川金絲猴金黃色葡萄球菌與毛首鞭形線蟲混合感染的診治研究

張志忠　王根紅　易剛

摘要 2016年2月24日，安徽省某動(dòng)物園川金絲猴出現(xiàn)貧血、腹瀉繼而死亡的病例。根據(jù)臨床癥狀、病理剖檢疑似為細(xì)菌感染。通過細(xì)菌分離、基因序列比對(duì)、藥敏試驗(yàn)和寄生蟲檢查，結(jié)果表明，該病例為金黃色葡萄球菌和毛首鞭形線蟲混合感染。

關(guān)鍵詞 川金絲猴；金黃色葡萄球菌；毛首鞭形線蟲；診治

中圖分類號(hào) S858.9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2017）15-0235-01

川金絲猴為我國特產(chǎn)的珍稀物種，廣泛分布于四川、陜西、貴州、云南、西藏等地森林中。多年來國內(nèi)外專家學(xué)者十分重視和關(guān)注川金絲猴的研究，在疾病病因等方面進(jìn)行了大量的報(bào)道。金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，可產(chǎn)生多種毒素，腸毒素類金黃色葡萄球菌可引起猴胃腸炎、食物中毒、腹瀉等癥狀[1]。川金絲猴對(duì)毛首鞭形線蟲（以下簡稱鞭蟲）極其敏感，重度感染可導(dǎo)致患猴精神不振、體溫升高、稀便腹瀉、消瘦貧血最后衰竭而死[2]。臨床上常見金黃色葡萄球菌或毛首鞭形線蟲單一感染[3-4]，對(duì)于混合感染的病例極其少見。本文就安徽省某動(dòng)物園一例川金絲猴金黃色葡萄球菌與毛首鞭形線蟲混合感染的病例進(jìn)行研究報(bào)道，以期為此類病癥的診治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 病例來源。安徽省某動(dòng)物園。

1.1.2 主要試劑與儀器。瓊脂糖購自青島海博生物科技有限公司；革蘭氏染液購自北京索萊寶科技有限公司；氨芐西林、頭孢呋辛、青霉素等藥敏紙片，均購自杭州微生物試劑有限公司。輔酶購自上海生工生物工程股份有限公司。

1.2 研究方法

1.2.1 病死川金絲猴剖檢及病原菌的分離。將死亡川金絲猴進(jìn)行剖解觀察，采集病料。無菌條件下剪取肝臟、肺臟，用接種環(huán)取心包液接種于輔酶培養(yǎng)基上，劃線分離；于37 ℃培養(yǎng)24 h后，挑取連續(xù)單個(gè)菌落于輔酶培養(yǎng)基中進(jìn)行純化。將純化后的菌落進(jìn)行革蘭氏染色后，接種于TSB培養(yǎng)基中，繼續(xù)在搖床37 ℃培養(yǎng)24 h。

1.2.2 細(xì)菌藥敏試驗(yàn)。將病料中分離純化的細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，用常規(guī)藥敏紙片法[5]進(jìn)行。所用藥敏試驗(yàn)的試紙種類如下：青霉素類（青霉素、氨芐西林）；頭孢菌素類（頭孢他啶、頭孢氨芐、頭孢曲松、頭孢哌酮、頭孢呋辛、頭孢唑林鈉、頭孢拉定）；磺胺類（復(fù)方新諾明）；酰胺醇類（氯霉素）。試驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參照美國臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（CLSD）指定標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.3 細(xì)菌16S rDNA 檢測。挑取連續(xù)單個(gè)菌落到TSB培養(yǎng)基中，于37 ℃搖菌過夜，按常規(guī)方法提取細(xì)菌DNA模板。經(jīng)16S rDNA通用引物進(jìn)行特異性PCR擴(kuò)增后，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測。將PCR產(chǎn)物送至上海桑尼生物公司測序，測序結(jié)果到NCBI網(wǎng)站進(jìn)行比對(duì)。

1.2.4 寄生蟲檢查。取川金絲猴胃部內(nèi)容物及腸內(nèi)容物進(jìn)行寄生蟲檢查。

2 結(jié)果與分析

2.1 剖檢病變觀察

腹腔內(nèi)有腹水，肝臟邊緣腫大，半側(cè)肺臟淤血，見圖1。心臟外觀正常，心肌疲軟，見圖2。呼吸道正常。胃內(nèi)容物中發(fā)現(xiàn)灰白色線狀寄生蟲。其他組織臟器無明顯肉眼可見病變。

2.2 病原菌分離與檢測試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 細(xì)菌分離與培養(yǎng)。細(xì)菌再輔酶培養(yǎng)基上均為濕潤、光滑、隆起、邊緣整齊的圓形菌落；在TSB培養(yǎng)基37 ℃搖床培養(yǎng)24 h呈均勻渾濁樣。

2.2.2 革蘭氏染色鏡檢。顯微鏡下觀察可見大量藍(lán)紫色球菌，多呈雙球狀排列。

2.2.3 細(xì)菌藥敏試驗(yàn)。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，該菌對(duì)氨芐西林、頭孢呋辛、頭孢唑啉極敏感、對(duì)頭孢氨芐、青霉素、頭孢哌酮、頭孢拉定、頭孢曲松中度敏感，對(duì)頭孢他啶、氯霉素低度敏感。

2.2.4 序列比對(duì)。根據(jù)序列比對(duì)結(jié)果可確定該株細(xì)菌為金黃色葡萄球菌。

2.3 寄生蟲檢查結(jié)果

顯微鏡觀察在胃內(nèi)容物中發(fā)現(xiàn)毛首鞭形線蟲成蟲，腸內(nèi)

容物中發(fā)現(xiàn)毛首鞭形線蟲卵囊，如圖3、4所示。

3 結(jié)論

經(jīng)過臨床檢查和試驗(yàn)診斷，確診該病例死亡原因?yàn)榻瘘S色葡萄球菌和毛首鞭形線蟲混合感染。野生靈長類動(dòng)物的寄生蟲相關(guān)研究表明，圈養(yǎng)川金絲猴感染毛首鞭形線蟲的概率極高，且存在重復(fù)感染的現(xiàn)象，近年來時(shí)有報(bào)道。可定期對(duì)其糞便進(jìn)行顯微鏡鏡檢，加強(qiáng)糞便中寄生蟲檢查力度，定期做好藥物驅(qū)蟲。尤其值得注意的是根據(jù)川金絲猴的繁殖周期選擇藥物，防止因藥物原因?qū)е聭言心负锪鳟a(chǎn)。在川金絲猴肝臟、肺臟中均有革蘭氏陽性金黃色葡萄球菌，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇敏感類藥物，按劑量及時(shí)給藥。可適當(dāng)延長用藥時(shí)間，鞏固療效并減少耐藥性產(chǎn)生。

根據(jù)川金絲猴生理特性和習(xí)性，按季節(jié)性選擇多種食物，每天按時(shí)投喂食物，保證粗纖維類飼料比例，減少精飼料的投喂，以增強(qiáng)動(dòng)物抵抗力，可以有效避免疾病發(fā)生[6]。

定期對(duì)籠舍進(jìn)行消毒，避免滋生細(xì)菌。對(duì)舍內(nèi)其他動(dòng)物應(yīng)加強(qiáng)疾病防治，防止此類情況再次發(fā)生。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 張向鵬.貴州地區(qū)3種園養(yǎng)野生動(dòng)物常見疾病的調(diào)查及防治對(duì)策[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2003.

[2] 壽曉玲，王才益，杜愛芳.杭州動(dòng)物園川金絲猴消化道疾病的防控研究[J]. 浙江畜牧獸醫(yī)，2014（3）：41-42.

[3] 汪乾坤.神農(nóng)架川金絲猴常見病流行病學(xué)初步研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2015.

[4] 鄧家波，牛李麗，王強(qiáng).川金絲猴金黃色葡萄球菌感染的診治一例[J].四川動(dòng)物，2008（3）：436.

[5] 李波.中國部分動(dòng)物園靈長類動(dòng)物胃腸道寄生蟲與大腸桿菌的調(diào)查研究[D].成都：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

[6] 李明杰.川金絲猴的飼養(yǎng)管理與疾病防治綜述[J].野生動(dòng)物，2012，33（6）：350-353.endprint