老年鼻息肉患者經鼻內鏡術切除后組織嗜酸粒細胞和腫瘤壞死因子α表達與預后的關系

盧大松 馮勇軍 曾春榮 王明靖

(海南醫學院第二附屬醫院耳鼻咽喉頭頸外科，海南 海口 570311)

老年鼻息肉患者經鼻內鏡術切除后組織嗜酸粒細胞和腫瘤壞死因子α表達與預后的關系

盧大松 馮勇軍 曾春榮 王明靖

(海南醫學院第二附屬醫院耳鼻咽喉頭頸外科，海南 海口 570311)

目的探討老年鼻息肉患者經鼻內鏡術切除后組織嗜酸粒細胞和腫瘤壞死因子(TNF)-α表達與預后的關系。方法回顧性分析行鼻內鏡術切除老年鼻息肉患者40例，以手術6個月內術腔完全上皮化和未完全上皮化的患者分為預后好組22例和預后差組18例。分別應用免疫組織化學和蘇木精-伊紅染色的方法,研究兩組鼻息肉組織中嗜酸粒細胞和IFN-α的表達，采用Logistic回歸分析法分析老年鼻息肉患者經鼻內鏡術切除后預后與組織嗜酸粒細胞與TNF-α的關系。結果預后好組鼻息肉組織中嗜酸粒細胞的表達較預后差組弱(P<0.05)；兩組鼻息肉組織中TNF-α的主要細胞有固有浸潤細胞、血管內皮細胞、腺體細胞，均定位于細胞質。在預后好組鼻息肉組織中，TNF-α的表達較預后差組弱(P<0.05)；有較多的炎癥細胞浸潤于鼻息肉組織的固有層，其中預后差組的嗜酸粒細胞TNF-α表達的總陽性率顯著高于預后好組(P<0.01)，Logistic回歸分析顯示，組織中嗜酸粒細胞與TNF-α是影響老年鼻息肉患者經鼻內鏡術切除后預后的重要因素(P<0.05)。結論嗜酸粒細胞與TNF-α在鼻息肉組織中呈高表達狀態，且影響老年鼻息肉鼻內鏡切除術預后效果。

鼻息肉；經鼻內鏡術；嗜酸粒細胞；腫瘤壞死因子-α

鼻息肉是多種因素共同作用下導致的結果，是鼻科常見疾病〔1〕。鼻息肉是一種以活性炎癥細胞，尤其是嗜酸粒細胞浸潤為特征的呼吸道黏膜炎性病變的鼻部表現，腫瘤壞死因子(TNF)-α是既能抗腫瘤活性,又能介導炎性反應的一種分子量為17.35 kD的非糖基化蛋白，使炎性細胞活化，血管通透性增加，使血管內皮細胞的表型誘變成炎癥型，炎癥反應和組織損傷在生理和病理發揮重要作用〔1〕。本研究探討老年鼻息肉患者經鼻內鏡術切除后組織嗜酸粒細胞和TNF-α表達與預后的關系分析。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2015年3月至2016年10月于海南醫學院第二附屬醫院行鼻內鏡術切除老年鼻息肉患者40例，以手術6個月內術腔完全上皮化和未完全上皮化的患者分為預后好組22例和預后差組和18例。納入標準：(1)均是單純性鼻息肉患者，均>60歲；(2)患者均行鼻內鏡切除術；(3)知情同意。排除標準：(1)有其他方面嚴重性疾病；(2)有感染性疾病。預后好組男15例，女7例，年齡62～78〔平均(65.68±9.65)〕歲，病程1～3年，平均(2.35±1.02)年，Ⅲ型7例，Ⅱ型9例，Ⅰ型6例；預后差組男13例，女5例，年齡63～77〔平均(64.85±10.23)〕歲，病程1～3年，平均(2.10±1.11)年，Ⅲ型6例，Ⅱ型8例，Ⅰ型4例。兩組一般資料均無統計學差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2手術方法 所有患者經過一致的術前治療及術前準備后均在同一組醫師行鼻內鏡切除術，在局麻情況下，行鼻內鏡手術，根據術前CT結果及術中所見病變情況，一般采用切前組鼻竇開放是Ⅰ型患者，開放全篩、隱窩額開放并擴大上頜竇口是Ⅱ型患者，行全組鼻竇開放是Ⅲ型患者。Ⅲ型者或病變范圍較廣者采用哌替啶進行全身麻醉。術后采用凡士林紗條和填充海綿填充鼻腔。術后治療方式基本一致，對出現并發癥者積極治療。根據病情安排患者出院，回家休養。患者出院后均遵醫囑服藥，術后2個月內2次/w到醫院復查，并用鼻內鏡下清理術腔，分離粘連。在術后3～6個月，3～4次/d復查，并進行清理，直至滿6個月。評價其術腔黏膜恢復情況。

1.3檢測方法 (1)TNF-α：用10%的中性甲醛固定標本24 h，按石蠟切片常規操作后用一抗采用鼠抗TNF-α單克隆抗體(TNF-α單克隆抗體及鏈霉菌抗生素物蛋白-過氧化物酶轉結法(SP)試劑盒購自北京中山生物技術有限公司)試劑行SP免疫組織化學染色，每次染色均設陽性喉癌組織切片,用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗的陰性對照。(2)嗜酸粒細胞：將組織石蠟切片脫蠟、沖洗，PBS浸泡,3%H2O2去離子水及孵育后二氨基聯苯胺(DAB)劑顯色沖洗及蘇木精復染、脫水、透明并樹膠封片。采用蘇木精-伊紅染色方法，在顯微鏡下觀察炎性細胞浸潤狀況,并在高倍視野Eos細胞計數。

1.4TNF-α和嗜酸粒細胞陽性標準 以出現棕黃染色顆粒的細胞質為陽性細胞。在5×5 mm2和6× 6 mm2條線的目鏡上配計數格上計數10個陽性區域(400倍視野平均值)，10個高倍視野未見或偶見1個陽性細胞為陰性，每計數格內陽性細胞計數<5個為弱陽性，6～10個為中度陽性，>10個為強陽性。而根據腺體及血管陽性計數：10個高倍視野未見腺體及血管為陰性，陽性個數所占百分比<30%為弱陽性，30%～60%為中度陽性，>60%為強陽性。

1.5統計學方法 采用SPSS22.0統計軟件進行分析，計數資料采用χ2檢驗。

2 結 果

2.1兩組嗜酸粒細胞與TNF-α鼻息肉組織的表達 預后好組鼻息肉組織中嗜酸粒細胞的表達較預后差組弱(P<0.05)；兩組鼻息肉組織中TNF-α的主要細胞有固有浸潤細胞、血管內皮細胞、腺體細胞，均定位于細胞質。在預后好組鼻息肉組織中，TNF-α的表達較預后差組弱(P<0.05)。見圖1。

A：預后差組嗜酸粒細胞；B：預后好組嗜酸粒細胞；C：預后差組TNF-α;D：預后好組TNF-α圖1 兩組嗜酸粒細胞與TNF-α表達(DAB，×400)

2.2兩組嗜酸粒細胞與TNF-α表達的差異 有較多的炎癥細胞浸潤于鼻息肉組織的固有層，其中預后差組嗜酸粒細胞表達總陽性率為83.33%(陰性3例，弱陽性5例，中度陽性7例，強陽性3例)，顯著高于預后好組的50.00%(陰性11例，弱陽性7例，中度陽性3例，強陽性1例)(P<0.01)，預后差組TNF-α表達總陽性率為77.78%(陰性4例，弱陽性7例，中度陽性5例，強陽性21例)，顯著高于預后好組的40.91%(陰性13例，弱陽性6例，中度陽性2例，強陽性1例)(P<0.01)。

2.3Logistic回歸分析 組織中嗜酸粒細胞與TNF-α是影響老年鼻息肉患者經鼻內鏡術切除后預后的重要因素(P<0.05)。見表1。

表1 Logistic回歸分析法

3 討 論

嗜酸粒細胞的浸潤和明顯的間質水腫是鼻息肉的病理學特征〔2〕。細胞因子在鼻息肉的發病發展中起著重要的作用，TNF-α是可活化各種炎性細胞的初級炎性因子，能使血管通透性增加，也具有多種促炎生物活性〔3〕。TNF-α能延長嗜酸性粒細胞的存活時間和使其活化通過上調粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)和粒細胞集落刺激因子(G-CSF)水平，還能直接損傷鼻息肉上皮在刺激嗜酸性粒細胞的細胞毒功能情況下〔4〕。本實驗結果表明TNF-α在血管系統的廣泛作用下能導致鼻息肉間質水腫、炎性浸潤和腺體增生，還能同時使部分結構細胞受刺激而釋放細胞因子，從而使肥大細胞、中性粒細胞和嗜酸粒細胞聚集而分泌多種白三烯、前列腺素、嗜酸粒細胞陽離子蛋白等炎性介質，增加鼻上皮細胞吸收鈉離子和分泌氯離子，增加水分吸收，使組織水腫加重，最終導致鼻息肉的發生〔5〕。間質中的大量炎癥細胞浸潤也是鼻息肉的特點，其中嗜酸粒細胞為主要炎性細胞之一〔6〕。本研究結果提示嗜酸粒細胞對鼻息肉的發生和復發可能起到重要的作用。嗜酸粒細胞在鼻息肉組織中活化狀態和浸潤較為顯著。研究顯示，嗜酸粒細胞在鼻息肉組織的浸潤程度與預后和復發顯著相關〔7〕。Eotaxin 和Eotaxin-2是嗜酸粒細胞的兩種趨化因子，能選擇性的與趨化因子受體(CCR)3受體結合而趨化和活化嗜酸粒細胞，而這兩種趨化因顯著高于正常鼻黏膜在鼻息肉上表達，提示鼻息肉的發生和發展可能與Eotaxin等趨化因子通過對磷酸性粒細胞(EOS)的趨化和活化作用有關，且鼻息肉組織中Eotaxin-2的表達顯著增加，提示鼻息肉復發可能是因為Eotaxin-2通過對EOS在鼻黏膜局部的聚集〔8〕。本研究還提示在術前重視患者血清中嗜酸粒細胞與TNF-α控制治療，可能會改善老年鼻息肉患者經鼻內鏡術切除后預后效果。

1陳祖堯,余 玲,梁灼萍,等.TNFα-和MMP-9在鼻息肉嗜酸粒細胞浸潤過程中的作用〔J〕.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2011;25(2):54-7.

2李 康,楊 靜.鼻息肉中嗜酸性粒細胞的作用機制〔J〕.中國醫師進修雜志：綜合版,2012;35(3):70-2.

3曲 玲,張月琴,陳 靜,等.腫瘤壞死因子α、環氧合酶2與p38絲裂原活化蛋白激酶及其信號通路在鼻息肉發病中的作用〔J〕.中國眼耳鼻喉科雜志,2012;12(1):47-50.

4王 敏,馮竹玉,鄭家法,等.TNF-α及嗜酸性粒細胞在鼻息肉中的表達及在激素治療中的意義〔J〕.中國保健營養：下旬刊,2012;22(5):787-8.

5牛麗娟.白細胞介素-5和腫瘤壞死因子-a在慢性鼻-鼻竇炎患者血清中的表達及其意義〔J〕.中國實用醫刊,2012;39(19):19-20.

6賈艷輝,王艷軍,亞力坤·亞生.嗜酸性粒細胞性和非嗜酸性粒細胞性的慢性鼻竇炎鼻息肉部分臨床對比研究〔J〕.武警后勤學院學報：醫學版,2013;22(5):370-3.

7隋 麗,陳 冬,馬曉峰.老年慢性鼻竇炎伴鼻息肉患者外周血嗜酸性粒細胞與肺功能的相關性〔J〕.中國老年學雜志,2014;34(10):2629-31.

8馬曉峰,柴 麗,陳 冬,等.基質金屬蛋白酶-9及嗜酸性粒細胞在鼻息肉形成中的作用〔J〕.實用醫學雜志,2011;27(5):927-927.

〔2017-04-11修回〕

(編輯 袁左鳴)

R765.25

A

1005-9202(2017)18-4634-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.18.097

盧大松(1984-)，男，主治醫師，主要從事耳鼻咽喉頭頸外科良惡性腫瘤的治療研究。