宮頸癌患者血清骨橋蛋白、可溶性E-鈣黏蛋白含量與腫瘤增殖、侵襲活性的相關性

張 燕

(?？谑袐D幼保健院婦產科，海南 ?？?570100)

宮頸癌患者血清骨橋蛋白、可溶性E-鈣黏蛋白含量與腫瘤增殖、侵襲活性的相關性

張 燕

(?？谑袐D幼保健院婦產科，海南 海口 570100)

目的探討宮頸癌患者血清骨橋蛋白(OPN)、可溶性E-鈣黏蛋白(sE-cadherin)含量與腫瘤增殖、侵襲活性的相關性。方法宮頸癌患者70例為宮頸癌組，宮頸不典型增生患者58例為不典型增生組，宮頸炎癥患者60例作為炎癥組。入院后當天，采用二抗間接法測定血清OPN含量，采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定sE-cadherin含量；采用RT-PCR法測定宮頸組織增殖基因、侵襲基因mRNA表達量。結果宮頸癌組血清OPN含量高于不典型增生組、炎癥組，sE-cadherin含量低于不典型增生組、炎癥組(P<0.05)；宮頸癌組的組織增殖基因GBP1、caveolin-1 mRNA表達量低于不典型增生組、炎癥組，Bcl-xL、Sp2、EZH2 mRNA表達量高于不典型增生組、炎癥組(P<0.05)；宮頸癌組的組織侵襲基因Prdx4、Sox2、Rab11、RbAp48 mRNA表達量高于不典型增生組、炎癥組(P<0.05)。宮頸癌血清OPN、sE-cadherin含量與以上腫瘤增殖、侵襲活性基因均有一定的相關性(P<0.05)。結論宮頸癌患者血清中OPN高表達、sE-cadherin低表達，其含量與腫瘤增殖、侵襲程度存在直接相關性。

宮頸癌；骨橋蛋白；可溶性E-鈣黏蛋白；增殖基因；侵襲基因

宮頸組織病理學檢查是宮頸癌確診的金標準，但難以作為常規檢查手段而普及〔1〕。骨橋蛋白(OPN)是廣泛分布于組織及細胞中的蛋白質，可參與機體組織修復、自身代謝，目前其在早期細胞免疫應答、腫瘤發生及轉移中的作用均備受關注?？扇苄訣-鈣黏蛋白(sE-cadherin)是一種Ca2+依賴的細胞黏著糖蛋白，在細胞遷移、組織分化中發揮重要作用。有研究證實sE-cadherin與腫瘤的發生發展及預后均關系密切，被稱為是血清中的“腫瘤轉移基因”〔2〕。本研究初步探討宮頸癌患者血清OPN、sE-cadherin含量及其與腫瘤惡性生物學行為的內在聯系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2013年1月至2016年3月海口市婦幼保健院收治的宮頸癌患者70例為宮頸癌組，宮頸不典型增生患者58例為不典型增生組，宮頸炎癥患者60例為炎癥組。納入標準：(1)經宮頸組織病理檢查確診；(2)入院前未接受其他治療干預；(3)不伴其他組織臟器腫瘤性疾??；(4)全程參與研究、臨床資料完整。排除標準：(1)入院前3個月內有外科手術史；(2)伴嚴重心、肝、腎功能不全；(3)伴認知功能障礙或精神異常，無法配合研究過程。宮頸癌組年齡50～80〔平均(59.82±7.19)〕歲，體質指數(BMI)21.5～26.8 kg/m2，平均(23.16±2.75)kg/m2；不典型增生組年齡32～69〔平均(58.79±7.53)〕歲，BMI 20.9～26.9 kg/m2，平均(23.05±2.68)kg/m2；炎癥組年齡30～66〔平均(57.63±8.53)〕歲，BMI 21.3～27.1 kg/m2，平均(23.21±2.85)kg/m2。3組年齡、BMI差異無統計學意義(P>0.05)?；颊呔橥猓芯揩@醫院倫理委員會批準。

1.2血清OPN、sE-cadherin檢測 入院當日，取3組空腹外周靜脈血2 ml，避光離心取上清液，采用二抗間接法測定血清OPN含量，采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定sE-cadherin含量。二抗購自美國Abcam公司，貨號RH093；酶聯免疫試劑盒購自美國Sigma公司，貨號HM827。

1.3RT-PCR目標基因mRNA表達檢測 取3組宮頸組織，碾磨后用Trizol(美國Sigma公司，貨號T9424)提取總RNA，75%乙醇洗滌兩遍后用焦碳酸二乙酯(DEPC)(美國Sigma公司，貨號472565)溶解RNA。根據反轉錄試劑盒(美國Sigma公司，貨號RTN10)說明，將RNA反轉錄為cDNA，根據熒光定量試劑盒(美國Sigma公司，貨號DNAQF)說明擴增增殖基因：Bcl-xL、GBP1、Sp2、EZH2、caveolin-1；侵襲基因：Prdx4、Sox2、Rab11、RbAp48。Bcl-xL上游引物：5′CGTAGCTAGCTAGCTAGCTA3′，退火溫度60.0℃，下游引物：5′AATGTCAGCGTAGCTAGGCT3′，退火溫度57.0℃；GBP1上游引物：5′CGATCTGTCCAACTGCAAC3′，退火溫度62.0℃，下游引物：5′ATTCGAGCTGCTAGCTAGTC3′，退火溫度59.0℃；Sp2上游引物：5′ACTTCGCGGACTAGCTGCAG3′，退火溫度61.0℃，下游引物：5′CGATGCGATCGTCTGTTCGA3′，退火溫度60.0℃；EZH2上游引物：5′TGCCGTCTTAACGTACGTCA3′，退火溫度57.0℃，下游引物：5′GCTAGTAACTGCTTACTAC3′，退火溫度56.0℃；caveolin-1上游引物：5′GTTACCAAGTCGTCTCGA3′，退火溫度54.0℃，下游引物：5′AGCTCTACGGCTAGCTAAGC3′，退火溫度62.0℃；Prdx4上游引物：5′GCTTCAGTTCAACGTCTCG3′，退火溫度60.0℃，下游引物：5′AACGTCTGGTCTGTCACGT3′，退火溫度58.0℃；Sox2上游引物：5′CGTTACTAGCTACAATGTC3′，退火溫度62.0℃，下游引物：5′AATCGCTGCTAACGTCAG3′，退火溫度56.0℃；Rab11上游引物：5′ACGTCTGCTGACGTGCTA3′，退火溫度55.0℃，下游引物：5′GCTTGACTGGCTACGAACTG3′，退火溫度63.0℃；RbAp48上游引物：5′CGATCGTCGATTCGTACGGA3′，退火溫度58.0℃，下游引物：5′AACGCTAGTTGCCGGATAA3′，退火溫度59.0℃。擴增條件：94℃ 2 min→94℃ 30 s→54℃ 30 s→72℃ 60 s，30個循環后于72℃延伸10 min。設置炎癥組的組織基因mRNA表達量為100，計算不典型增生組、宮頸癌組的相應基因表達量。

1.4統計學方法 應用SPSS20.0行方差分析、t、χ2檢驗、Pearson相關分析。

2 結 果

2.13組血清OPN、sE-cadherin含量比較 3組血清OPN、sE-cadherin含量差異有統計學意義(P<0.05)。宮頸癌組、不典型增生組血清OPN含量高于炎癥組，sE-cadherin含量低于炎癥組；宮頸癌組血清OPN含量高于不典型增生組，sE-cadherin含量低于不典型增生組(P<0.05)，見表1。

2.2侵襲基因mRNA表達 3組組織侵襲基因Prdx4、Sox2、Rab11、RbAp48 mRNA表達量差異有統計學意義(P<0.05)。宮頸癌組、不典型增生組Prdx4、Sox2、Rab11、RbAp48 mRNA表達量均顯著高于炎癥組，宮頸癌組高于不典型增生組(P<0.05)。見表1。

2.3增殖基因mRNA表達 3組組織增殖基因Bcl-xL、GBP1、Sp2、EZH2、caveolin-1表達量差異有統計學意義(P<0.05)。宮頸癌組、不典型增生組組織GBP1、caveolin-1 mRNA表達量低于炎癥組，Bcl-xL、Sp2、EZH2 mRNA表達量高于炎癥組；宮頸癌組GBP1、caveolin-1 mRNA表達量低于不典型增生組，Bcl-xL、Sp2、EZH2 mRNA表達量高于不典型增生組(P<0.05)。見表2。

表1 3組血清OPN、sE-cadherin含量和組織侵襲基因mRNA表達量比較

與炎癥組比較：1)P<0.05；與不典型增生組比較：2)P<0.05；下表同

表2 3組組織增殖基因mRNA表達量比較

2.4相關性分析 宮頸癌患者血清OPN含量與增殖基因Bcl-xL、Sp2、EZH2 mRNA表達量呈正相關(r=0.672，0.702，0.689；P<0.05)，與GBP1、caveolin-1 mRNA表達量呈負相關(r=-0.712，-0.682；P<0.05)；與侵襲基因Prdx4、Sox2、Rab11、RbAp48 mRNA表達量呈正相關(r=0.672，0.702，0.652，0.714；P<0.05)。宮頸癌患者血清sE-cadherin含量與增殖基因Bcl-xL、Sp2、EZH2 mRNA表達量呈負相關(r=-0.572，-0.682，-0.649；P<0.05)，與GBP1、caveolin-1 mRNA表達量呈正相關(r=0.702，0.681；P<0.05)；與侵襲基因Prdx4、Sox2、Rab11、RbAp48 mRNA表達量呈負相關(r=-0.672，-0.712，-0.598，-0.624，P<0.05)。

3 討 論

OPN是一種分泌性鈣結合磷酸化糖蛋白，被認為是一種新型腫瘤標志物。sE-cadherin是與癌細胞浸潤轉移關系密切的細胞黏附因子，其表達下調可使細胞失去黏附力，惡性腫瘤細胞極性喪失，具備侵襲性生長特征〔3〕。

惡性腫瘤的增殖及侵襲性是區別于其他良性疾患的本質特征。Bcl-xL是最典型的腫瘤增殖基因，有研究其表達下調后腫瘤細胞增殖受到抑制〔4〕。GBP1基因具有抗病原微生物、抗腫瘤等多種生物特性。張娜等〔5〕研究指出沉默GBP1基因可以促進宮頸癌細胞的增殖及遷移。Sp是調控腫瘤細胞生長的重要轉錄因子，異常表達的Sp可以正向調節腫瘤增殖、遷移。袁淵等〔6〕研究證實Sp可以通過上調Cyclin D表達而進一步促進宮頸癌細胞增殖。EZH2的表達陽性率隨腫瘤分化程度增高而降低，可促進腫瘤細胞的增殖及浸潤轉移。Caveolin-1基因是一種抑癌基因，被認為與腫瘤的預后獨立相關。研究發現，高表達的caveolin-1可以將腫瘤細胞阻滯于G0/G1期，降低增殖指數〔7〕。本研究結果說明宮頸癌患者中存在抑癌基因的低表達、促癌基因的高表達。

侵襲基因表達量是腫瘤惡性程度判定的可靠指標，Prdx4、Sox2、Rab11、RbAp48與宮頸癌發生發展密切相關的侵襲基因〔8〕。袁偉燕等〔9〕研究發現Prdx4表達量上調后，宮頸癌患者細胞的遷移、侵襲能力增強。Sox2是胚胎干細胞的重要轉錄核因子，高表達于肺癌、食管癌、骨腫瘤中。Rab11屬于Rab小分子GTP家族，已經證實與乳腺癌、直腸癌的侵襲特性相關〔10〕。闞巖巖等〔11〕研究發現，Rab11基因下調可以抑制宮頸癌Hela細胞的遷移及侵襲。RbAp48基因參與染色體裝配、細胞分化發育、肝細胞自我更新等，近年發現其參與多種腫瘤的發生發展。鐘晶晶等〔12〕發現，下調RbAp48基因表達可以有效抑制宮頸癌MS751細胞株的侵襲能力。本研究證實了宮頸癌細胞的高侵襲性。

上述增殖、侵襲基因的異常表達是宮頸癌發生發展的本質原因，其具體異常表達程度可以客觀反映宮頸癌病情。血清OPN、sE-cadherin在宮頸癌患者中的異常表達已經被明確，其與患者具體病情之間的相關關系目前仍未明確，本研究結果提示宮頸癌患者血清OPN、sE-cadherin含量與具體病情嚴重程度直接相關。

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8Raju I，Kaushal GP，Haun RS.Epigenetic regulation of KLK7 gene expression in pancreatic and cervical cancer cells〔J〕.Biol Chem，2016；397(11)：1135-46.

9袁偉燕，張 麗，石紅琴，等.Prdx4蛋白表達改變對HeLa細胞遷移和侵襲的影響〔J〕.中國病理生理雜志，2016；32(4)：637-40.

10Fjeldbo CS，Julin CH，Lando M，etal.Integrative analysis of DCE-MRI and gene expression profiles in construction of a gene classifier for assessment of hypoxia-related risk of chemoradiotherapy failure in cervical cancer〔J〕.Clin Cancer Res，2016；22(16)：4067-76.

11闞巖巖，張建華，周 敏，等.下調Rab11基因對宮頸癌HeLa/SiHa細胞侵襲遷移的影響及機制探討〔J〕.中國癌癥雜志，2016；26(3)：238-41.

12鐘晶晶，楊旭銳，麥梅清，等.下調RbAp48表達可抑制人宮頸癌MS751細胞株的遷移侵襲能力〔J〕.南方醫科大學，2015；35(11)：1564-7.

〔2017-01-09修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

R737.33

A

1005-9202(2017)18-4562-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.18.059

張 燕(1980-)，女，主治醫師，主要從事婦產科研究。