高效液相色譜法測(cè)定硫酸阿托品滴眼液的含量

鄧曉玲

(江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院，江蘇 鹽城 224000)

高效液相色譜法測(cè)定硫酸阿托品滴眼液的含量

鄧曉玲

(江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院，江蘇 鹽城 224000)

目的建立測(cè)定硫酸阿托品滴眼液含量的高效液相色譜法。方法 色譜柱采用瑞士Spherigel C18柱(150 mm×4.6 mm，5 m)，流動(dòng)相為甲醇 -0.5%KH2PO4(35∶65)，流速為 1 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 217 nm。結(jié)果 硫酸阿托品質(zhì)量濃度在 40.0～163.0 g／L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r＝0.999 86，n＝7）；平均回收率為 101.33% ，RSD ＝1.74%(n＝9)；日內(nèi)精密度 RSD 分別為 0.52% ，0.33% ，0.30%(n＝5)；日間精密度 RSD分別為1.67%，1.20%，0.89%(n＝5)。結(jié)論 該法簡(jiǎn)便、敏捷、準(zhǔn)確，可用于硫酸阿托品的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；硫酸阿托品；含量

硫酸阿托品滴眼液是常用的眼科制劑，用于治療角膜潰瘍、角膜炎、虹膜睫狀體炎，同時(shí)可用于眼底檢查前的散瞳，也用于青少年假性近視的驗(yàn)光檢查及治療[1]。我院采用雙向中和滴定法測(cè)定其含量[2]，但終點(diǎn)不易觀察；且硫酸阿托品分子中含有酯鍵，弱酸集中性條件下較穩(wěn)定，在堿性溶液中分解，如加熱則分解更迅速，生成莨菪酸及莨菪醇而失效，故滴定用標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，需經(jīng)常標(biāo)定，比較煩瑣。同時(shí)，該制劑在消毒后含量一直高于消毒前，可能消毒后硫酸阿托品酯鍵水解產(chǎn)生酸根，而酸堿滴定法測(cè)定的是酸根，所以該法不能直接反映其中阿托品的含量。采用酸性染料比色法[3]，但其所用各種賦形劑在紫外分光光度計(jì)上測(cè)定有不同程度的干擾，含量測(cè)定結(jié)果偏低，給生產(chǎn)帶來(lái)不必要的麻煩。采用BaSO4比濁法[4]、系數(shù)倍率法[5]、電荷轉(zhuǎn)移中和分光光度法[6]、電子對(duì)比色法[7]、多波長(zhǎng)吸光度比之差法[8]、反相高效液相色譜法[9]等方法測(cè)定硫酸阿托品滴眼液中主藥的含量等，但操作比較煩瑣，且方法不穩(wěn)定。高效液相色譜（HPLC）法測(cè)量硫酸阿托品片劑[10]和滴鼻劑[11]含量的報(bào)道，均證明了方法的可行性和優(yōu)越性。本試驗(yàn)中采用HPLC法測(cè)定硫酸阿托品滴眼液的含量，操作簡(jiǎn)便，能真實(shí)反映所測(cè)硫酸阿托品的含量，對(duì)醫(yī)院制劑的質(zhì)量控制具有一定的指導(dǎo)意義。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（美國(guó)瓦里安醫(yī)療系統(tǒng)公司）；Agilent1200型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司）；BP211D型準(zhǔn)微量分析精密電子天平（德國(guó)賽多利斯儀器有限公司）。

1.2 試藥

硫酸阿托品滴眼液（批號(hào)分別為150102，150202，150321，醫(yī)院制劑）；硫酸阿托品對(duì)照品（含量為 0.5 g ／L，批號(hào)為1611261，天津金耀藥業(yè)有限公司）；氯化鈉（含量為 10 mL∶0.9%，批號(hào)為 7A89D3，中國(guó)大冢制藥有限公司）；對(duì)羥基苯甲酸乙酯（批號(hào)為150801，石家莊第一制藥集團(tuán)新華制藥廠）；磷酸二氫鉀（批號(hào)為150802，上海新華化工廠）；甲醇為色譜純，其他試劑為分析純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：瑞士 Spherigel-C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇 -0.5% 磷酸二氫鉀(35 ∶65)；流速：1 mL ／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：217 nm；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：室溫。按擬訂色譜條件，硫酸阿托品峰與雜質(zhì)峰分離良好，理論板數(shù)達(dá)3 000[12]，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：取105℃干燥至恒重的硫酸阿托品對(duì)照品100 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取貯備液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0 mL，置 50 mL 容量品中，加水稀釋至刻度，搖勻，配成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣20 μL，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 H＝0.916 4 C-4.840，r＝0.999 86（n＝ 7）。結(jié)果表明，硫酸阿托品質(zhì)量濃度在40.0～163.0 g／L范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)： 取 142.8，102.0，61.2 g／L 3 種標(biāo)準(zhǔn)溶液，按擬訂色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰高，計(jì)算日內(nèi) RSD和日間 RSD。結(jié)果日內(nèi) RSD分別為 0.52%，0.33% ，0.30% （n＝5），日 間 RSD 分 別 為 1.67% ，1.20%，0.89%（n ＝ 5），表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗(yàn)：稱取105℃干燥至恒重的硫酸阿托品對(duì)照品 80，100，120 mg，精密稱定，各 3 份，置 100 mL容量瓶中，同時(shí)按處方比例分別加入對(duì)羥基苯甲酸和氯化鈉使溶解后，加水稀釋至刻度，配成模擬硫酸阿托品滴眼液樣品，精密量取模擬樣品5 mL，置50 mL容量瓶中，加水至刻度配成低、中、高（80%，100%，120%）濃度的模擬樣品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算含量及回收率。結(jié)果表1。

2.3 樣品含量測(cè)定

HPLC法：精密吸取硫酸阿托品眼藥水成品1.0 mL，置100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，按擬訂色譜條件進(jìn)樣20 μL，依法測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 硫酸阿托品加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

雙向酸堿中和滴定法：精密量取硫酸阿托品滴眼液成品5 mL，加中性乙醇與中性氯仿（對(duì)酚酞指示液顯中性）各5 mL，酚酞指示液3滴，用氫氧化鈉液（質(zhì)量濃度為 0.02 mol／L）滴定，至溶液顯淡紅色，即得每 1 mL的氫氧化鈉（質(zhì)量濃度為 0.02 mol／L）相當(dāng)于 6.948 mg 的硫酸阿托品，計(jì)算含量，并與HPLC法進(jìn)行比較。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 兩種含量測(cè)定方法供試品含量比較(%，n＝3)

3 討論

3.1 含量測(cè)定方法選擇

由表2可知，雙向酸堿中和滴定法的結(jié)果高于HPLC法，與實(shí)際工作中的情況相似。酸堿中和滴定法結(jié)果受終點(diǎn)指示劑變色判斷，測(cè)得含量誤差大，所以不能真實(shí)反映硫酸阿托品的實(shí)際含量。由于對(duì)羥基苯甲酸乙酯的干擾以及硫酸阿托品為末端吸收，也不能用紫外分光光度法。因此，本試驗(yàn)中根據(jù)硫酸阿托品的化學(xué)結(jié)構(gòu)和相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，采用HPLC法測(cè)定含量，方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，可不經(jīng)分離直接測(cè)定硫酸阿托品的含量，且對(duì)羥基苯甲酸乙酯不干擾主要的含量測(cè)定。

3.2 流動(dòng)相波長(zhǎng)選擇

阿托品與654-2（消旋山莨菪堿）的化學(xué)結(jié)構(gòu)相似，但654-2較硫酸阿托品多1個(gè)—OH[12]，即654-2的極性稍大。參考654-2高效液相含量測(cè)定的色譜條件，選流動(dòng)相為甲醇-KH2PO4(22∶78)，檢測(cè)波長(zhǎng)為217 nm。結(jié)果分離效果較好但出峰時(shí)間偏晚，故提高甲醇比例，選擇甲醇-0.5%KH2PO4(35∶65)。硫酸阿托品的吸收波長(zhǎng)為210 ～220 nm[2，13]，經(jīng)多次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，于 217 nm 處出峰效果良好。

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Content Determination of Atropine Sulfate Eye-Drops by HPLC

Deng Xiaoling
(Yancheng First People′s Hospital of Jiangsu Province,Yancheng,Jiangsu,China 224000)

ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of Atropine Sulfate Eye-Drops.Methods The Switzerland Spherigel C18column(150 mm × 4.6 mm,5 μm)was adopted with carbinol-0.5%KH2PO4(35 ∶65)as mobile phase,the flow rate was 1 mL／min and detection wavelength was 217 nm.Results The linear range of atropine sulfate was 40.0-163.0 g ／L(r＝0.999 86,n ＝7),the average recovery rate was 101.33%,RSD ＝1.74%(n ＝9).The inter-day precision (RSD)were 0.52%,0.33%,0.30%(n ＝ 5),the intra-day precision(RSD)were 1.67%,1.20%,0.89%(n ＝ 5).Conclusion This method is simple,rapid and accurate,which can be used for quality control of atropine sulfate.

HPLC;atropine sulfate;content

R927.2；R988.1

A

1006－4931(2017)17－0023－03

10.3969 ／j.issn.1006-4931.2017.17.007

鄧曉玲（1981-），女，大學(xué)本科，主管藥師，研究方向?yàn)獒t(yī)院藥學(xué)，（電子信箱）512360560＠qq.com。

2017－03－06；

2017－05－31)