眼球取血，半數溶血值HC50測定法進行血清溶血素的測定。隨后處死小鼠，制備脾細胞懸液，調整細胞濃度為5×106個/mL。按Jerne改良玻片法進行抗體生成細胞檢測，計數溶血空斑數，以空斑數/全脾細胞表示。

1.4.5 小鼠碳廓清實驗

末次給予受試物后，稱體重，從小鼠尾靜脈10 mL/kg注入稀釋4倍的印度墨汁，注入后2、10 min，分別從內眥靜脈叢取血20 μL，并立即加到2 mL 0.1%Na2CO3溶液中。以0.1%Na2CO3溶液作空白對照，紫外分光光度計檢測600 nm波長處的吸光度值。將小鼠處死，取肝臟和脾臟，稱重，計算吞噬指數。

1.4.6 小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗

每只小鼠腹腔注射20%雞紅細胞懸液1 mL，注射后30 min，頸椎脫臼處死小鼠，按半體內法檢測，計算吞噬率和吞噬指數。

1.5 統計學方法

采用SPSS 19.0統計軟件對數據進行方差分析和Dunnett’s t檢驗。

2 結果與分析

2.1 全蝎酒對對小鼠淋巴器官臟器/體重比值的影響全蝎酒各劑量組小鼠胸腺/體重比值和脾臟/體重

比值與陰性對照組比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 全蝎保健酒對小鼠臟器/體重比值的影響（s）Table 1 The effects of Quanxie health-care wine on ratio of spleen weight and thymus weight to body weight of mice

表1 全蝎保健酒對小鼠臟器/體重比值的影響（s）Table 1 The effects of Quanxie health-care wine on ratio of spleen weight and thymus weight to body weight of mice

胸腺/體重比值/（mg/g）溶媒對照組 0 10 2.96±0.53 1.65±0.48低劑量組 0.85 10 3.00±0.66 1.56±0.45中劑量組 1.7 10 2.93±0.55 1.94±0.50高劑量組 5.1 10 2.74±0.38 1.84±0.46空白對照組 0 10 2.95±0.38 1.46±0.55組別 劑量/（g/kg·bw）動物只數脾臟/體重比值/（mg/g）

2.2 全蝎保健酒對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化能力、小鼠遲發型變態反應的影響

全蝎保健酒高劑量組可增強小鼠的脾淋巴細胞增殖能力，增強小鼠遲發型變態反應能力，與溶媒對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化實驗、小鼠遲發型變態反應實驗結果（s）Table 2 The effects of Quanxie health-care wine on the ConA-induced lymphocyte transformation ability and the delayed type hypersensitivity of mice

表2 ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化實驗、小鼠遲發型變態反應實驗結果（s）Table 2 The effects of Quanxie health-care wine on the ConA-induced lymphocyte transformation ability and the delayed type hypersensitivity of mice

注：*P＜0.05（與溶媒對照組比較，Dunnett’s t檢驗）。

足跖腫脹度/mm溶媒對照組 0 10 0.29±0.90 0.28±0.08低劑量組 0.85 10 0.30±0.06 0.28±0.07中劑量組 1.7 10 0.34±0.11 0.32±0.09高劑量組 5.1 10 0.40±0.11* 0.37±0.08*空白對照組 0 10 0.29±0.08 0.28±0.07組別 劑量/（g/kg·bw）動物只數加ConA孔與不加ConA孔吸光度的差值

2.3 全蝎保健酒對小鼠抗體生成細胞數、血清溶血素的影響

全蝎保健酒高劑量組能顯著提高小鼠抗體生成細胞數水平，與溶媒對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。全蝎保健酒各劑量組對小鼠血清溶血素水平無顯著影響，與溶媒對照組比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），見表3。

表3 小鼠抗體生成細胞數、血清溶血素檢測結果（s）Table 3 The effects of Quanxie health-care wine on the level of antibody producing cell and the serum hemolysin of mice

表3 小鼠抗體生成細胞數、血清溶血素檢測結果（s）Table 3 The effects of Quanxie health-care wine on the level of antibody producing cell and the serum hemolysin of mice

注：*P＜0.05（與溶媒對照組比較，Dunnett’s t檢驗）。

半數溶血值（HC50）溶媒對照組 0 10 22.08±4.97 187.14±14.32低劑量組 0.85 10 23.78±6.78 191.78±15.23中劑量組 1.7 10 26.86±6.76 196.63±11.19高劑量組 5.1 10 28.96±5.39* 199.76±13.29空白對照組 0 10 22.46±5.50 193.28±10.43組別 劑量/（g/kg·bw）動物只數溶血空斑數（×103/全脾）

2.4 全蝎保健酒對小鼠碳廓清能力、腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力的影響

全蝎保健酒各劑量組對小鼠碳廓清能力、腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的能力均無影響，與溶媒對照組比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），見表4。

表4 小鼠碳廓清實驗、腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗測定結果（s）Table 4 The effects of Quanxie health-care wine on the carbon clearance ability and macrophage phagocytosis of chicken erythrocytes capacity of mice

表4 小鼠碳廓清實驗、腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗測定結果（s）Table 4 The effects of Quanxie health-care wine on the carbon clearance ability and macrophage phagocytosis of chicken erythrocytes capacity of mice

腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗吞噬百分率 吞噬指數溶媒對照組 0 10 4.17±0.83 0.42±0.10 0.22±0.11低劑量組 0.85 10 4.97±0.73 0.45±0.08 0.26±0.09中劑量組 1.7 10 4.38±0.98 0.47±0.15 0.27±0.14高劑量組 5.1 10 4.85±0.79 0.47±0.11 0.29±0.10空白對照組 0 10 4.24±0.93 0.41±0.09 0.21±0.09組別 劑量/（g/kg·bw）動物只數碳廓清實驗吞噬指數（a）

2.5 全蝎保健酒對小鼠NK細胞活性的影響

全蝎保健酒中、高劑量組能增強小鼠NK細胞活性，與溶媒對照組比較，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表5。

表5 小鼠NK細胞活性測定結果（s）Table 5 The effects of Quanxie health-care wine on the NK cell activity of mice

表5 小鼠NK細胞活性測定結果（s）Table 5 The effects of Quanxie health-care wine on the NK cell activity of mice

注：*P＜0.05（與溶媒對照組比較，Dunnett’s t檢驗）。

組別 動物只數 NK細胞活性百分率 NK細胞活性溶媒對照組 10 27.73±7.87 0.55±0.09低劑量組 10 33.86±11.13 0.62±0.12中劑量組 10 41.28±9.87* 0.70±0.10*高劑量組 10 41.03±11.70* 0.69±0.12*空白對照組 10 25.26±8.54 0.52±0.10

3 討論與結論

本研究從細胞免疫、體液免疫、吞噬功能、NK細胞功能4個方面考察全蝎保健酒對小鼠免疫功能的影響，并觀察其對動物免疫器官的作用，結果顯示：ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉化實驗中，全蝎保健酒高劑量組可增強小鼠的脾淋巴細胞增殖能力，與溶媒對照組比較有顯著性差異；遲發型變態反應實驗中，全蝎保健酒高劑量組能增強小鼠遲發型變態反應能力。提示全蝎保健酒能增強小鼠的細胞免疫功能。NK細胞活性測定實驗中，全蝎保健酒高、中劑量組NK細胞活性與溶媒對照組比較差異有顯著性意義，提示全蝎保健酒具有增強NK細胞活性作用。根據《保健食品檢驗與評價技術規范》2003年版判定標準，認為全蝎保健酒具有增強免疫力功能的作用。

[1]劉芬,侯睿,費巧玲,等.全蝎水提物對巨噬細胞活化作用研究[J].中國免疫學雜志,2016,32(5):660-661

[2]李永浩,盧冬彥,葉小衛,等.全蝎、蜈蚣水煎劑抗小鼠Lewis肺癌及其對免疫器官的影響[J].中藥新藥與臨床藥理,2015,26(3):311-312

[3]劉端勇,趙海梅,黃小英,等.全蝎蜈蚣對CIA大鼠外周血CD4～+CD25～+FoxP3～+Treg 細胞的調節[J].中藥材,35(4):525-526

[4]中華人民共和國衛生部.保健食品檢驗與評價技術規范[M].北京:中華人民共和國衛生部,2003:22-34

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2015年版一部[M].北京:中國醫藥科技出版社,2015:8-9,176-177

Experimental Study on Quanxie Health-care Wine in Enhancing Immunity Function

FAN Zhi-yun，QU Jian-song，LI Zhi-kun，ZHAO Yan-xia，ZHU Qing-fen
（Shandong Institute of Food and Drug Control，Jinan 250101，Shandong，China）

2017-02-03

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.19.039

范治云（1970—），男（漢），副主任藥師，碩士，研究方向：食品藥品保健品藥理毒理評價。