法氏囊素對環磷酰胺誘導昆明小鼠免疫抑制的阻斷試驗

胡萬榮 呂小婷 陳盛勇 劉楚楚 吳昌標 徐 磊＊ 劉友霖

（1.派生特（福州）生物科技有限公司 福州 350500；2.福建農業職業技術學院 福州 350119）

法氏囊素對環磷酰胺誘導昆明小鼠免疫抑制的阻斷試驗

胡萬榮1呂小婷1陳盛勇1劉楚楚1吳昌標2徐 磊2＊劉友霖1

（1.派生特（福州）生物科技有限公司 福州 350500；2.福建農業職業技術學院 福州 350119）

本試驗旨在探究法氏囊素（BS）對環磷酰胺（CP）誘導的昆明小鼠（KM小鼠）免疫抑制的阻斷作用。選取24只3周齡KM小鼠隨機分成對照組（Ⅰ）、環磷酰胺組（Ⅱ）和環磷酰胺+法氏囊素組（Ⅲ）三個組，在22日齡時，第Ⅲ組小鼠按體重腹腔注射BS 0.02 mL/g，同時第Ⅰ、Ⅱ組小鼠腹腔注射等量生理鹽水；25日齡時，Ⅱ和Ⅲ組分別按體重注射CP 0.5 mg/g，同時第I組注射等量生理鹽水，7 d后測定小鼠的生長及免疫指標。結果表明：Ⅱ組在試驗期間死亡2只小鼠，其余兩組未出現死亡；Ⅰ組、Ⅲ組小鼠的肝臟指數、腎臟指數均高于Ⅱ組，但差異不顯著（P＞0.05）；Ⅰ組與Ⅲ組小鼠脾臟指數極顯著高于Ⅱ組（P＜0.01）；Ⅰ組和Ⅲ組胸腺指數極顯著高于Ⅱ組（P＜0.01）；白細胞計數顯示，Ⅲ組白細胞數顯著高于Ⅱ組（P＜0.05）。CP可明顯抑制小鼠脾臟和胸腺的發育，損傷免疫器官的組織結構，造成白細胞明顯減少或消失，而BS可有效阻斷CP的抑制作用。

法氏囊素 環磷酰胺 小鼠免疫抑制 阻斷

AbstractThe study investigates the inhibitory effect of Bursin (BS)on immunosuppression in kunming mice (KM)induced by cyclophosphamide(CP).Selected 3 weeks of KM mice were randomLy divided into control group(Ⅰ),cyclophosphamide group(Ⅱ)and cyclophosphamide+bursa of fabricius(Ⅲ),for three groups,in the age of 22,the groupⅢ mice by intraperitoneal injection of 0.02 mL/g weight BS,at the same time the groupsⅠandⅡ mice celiac injection amount of normal saline;The age of 25,groupsⅡand Ⅲwere injected with 0.5 mg/g weight CP,the group I amount of saline injection at the same time,7 days later,determination of growth indexes and immune indexes in mice.Results∶groupⅡ,2 mice died during test time,the rest of the two groups did not appear dead;the kidney index of groupsⅠand Ⅲ were higher than in Ⅱ group,but no significant difference(P＞0.05);the spleen index of groupsⅠand Ⅲwas significantly higher than that groupⅡ (P＜0.01);groupsⅠand Ⅲ thymus index was significantly higher than that of groupⅡ(P＜0.01);In the white blood cell count,according to Ⅲ group had a significantly higher number of white blood cell groupⅡ (P＜0.05).It is shown that CP can significantly inhibit the development of spleen and thymus of mice,and damage the tissue structure of immune organs,resulting in the obvious reduction or disappearance of white blood cells,while BS can effectively block the inhibition of CP.

Key wordsBursin Cyclophosphamide Immunosuppression of mouse Interdict

法氏囊素（Bursin）是禽類法氏囊組織產生的一種三肽（Lys-His-Gly-NH2）物質，主要存在于法氏囊組織的提取液中[1]，它在體外具有促進禽類和哺乳動物前體B淋巴細胞分化和增殖的作用，促進機體抗體的產生，對環磷酰胺引起的B細胞免疫抑制具有拮抗作用[2]。

環磷酰胺（Cyclosphamide，Cp）是人工合成的氮芥類烷化劑，其作用主要是破壞DNA的結構，從而阻斷其復制，導致細胞死亡。而在免疫毒理學中，環磷酰胺是制備免疫抑制模型的常用藥物[3]。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 24只3周齡KM小鼠，購自福州市閩侯縣上街吳氏實驗動物場，隔離飼養。

1.2 試驗試劑 環磷酰胺，購自大連美侖生物科技有限公司；法氏囊素由派生特(福州)生物科技有限公司提供。

1.3 試驗動物分組及處理 將24只3周齡KM小鼠隨機分成3組：對照組（Ⅰ）、環磷酰胺組（Ⅱ）和環磷酰胺+法氏囊素組（Ⅲ）。22日齡時，第Ⅲ組小鼠按體重腹腔注射BS 0.02 mL/g，同時第Ⅰ、Ⅱ組小鼠腹腔注射等量生理鹽水；第25日齡時，Ⅱ與Ⅲ組分別按體重注射CP 0.5 mg/g，同時第I組注射等量的生理鹽水。見表1。

表1 KM小鼠分組設計

1.4 測定指標與方法

1.4.1 觀察記錄小鼠臨床狀態 試驗期間，觀察三組小鼠臨床狀況，包括小鼠飲水、采食、被毛和精神狀態等，記錄各組小鼠狀死亡情況。對死亡小鼠記錄、稱重、心臟采血并進行剖解，收集脾臟、胸腺、肝臟、腎臟，稱重。

1.4.2 臟器指數測定 死亡小鼠記錄、稱重、心臟采血并進行剖解，收集脾臟、胸腺、肝臟、腎臟并稱重。未死亡小鼠于試驗第7 d全部處死，處死前稱重、心臟采血，處死后進行剖解，收集脾臟、胸腺、肝臟、腎臟并稱重，計算臟器指數比值。臟器指數比值計算公式：

1.4.3 白細胞計數 取小鼠血液0.02 mL，加入3%乙酸溶液0.38 mL稀釋血液，用小滴管從搖勻的稀釋液中吸取少量液體加入血細胞計數池內，靜置1～2 min，在顯微鏡下用低倍鏡計數4個大方格的白細胞總數，然后將該值乘以50，即得每立方毫米的白細胞數。

1.5 數據處理 采用Excel與SPSS統計軟件對試驗數據記錄、統計、分析。

2 結 果

2.1 小鼠臨床情況 試驗期間，Ⅰ組和Ⅲ組狀態良好，Ⅱ組小鼠被毛逆立、飲水采食及精神狀態較差，見表2。

2.2 各組小鼠臟器指數比值 由表3可知，Ⅲ組肝臟指數比與腎臟指數比均大于Ⅱ組，但差異不顯著（P＞0.05）；Ⅲ組脾臟指數比值高于Ⅱ組，且差異極顯著（P＜0.01）；胸腺指數比值中，Ⅲ組與Ⅱ組比值高2.14，差異極顯著（P＜0.01）。

2.3 白細胞計數 由表4可知，在小鼠白細胞數比較中，Ⅲ組與Ⅱ組比值高1.81×109，差異顯著 （P＜0.05）。

表2 各組小鼠7 d內臨床情況

表3 小鼠臟器指數比值（均值±標準誤）

表4 小鼠白細胞計數情況（均值±標準誤）

3 討 論

小鼠臟器指數比值關乎小鼠生長、免疫等情況，肝臟、脾臟與體重的比值可以反映該小鼠生長性能，脾臟、胸腺與體重的比值可以得出小鼠免疫系統情況，白細胞數目可直觀表明小鼠免疫能力的強弱。環磷酰胺作為一種免疫抑制劑，已有大量研究表明其能抑制動物的體液免疫和細胞免疫應答，造成動物的免疫抑制[4-5]。表3-表4表明，一次性大劑量小鼠腹腔注射環磷酰胺，可引起小鼠嚴重免疫抑制，注射法氏囊素組小鼠，能夠有效緩解由環磷酰胺造成的機體免疫抑制，這與計慧琴等[6]研究結果法氏囊素可以有效阻斷環磷酰胺造成機體免疫抑制相一致。

4 結 論

環磷酰胺可明顯抑制小鼠脾臟和胸腺的發育，損傷免疫器官的組織結構，造成白細胞明顯減少或消失，而法氏囊素可有效阻斷環磷酰胺的抑制作用，一定程度上恢復小鼠自身免疫功能。

[1]Audhya T,Kroon D,Heavner G,et al.Tripeptide Structure of Bursin,a Selective B-Cell-Differentiating Hormone of the Bursa of Fabricius[J].Science,1986,231(4741):997-999.

[2]姜秀麗.囊素三肽的定量測定及其體外生物學活性檢測模型的建立[D].南京農業大學,2000.

[3]Peláez B,Campillo J A,López-Asenjo J A,et al.Cyclophosphamide induces the development of early myeloid cells suppressing tumor cell growth by a nitric oxide-dependent mechanism[J].Journal of Immunology,2001,166(11):6608-6615.

[4]Harrington C F.The speciation of mercury and organomercury compounds by using high-performance liquid chromatography[J].Trac Trends in Analytical Chemistry,2000,19(2):167-179.

[5]Vallant B,Kadnar R,Goessler W.Development of a new HPLC method for the determination of inorganic and methylmercury in biological samples with ICP-MS detection[J].Journal of Analytical Atomic Spectrometry,2007,22(3):322-325.

[6]計慧琴,王丙云,江青艷.三肽囊素對環磷酰胺誘導的雞紅細胞免疫功能低下的阻斷作用 [J].中國家禽,2004,8(z1):38-40.

Blocking test of the effect of Fabricius on immunosuppression induced by cyclophosphamide in Kunming mice

Hu Wanrong1Lv Xiaoting1Chen Shengyong1Liu Chuchu1Wu Changbiao2Xu Lei2*Liu Youlin1
(1.Present(Fuzhou)Biotech Company Limited,Fuzhou 350500;2.Fujian Agricultural Vocational Technical College,Fuzhou 350119)

A

1003-4331（2017）05-0008-03

福建農業職業技術學院-福建省動物保健與食品安全應用技術協同創新中心項目、2015年度 “福建省高校杰出青年科研人才培育計劃”（閩教科[2015]54號）、2015年福建省中青年教師教育科研項目計劃 （JA15760）、2016年度福建省科技計劃項目 （2016S0002）、2017年度福建省科技計劃項目（2017N0009）、2015年福州市科技計劃項目（2015-G-71）、2016 年福州市科技計劃項目（2016-G-64）資助。

胡萬榮（1990-），男，福建上杭人，碩士研究生，主要從事動物疾病與保健研究。E-mail:hwr009@163.com。

＊通信作者：E-mail:xulei0328@163.com。