高效液相色譜串聯質譜法測定楊梅中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺殘留

張 亮，朱 勇，趙 健，付 巖，呂 燕，吳銀良(寧波市農業科學研究院，浙江 寧波 315040)

高效液相色譜串聯質譜法測定楊梅中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺殘留

張 亮，朱 勇，趙 健，付 巖，呂 燕，吳銀良*
(寧波市農業科學研究院，浙江 寧波 315040)

建立楊梅中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺的高效液相色譜串聯質譜檢測方法。將試樣中的吡唑醚菌酯和啶酰菌胺用QuEChERS方法提取、凈化，用高效液相色譜串聯質譜檢測和確證，采用外標法定量。方法通過空白基質溶液稀釋標準品建立校正的標準曲線，用以消除基質效應。結果表明，吡唑醚菌酯和啶酰菌胺濃度在0.005～5.0 mg·kg-1時有良好的線性關系，決定系數分別為0.999 2和0.999 6；在0.01～1.00 mg·kg-1時，添加回收率在76.5%～104.8%，相對標準偏差在2.6～5.3。吡唑醚菌酯和啶酰菌胺方法最小檢出量均為5.0×10-11g，最低檢出濃度均為0.005 mg·kg-1。

高效液相色譜串聯質譜； 吡唑醚菌酯； 啶酰菌胺； 楊梅

吡唑醚菌酯(Pyraclostrobin)和啶酰菌胺(Boscalid)均是由德國巴斯夫公司開發的新型殺菌劑，其中吡唑醚菌酯屬于甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，啶酰菌胺屬于煙酰胺類殺菌劑，近年來二者經常被復配使用，而實踐已經證明，二者的復配劑具有杰出的殺菌活性、廣譜的防治對象、高度的安全性、出色的持效性[1- 5]。基于安全考慮，中國、CAC、歐盟、美國和日本等國家規定，吡唑醚菌酯和啶酰菌胺在各類食品中最高殘留限量分別為ND～50 mg·kg-1和ND～85 mg·kg-1。目前國內外對這兩種化合物殘留檢測方法的報道還比較少[6- 11]，但隨著這兩種農藥的普及，簡單快速的檢測方法的建立也變得尤為必要。本研究參照QuEChERS方法，結合超高效液相色譜- 串聯質譜(UPLC- MS/MS)的分離檢測，建立了一種楊梅中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺殘留量的檢測方法。

1 材料與方法

1.1試驗儀器

UPLC(Waters)，備色譜柱Acquity UPLC BEH C18(2.1 m×100 mm，1.7 μm)柱；Waters UPLC XevoTM TQ MS超高效液相色譜串聯質譜儀(美國Waters公司)；配置電噴霧離子源勻質器(IKA T25)；高速離心機(Sigma 3K15)；恒溫振蕩器(IKA KS 4000i)；旋渦混合器(IKA GENIUS3)；離心管、電子天平以及其他實驗室常用儀器設備等。

1.2試劑與材料

乙腈、甲酸(色譜純，美國默克公司)，無水硫酸鎂(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)，PSA填料(40～63 μm，安譜公司)；吡唑醚菌酯標準品、啶酰菌胺標準品(≥純度99.5%，德國Dr Ehrenstorfer GmbH公司)。

1.3方法

1.3.1 樣品前處理

稱取樣品5.00 g置于50 mL離心管中，加入10.0 mL乙腈，以10 000 r·min-1勻漿2 min靜置15 min后，加入5 g氯化鈉劇烈振蕩2 min，再以10 000 r·min-1離心3 min，吸取上清液待凈化。

將上述待凈化的提取液轉入裝有300 mg MgSO4、100 mg PSA和100 mg C18的塑料離心管中，漩渦振搖1 min，5 000 r·min-1離心3 min。吸取上清液0.4 mL至另一試管中，并加入0.6 mL0.1%甲酸溶液混合均勻，過0.22 μm濾膜后供LC- MS/MS測定。

1.3.2 標準溶液配制

標準儲備液配制。將吡唑醚菌酯和啶酰菌胺標準品用乙腈溶解，配制成質量濃度為100 μg·kg-1的母液，再用乙腈分別配制濃度為10、1.0、0.1、0.01 μg·mL-1的梯度標準儲備液，于-18 ℃避光保存，有效期6個月。

基質匹配標準溶液配制。將楊梅樣品按照1.3.1的方法進行前處理，制得空白楊梅基質溶液，再與0.1%甲酸水溶液一起將配制好的標準儲備液稀釋配制成質量濃度為0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0和5.0 μg·mL-1的系列混合標準溶液，需現配現用。

1.3.3 檢測條件

色譜條件。流動相為0.1%甲酸溶液(A)和乙腈(B)，色譜柱ACQUITY UPLC@BEH C182.1 m×100 mm，1.7 μm，柱溫35 ℃；樣品室溫度20 ℃，流速0.4 mL·min-1，進樣體積10 μL。梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

質譜條件。電噴霧離子源，正離子掃描模式，電離電壓1.5 kV，霧化氣流速800 L·h-1，錐孔氣流速10 L·h-1，離子源溫度150 ℃，霧化溫度400 ℃。多反應監測分析的質譜參數見表2。

表2 多反應監測模式下的質譜參數

2 結果與分析

2.1色譜條件的選擇

流動相。流動相為0.1%甲酸溶液(A)和乙腈(B)，梯度淋洗。0～0.5 min，維持50%B；0.5～0.51 min，50%B線性變化至90%B；0.51～4.00 min，維持90%B；4.00～4.01 min，90%B線性變化至50%B；4.01～5.00 min，維持50%B。

色譜柱。ACQUITY UPLC@BEH C182.1 m×100 mm，1.7 μm，柱溫35 ℃，樣品室溫度20 ℃，流速0.4 mL·min-1，進樣體積10 μL。

離子源。電噴霧離子源，正離子掃描，多反應監測，電離電壓1.5 kV，霧化氣流速800 L·h-1，錐孔氣流速10 L·h-1，源溫150 ℃，霧化溫度400 ℃。

在上述條件下，吡唑醚菌酯的保留時間為3.7 min左右，啶酰菌胺的保留時間為3.4 min左右。

2.2方法線性范圍

采用基質加標，外標法定量。將吡唑醚菌酯和啶酰菌胺標樣分別用乙腈溶解后，用空白樣品(基質)提取液將標準液稀釋成0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、5.0 mg·kg-1標準工作液。在上述儀器條件下進樣檢測，得到MS響應值(峰面積Y)與進樣濃度(X)的線性回歸方程，繪制的吡唑醚菌酯和啶酰菌胺標準曲線和線性決定系數分別為Y=2 460 132X+6 197，R2=0.999 2和Y=520 142X+3 107，R2=0.999 6，表明在0.005～5.0 mg·kg-1內線性良好。

2.3方法準確度和精密度

按上述色譜條件及分析步驟進行添加回收試驗，每個添加濃度重復5次。由表3可知，吡唑醚菌酯在添加濃度為0.01～1.00 mg·kg-1時，回收率在77.6%～104.8%，相對標準偏差(RSD)最大為5.3%。啶酰菌胺在添加濃度為0.01～1.00 mg·kg-1時，回收率在76.5%～101.3%，RSD最大為4.7%。回收率和RSD均在農藥殘留試驗準則允許范圍內，方法重復性良好，可滿足殘留量分析要求。

表3 吡唑醚菌酯和啶酰菌胺在楊梅中的添加回收率

2.4方法靈敏度

以根據標準曲線最低濃度0.005 mg·kg-1計算得吡唑醚菌酯和啶酰菌胺的最小檢出量均為5.0×10-11g。在楊梅空白樣品中添加一定量的吡唑醚菌酯和啶酰菌胺標準溶液，以最小添加濃度0.005 mg·kg-1作為最低檢出濃度。

3 小結

本研究建立了一種基于QuEChERS方法處理楊梅樣品，結合UPLC- MS/MS高分辨能力快速檢測楊梅中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺殘留量的方法，并對建立的方法進行了考察，包括線性、檢出限、回收率和精密度等，結果表明，該方法具有快速、高效、靈敏的特點，符合農藥殘留分析的要求，可應用于楊梅中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺的檢測。

[1] 趙建江，王文橋，馬志強，等. 啶酰菌胺與吡唑醚菌酯混配對番茄葉霉病菌的聯合毒力[J]. 北方園藝，2016(19)：135- 137.

[2] 劉興軍. 38%吡唑醚菌酯·啶酰菌胺水分散粒劑防治黃瓜灰霉病田間藥效試驗[J]. 農業開發與裝備，2016(5)：67.

[3] 馮小龍. 吡唑醚菌酯與啶酰菌胺對番茄灰霉病復配增效研究[D]. 楊凌：西北農林科技大學，2016.

[4] 趙建江，王文橋，馬志強，等. 啶酰菌胺與吡唑醚菌酯混配對灰葡萄孢的增效作用[J]. 農藥，2016(3)：211- 213.

[5] 張亦冰. 新穎殺菌劑吡唑醚菌酯·啶酰菌胺水分散粒劑[J]. 世界農藥，2009，35(5)：52- 53.

[6] 湯永嬌，袁宏球，朱珠，等. 超高效液相色譜法測定芒果中啶酰菌胺和吡唑醚菌酯[J]. 食品科學，2014，35(20)：175- 179.

[7] 王玉然，梁化雨，李平亮，等. 蘋果葉片中吡唑醚菌酯殘留的超高效液相色譜- 串聯質譜檢測方法[J]. 農藥學學報，2016，18(6)：752- 758.

[8] 張志勇，王冬蘭，劉賢進. 西瓜與土壤中吡唑醚菌酯殘留的分析方法[J]. 安徽農業科學，2010，38(34)：19386- 19387.

[9] 李瑞娟，于建壘，宋國春. 葡萄和土壤中吡唑醚菌酯的高效液相色譜殘留分析方法[J]. 農藥科學與管理，2010，31(6)：33- 36.

[10] LIU X，DONG F，QIN D，et al. Residue analysis of kresoxim- methyl and boscalid in fruits，vegetables and soil using liquid- liquid extraction and gas chromatography- mass spectrometry[J]. Biomedical Chromatography，2010，24(4)：367- 373.

(責任編輯：張瑞麟)

TS207.5

：A

：0528- 9017(2017)09- 1556- 03

2017- 06- 25

寧波市科技惠民項目(2016C51038)

張 亮(1989—)，男，助理工程師，碩士，從事農產品質量安全研究工作，E- mail：zl8755251@163.com。

吳銀良，教授級高級工程師，博士，從事農獸藥殘留分析研究工作，E- mail：wupaddyfield@sina.com。

文獻著錄格式：張亮，朱勇，趙健，等. 高效液相色譜串聯質譜法測定楊梅中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺殘留[J].浙江農業科學，2017，58(9)：1556- 1558.

10.16178/j.issn.0528- 9017.20170917