浸潤性肺腺癌組織中促紅細(xì)胞生成素肝細(xì)胞A7和基質(zhì)金屬蛋白酶-2的表達(dá)及臨床意義

安文靜 馮喜英 關(guān) 巍 華 毛 久 太 杜發(fā)茂 崔金霞 拉周措毛 李玉紅 劉洪千 馬維秀 時瑩慶張 娜

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸科，青海 西寧 810001)

浸潤性肺腺癌組織中促紅細(xì)胞生成素肝細(xì)胞A7和基質(zhì)金屬蛋白酶-2的表達(dá)及臨床意義

安文靜 馮喜英 關(guān) 巍 華 毛 久 太 杜發(fā)茂 崔金霞 拉周措毛 李玉紅 劉洪千 馬維秀 時瑩慶張 娜1

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸科，青海 西寧 810001)

目的觀察促紅細(xì)胞生成素肝細(xì)胞(Eph)A7和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2在浸潤性肺腺癌中的表達(dá)特征，分析其臨床意義及相關(guān)性。方法61例浸潤性肺腺癌患者臨床資料及術(shù)后蠟塊組織為實驗組，正常肺組織36例為對照組，應(yīng)用免疫組化二步法檢測兩組EphA7和MMP-2表達(dá)。結(jié)果EphA7和MMP-2在兩組中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。實驗組EphA7和MMP-2表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肺膜累犯相關(guān)，EphA7表達(dá)與腫瘤最大徑相關(guān)，二者均與患者的年齡、性別無相關(guān)性。相關(guān)分析顯示二者不具有相關(guān)性。結(jié)論浸潤性肺腺癌中EphA7和MMP-2表達(dá)升高可能對腫瘤進(jìn)展有一定促進(jìn)作用，EphA7對促進(jìn)腫瘤生長有一定作用。

肺腺癌；促紅細(xì)胞生成素肝細(xì)胞(Eph)A7；基質(zhì)金屬蛋白酶-2

肺腺癌形成和進(jìn)展時常伴隨高增殖性的腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移潛能活躍的細(xì)胞〔1〕。促紅細(xì)胞生成素肝細(xì)胞(Eph)A7是酪氨酸蛋白激酶受體家族成員，定位于染色體6q16.1靠近斷裂點的位置，研究顯示其與腫瘤形成和進(jìn)展有關(guān)〔2，3〕。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2也稱明膠酶A，是MMPs家族中對細(xì)胞外基質(zhì)降解有重要作用的成員，在腫瘤性病變時表達(dá)升高，可以有效促進(jìn)腫瘤進(jìn)展〔4，5〕。本研究檢測浸潤性肺腺癌中EphA7和MMP-2表達(dá)，分析二者在不同臨床病理特征中差異及相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 2014年1月至2016年7月青海大學(xué)附屬醫(yī)院浸潤性肺腺癌61例為實驗組，均由術(shù)后病理證實，其中男29例，女32例，年齡41～82(平均59.3)歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并胸腔積液；②肺癌復(fù)發(fā)；③合并其他器官惡性腫瘤。上述患者中距腫瘤邊緣>3 cm的正常肺組織36例為對照組，其中男18例，女18例，年齡43～80(平均56.9)歲。兩組性別、年齡無統(tǒng)計學(xué)差異，具有可比性。

1.2EphA7和MMP-2的檢測 手術(shù)后常規(guī)切取肺組織，應(yīng)用甲醛溶液固定后，脫水、石蠟包埋、切片，EphA7和MMP-2的檢測應(yīng)用免疫組化SP法，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。做好質(zhì)量控制工作。

1.3EphA7和MMP-2結(jié)果的判定 EphA7和MMP-2以腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)為判斷標(biāo)準(zhǔn)(間質(zhì)和背景中的染色不判定)，兩種蛋白均定位于細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。選擇觀察組中腫瘤細(xì)胞集中的區(qū)域和對照組中肺泡上皮細(xì)胞分布的區(qū)域進(jìn)行觀察，共觀察3個400倍視野，取平均值，以<25%定為陰性，≥25%定為陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行χ2檢驗、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1EphA7和MMP-2在兩組表達(dá)差異 兩組EphA7和MMP-2的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。見表1。

表1 兩組EphA7和MMP-2陽性表達(dá)的比較〔n(%)〕

2.2實驗組EphA7和MMP-2陽性表達(dá)在不同臨床病理特征分組中的比較 實驗組中EphA7和MMP-2陽性表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肺膜累犯相關(guān)；EphA7陽性表達(dá)與腫瘤最大徑相關(guān)，二者均與患者的年齡、性別無相關(guān)性。見表2。

表2 實驗組EphA7和MMP-2陽性表達(dá)在不同臨床-病理特征分組中的比較〔n(%)〕

2.3實驗組EphA7和MMP-2相關(guān)性 EphA7和MMP-2陽性表達(dá)無相關(guān)性(P=0.234 1)。

3 討 論

肺腺癌病變進(jìn)展時與機(jī)體中的外源性因素刺激和內(nèi)在基因表達(dá)失調(diào)有關(guān)〔6〕。EphA7是從成年鼠大腦分離出來的，與Eph家族中的其他成員一樣具有相同的主要結(jié)構(gòu)，其胞外部分包括一個富含半胱氨酸的區(qū)域和串聯(lián)的纖維連接蛋白結(jié)構(gòu)域〔7，8〕。EphA7在胚胎組織中廣泛表達(dá)，尤其是中樞神經(jīng)系統(tǒng)。EphA7能和其他EphA受體在細(xì)胞信號交換中合作〔9〕。EphA7區(qū)別于其他受體之處主要是其包含細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域〔10〕。陳千益等〔11〕通過觀察胃癌中EphA7的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其在腫瘤中的表達(dá)明顯高于對照組，認(rèn)為EphA7在胃癌的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，同時EphA7蛋白表達(dá)水平與胃癌腫瘤分化程度呈負(fù)相關(guān)性，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血清CA19-9水平呈正相關(guān)性。因此EphA7對腫瘤的形成具有促進(jìn)作用。MMPs是一組鋅離子依賴性蛋白水解酶，可以降解細(xì)胞外基質(zhì)中的各種蛋白成分，尤其是對基底膜可以有效降解〔12，13〕。MMP-2、MMP-9屬MMPs中的明膠酶類，它們主要降解細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜的主要結(jié)構(gòu)蛋白Ⅳ型膠原，MMP-2在Ⅳ型膠原表面聚集，使細(xì)胞外基質(zhì)變得疏松、基底膜缺失，腫瘤細(xì)胞進(jìn)而通過疏松的細(xì)胞外基質(zhì)和缺失的基底膜向周圍組織或遠(yuǎn)處組織擴(kuò)散和浸潤，引起腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移〔14，15〕。

本研究提示EphA7和MMP-2高表達(dá)是浸潤性肺腺癌區(qū)別于正常肺組織的一個重要特征，提示二者高表達(dá)與肺泡上皮的惡變有關(guān)。EphA7和MMP-2高表達(dá)是促進(jìn)腫瘤淋巴道播散的重要因素，也是腫瘤浸潤性生長和破壞肺膜的重要危險因素〔16〕。本文結(jié)果提示EphA7高表達(dá)時可以促進(jìn)腫瘤的生長，此時腫瘤細(xì)胞增殖活躍，腫瘤細(xì)胞生長旺盛，細(xì)胞數(shù)量明顯增多，腫瘤體積增大。但是EphA7對腫瘤作用可能具有多元性。研究認(rèn)為EphA7在腫瘤間質(zhì)中的血管內(nèi)皮細(xì)胞可以有一定程度的表達(dá)，因此EphA7可能是血管內(nèi)皮生長的促進(jìn)因子之一，其對血管生成的促進(jìn)作用使腫瘤局部的血供豐富，腫瘤細(xì)胞的營養(yǎng)成分足夠，細(xì)胞具備旺盛生長的前提條件〔17〕。本文提示EphA7和MMP-2二者不具有協(xié)同作用。張訓(xùn)等〔18〕發(fā)現(xiàn)EphA2和MMP-2在膠質(zhì)瘤中高表達(dá)，二者呈正相關(guān)，認(rèn)為EphA2可能通過影響MMP-2而促進(jìn)腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移。由于EphA7包含細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，因此EphA7對MMP-2的調(diào)節(jié)作用可能不明顯，具體機(jī)制有待更多分子生物學(xué)實驗證實。

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〔2016-09-27修回〕

(編輯 苑云杰)

R73

A

1005-9202(2017)18-4568-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.18.062

1 青海省人民醫(yī)院呼吸科

馮喜英(1962-)，女，主任醫(yī)師，主要從事呼吸病學(xué)研究。

安文靜(1981-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事呼吸病學(xué)研究。