NOB1基因在老年結直腸癌患者的表達及臨床價值

鄭正榮 胡清福 趙清泉 曾曉珊

(福建醫科大學附屬第二醫院腫瘤外科，福建 泉州 362000)

NOB1基因在老年結直腸癌患者的表達及臨床價值

鄭正榮 胡清福 趙清泉 曾曉珊

(福建醫科大學附屬第二醫院腫瘤外科，福建 泉州 362000)

目的探討NOB1基因在老年結直腸癌(CRC)患者中的表達及臨床價值。方法選擇老年CRC患者60例，均行手術治療，取CRC病灶組織及癌旁正常組織，采用免疫組織化學SP法檢測兩種組織中NOB1基因情況，分析NOB1基因在老年CRC患者中的表達及臨床價值。結果老年CRC組織中NOB1彌漫在細胞質中，且清晰可見陽性細胞，呈淡黃色；而癌旁組織中，NOB1多位于細胞核中。老年CRC患者NOB1陽性表達顯著高于正常組織(P<0.05)。老年CRC組織中NOB1表達與年齡、性別、組織分化程度、浸潤深度不相關(P>0.05)；與組織類型和淋巴結轉移關系密切(P<0.05)。結論老年CRC患者中NOB1基因水平表達提高，可能參與腫瘤的發生、發展，有望成為結直腸癌新的靶點。

NOB1基因；結直腸癌

目前臨床上對于結直腸癌(CRC)發病機制尚不完全知曉，其發生、發展是一個多步驟、多機制、多基因參與的過程，且細胞的凋亡功能異常與病灶的進程、耐藥等緊密聯系〔1〕。NOB1是一種同源性基因，在核糖體小亞基核26S蛋白酶體的生物合成中發揮重要作用，且在腫瘤的轉移、發生及發展中發揮重要作用，但該結論尚未得到進一步證實〔2〕。本文旨在探討NOB1基因在老年CRC患者中的表達及臨床價值。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2014年1月至2016年6月醫院收治老年CRC患者60例，男34例，女26例，年齡60～88〔平均(76.5±2.1)〕歲。其中23例高分化，21例中分化，16例低分化。納入標準：①符合老年CRC臨床診斷標準；②均經過手術病理檢查最終確診；③入組前患者均未接受放療、化療或免疫治療。排除標準：①合并有影響效應指標觀測、判斷其他生理或病理者；②長期服用精神鎮痛藥者；③合并高血壓、重度心肺功能不全等重大疾病者。

1.2方法 采用免疫組織化學鏈霉菌素抗生物素蛋白-過氧化物酶連接(SP)法檢測兩種組織中NOB1基因情況。①儀器與試劑：NOB1多克隆抗體(美國Proteintech Group公司生產提供)；SP免疫組化染色試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司)。②實驗方法：圍術期取入選患者CRC病灶組織及距離病灶部位>3.0 cm癌旁正常組織，采用濃度為10.0%甲醛進行固定，石蠟包膜，制備厚度為4 μm切片，并將其放入pH為6.0的枸緣酸鹽緩沖液中進行抗原修復，相關操作必須嚴格遵循儀器、試劑盒操作說明進行，采用已經陽性片作為對照，采用磷酸鹽緩沖液(PBS)作為陰性對照〔3〕。③判斷標準：采用雙盲法染色對測定結果進行評估。SP免疫組化染色陽性：細胞質或細胞核為淡黃色或棕黃色。取制備的切片，5個高倍視野下(每個視野至少含有1 000個細胞)，根據陽性細胞所占比進行評定。染色強度：0分無著色；1分著色為淡黃色；2分為棕黃色；3分為棕褐色或深度棕黃色。陽性細胞百分比：陽性細胞占總細胞的25%以下為1分；26%～50%為2分；51%～75%為3分；76%～100%為4分。對于二者評分乘積在0～2分為陰性，3～5分為弱陽性；6～7分為強陽性〔4〕。

1.3統計學方法 應用SPSS18.0軟件行t、χ2檢驗。

2 結 果

2.1NOB1基因在老年CRC與癌旁組織中的表達 老年CRC組織中NOB1彌漫在細胞質中，且清晰可見陽性細胞，呈淡黃色；而癌旁組織中，NOB1多位于細胞核中。老年CRC患者中，32例(53.3%)NOB1陽性表達，顯著高于癌癥正常組織〔10例(16.7%),χ2=6.391,P<0.05〕。見圖1。

2.2老年CRC患者NOB1表達與臨床病理特征分析 見表1，表2。單因素結果顯示：老年CRC組織中NOB1表達與年齡、性別、組織分化程度、浸潤深度差異無統計學意義(P>0.05)；多因素結果顯示：老年CRC組織中NOB1表達與組織類型和淋巴結轉移關系密切(P<0.05)。

圖1 NOB1基因在老年CRC與癌旁組織中的表達(×100)

臨床病理特征nNOB1陽性表達χ2值P值總頻率 癌旁組織6010(16.7)6.391<0.05 病灶組織6032(53.3)年齡(歲) ≥603618(50.0)1.024>0.05 <602414(58.3)性別 男2616(61.5)0.931>0.05 女3414(41.2)分化程度 高分化2314(60.9)1.931>0.05 中分化219(42.9) 低分化167(43.8)浸潤深度 未浸潤124(33.3)0.993>0.05 浸潤4828(58.3)淋巴結轉移 有2214(63.6)0.492>0.05 無3818(47.4)

表2 老年CRC組織中NOB1表達與臨床病理特征多因素分析

3 討 論

CRC發生率呈上升及年輕化趨勢，并且對于伴有CRC家族患者發生率更高。同時，CRC復發率較高，發病后約50%患者復發時轉移到肝臟，錯過了最佳治療時機〔5〕。

NOB1是近年來研究較多的基因類型，該基因最早于2005年測得，是酵母基因Noblp的人類同源基因。NOB1主要包括9個外顯子和8個內含子，主要定位在人體16q22.1，主要在人體肝、肺、脾等組織中表達。同時，NOB1是一個多功能的核蛋白，其表達水平與核糖體小亞基和蛋白酶體生物合成等關系密切〔6〕。文獻報道〔7〕，NOB1基因在老年CRC患者發生、發展中起重要作用，能引起癌蛋白聚集，抑癌蛋白異常降解，從而增加細胞凋亡受阻和增殖速度，誘發腫瘤的發生。相關學者利用RNA干擾技術將NOB1-siRNA轉染到卵巢癌細胞株中，結果顯示NOB1能抑制細胞的生長活性，提高細胞增殖能力，提示：NOB1可能參與卵巢癌的發生、發展〔8〕。由此看出NOB1的異常表達將引起核糖體和蛋白酶體難以正常合成，造成機體內泛素-蛋白酶體途徑(UPP)異常，導致細胞凋亡發生異常，并且在CRC的發生、化療耐藥機制中均發揮重要作用。

本研究結果提示，NOB1基因表達的提高能促進腫瘤的進一步發生，是CRC患病過程中的一個新的調控因子，并且該基因與患者的性別、年齡、腫瘤組織分化程度等生物行為無明顯關系，但與淋巴結轉移有關，可能成為CRC治療的潛在靶點，針對NOB1異常表達的靶向治療能有效抑制腫瘤的生長、增殖，降低化療藥物耐藥性，但是該結論尚需要進一步研究和探討。

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2武 月，殷紅專，閆兆鵬，等.NOB1 在結直腸癌中的表達及其臨床意義〔J〕.現代腫瘤醫學，2013；21(9)：2044-7.

3王 歡，馬法庫，劉 斌，等.結直腸癌組織中DCLK1+/Ki67-腫瘤干細胞樣細胞的形態和分布〔J〕.中國組織工程研究，2015；19(10)：1575-9.

4馬小杰，韓振國.結直腸癌組織中Nob1基因的表達及臨床意義〔J〕.中國醫藥指南，2015；35(10)：160-1.

5Lin Y，Peng S，Yu H，etal.RNAi-mediated downregulation of NOB1 suppresses the growth and colony-formation ability of human ovarian cancer cells〔J〕.Med Oncol，2012；29(1)：311-7.

6Ye Q，Feng B，Peng YF，etal.Expression of gammas-ynuclein in colorectal cancer tissues and its role on colorectal cancer cell line HCT116〔J〕.World J Gastroenterol，2009；15(40)：5035-43.

7李貴新，劉 錦，李肖燕，等.結腸癌患者術后化療聯合自體級聯誘發免疫細胞治療近期療效和生活質量觀察〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2014；21(19)：1548-52.

8鐘俊新，段雪飛，李 晶，等.胃癌中NOB1 基因的表達及意義〔J〕.廣東醫學，2014；35(6)：870-2.

〔2017-03-25修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

R735.3

A

1005-9202(2017)18-4564-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.18.060

泉州市科技項目資助項目(No.2012Z49)

鄭正榮(1978-)，男，博士，副主任醫師，主要從事腫瘤疾病診斷與治療研究。