長春新堿對人舌癌Tca8113細胞生物學行為的影響

明智慧 單 笑 韓昕彤

(吉林大學第一醫院口腔科，吉林 長春 130021)

長春新堿對人舌癌Tca8113細胞生物學行為的影響

明智慧 單 笑1韓昕彤1

(吉林大學第一醫院口腔科，吉林 長春 130021)

目的探討外源性長春新堿(VCR)對人舌癌細胞株Tca8113的生物學行為。方法應用細胞培養技術觀察不同濃度的VCR對Tca8113細胞的增殖抑制作用，MTT法檢測Tca8113細胞的增殖抑制率，流式細胞儀檢測不同濃度的VCR對Tca8113細胞增殖周期進程的影響，電子顯微鏡觀察 Tca8113細胞亞細胞結構改變。結果不同濃度的VCR對Tca8113細胞增殖均有抑制作用，其細胞增殖數量顯著低于對照組，抑制率呈明顯的劑量依賴性。流式細胞儀結果顯示VCR主要作用于細胞周期的M期，從而使細胞有絲分裂停止于細胞中期，促進細胞凋亡，電子顯微鏡下可見VCR作用后的Tca8113細胞線粒體、紡錘體、微管等結構改變，可見凋亡小體。結論VCR抗腫瘤效能主要取決于自身的藥物濃度及作用時間、給藥途徑等，以提高其VCR的生物利用度。

Tca8113細胞；長春新堿；細胞周期；凋亡

舌癌是口腔惡性腫瘤最常見的類型，發病率呈逐年上升趨勢，且有年輕化傾向〔1〕。隨著醫療技術的提升，越來越多的靶向藥物投入到臨床實驗中，腫瘤的治療不再墨守成規，取而代之的是有針對性的個性化治療方案。在腫瘤細胞學的發展過程中，越來越多的學者從細胞水平對治療方案有效性進行評估，這將成為日后評價療效的重要模式〔2〕。本研究探討長春新堿(VCR)體外對Tca8113細胞增殖抑制率、細胞周期進程及凋亡率。

1 材料與方法

1.1細胞及試劑 人舌鱗狀細胞癌Tca8113細胞株購于中國科學院上海細胞庫，噻唑藍(MTT)試劑、RPMI1640培養基購于美國Sigma公司，VCR由我院藥劑科提供(北京四環制藥有限公司)。

1.2MTT比色法 參照文獻〔3〕進行，略加改進。

1.3流式細胞術 細胞培養及分組同1.2，本處操作用25 ml培養瓶替代96孔塑料培養板。

1.4透射電子顯微鏡技術 細胞培養及分組同1.3，完成上述操作后，分別收集不同濃度的VCR作用后的Tca8113細胞懸液于錐形離心管內，離心沉淀1 000 r/10 min，棄去上清，將細胞沉淀物經2.5%戊二醛前固定，1%鋨酸后固定，梯度酒精脫水，環氧樹脂包埋，超薄切片，醋酸鉛-鈾雙重染色，透射電子顯微鏡觀察。

1.5統計學方法 應用SPSS17.0軟件行t檢驗。

2 結 果

2.1MTT結果 0、10、20、40 μg/ml組A值1.34±0.15、1.12±0.11、0.83±0.18、0.72±0.22；抑制率分別為16.4%、38.1%、46.3%。不同濃度的VCR對Tca8113細胞增殖均有抑制作用，且呈正相關性，與對照組相比差異顯著(P<0.01)。

2.2透射電子顯微鏡結果 不同濃度VCR藥物作用Tca8113細胞后，可見胞質內有存在大量空泡，存在明顯的線粒體腫脹，細胞和染色質可見凝集及趨邊，能見到凋亡小體。見圖1。

圖1 透射電子顯微鏡結果(×5 000)

2.3流式細胞術結果 不同濃度的VCR藥物作用Tca8113細胞后，G0/G1期細胞增多，S期細胞減少，G2/M期細胞相對增多(P<0.05,P<0.01)。見表1。

表1 不同濃度VCR對Tca8113細胞周期進程的影響及凋亡率

與0 μg/ml組比較：1)P<0.05，2)P<0.01

3 討 論

VCR是從長春花葉中提取出來的，且有較強抗腫瘤活性的二聚吲哚類生物堿，是重要的抗腫瘤藥物。MTT實驗可準確反映VCR藥物作用后Tca8113細胞的活化狀態和活細胞數量，具有一定的客觀性。線粒體作為半自主細胞器，在細胞能量代謝和氧自由基生成過程中扮演重要角色，極易受到外界因素的損傷，線粒體功能改變，從而導致細胞增殖受抑。

流式細胞儀結果顯示，不同濃度的VCR對Tca8113細胞增殖周期各時相均有不同程度的抑制作用。細胞周期是較固定的且易受各種細胞因子影響及調控〔4〕，一旦發生某環節的調控失常，即容易發生功能學及形態學的明顯改變，結果顯示不同濃度的VCR誘導Tca8113細胞具有一定的濃度依賴性，均表現為G0/G1期細胞比例增加，S期細胞減少，以上導致G2/M期的細胞數相對增多，細胞損傷一般表現為G2/M期細胞增多，細胞凋亡率增多能證明以上結論。文獻〔5〕報道，VCR屬于細胞周期特異性藥物，主要作用于細胞周期的M期，通過與微管蛋白的作用，導致微管解聚，從而破壞細胞有絲分裂以及紡錘體形成，這樣導致細胞有絲分裂停止于中期，促使細胞凋亡，使細胞增殖得到抑制。

綜上所述，VCR對Tca8113細胞作用具有一定的時間濃度依賴性。為了提高VCR的抗癌效能、減輕不良反應，在探索新的藥物劑型時應以降低毒性為前提，通過增加劑量、合理延長藥物作用時間對VCR進行修飾改造，從而達到提高療效以及提升臨床順應性的目的。

1劉愛芹，李莎莎，周 旋，等.信號傳導及激活因子調控微RXA-21影響人舌鱗狀細胞癌細胞侵襲能力的體外研究〔J〕.中華口腔醫學雜志，2013；18(9)：539-44.

2蔣烈浩，凌志強.miR-21與頭頸部惡性腫瘤〔J〕.國際腫瘤學雜志，2014；41(10)：750-2.

3馮青杰，孫立群，騰 博，等.雷公藤內酯醇聯合熱療對Hep-2細胞的增殖抑制作用〔J〕.吉林大學學報(醫學版)，2009；35(5)：862-5.

4Pratheeshkumar P，Kuttan G.Oleanolic acid induces apoptosis by modulating p53，Bax, Bcl-2 and caspase-3 gene expression and regulates the activation of transcription factors and cytokine profile in B16F〔J〕.J Environ Pathol Toxicol Oncol，2011；30(1)：21-31.

5Silvenman JA，Deitcher SR.Marqibo(vincristine sulfate liposome injection) improves the pharmacokinetics and pharmacodynamics of vincristine〔J〕.Cancer Chemother Pharmacol，2013；71(3)：555-64.

〔2016-12-25修回〕

(編輯 袁左鳴)

韓昕彤(1977-)，女，副主任護師，主要從事護理研究。

明智慧(1967-)，女，主管護師，主要從事護理研究。

R739.8

A

1005-9202(2017)17-4206-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.17.016

1 吉林大學第一醫院透析中心