P16免疫組織化學檢測評價高級別宮頸上皮內瘤變錐形切除后殘留的臨床價值

王興民，傅錦堅，龐 朗，呂健勇

(廣西壯族自治區柳州市婦幼保健院:1.病理科；2.檢驗科 545001)

P16免疫組織化學檢測評價高級別宮頸上皮內瘤變錐形切除后殘留的臨床價值

王興民1，傅錦堅2△，龐 朗1，呂健勇1

(廣西壯族自治區柳州市婦幼保健院:1.病理科；2.檢驗科 545001)

目的 探討P16免疫組織化學檢測聯合常規病理評判高級別宮頸上皮內瘤變(CIN)錐形切除后切緣病灶殘留的可行性。方法 選擇2014年1月至2016年5月到該院就診的CIN行宮頸錘形切除的患者，根據患者的意愿分為P16免疫組織化學檢測結合常規病理評價組和常規病理評價組評判切緣是否存在病灶殘留。切緣殘留的患者按照臨床指南給予相應處理，在切緣無殘留后6個月進行宮頸液基誘層細胞學(TCT)檢測隨訪。以隨訪結果為金標準，分析兩組靈敏度和準確率。結果 P16免疫組織化學檢測結合常規病理評價組104例患者術后6個月TCT檢查均為陰性，單純常規病理評價組112例患者術后6個月TCT檢查發現7例患者陽性。P16免疫組織化學檢測結合常規病理評價組的靈敏度和準確率均達到100%，顯著高于常規病理評價組。結論 P16免疫組織化學檢測結合常規病理能夠準確地判斷高級別CIN錐形切除患者的切緣情況。

P16；宮頸錐切；腫瘤,殘余；宮頸液基細胞學檢測

宮頸癌已成為危害女性生殖健康和生命健康的常見疾病之一。近年來，宮頸癌發病率逐年增加，并呈年輕化趨勢[1]。因此，早期宮頸癌篩查對女性健康具有重要意義。目前，華夏病理網和安必平公司對基層醫生進行相關培訓，同時國家衛生和計劃生育委員會對中國廣大農村進行“兩癌篩查”專項扶持[2-3]，這些工作已取得了顯著的成就，使宮頸癌成為一種可以有效防治的惡性腫瘤。

宮頸癌是由宮頸上皮內瘤變(cervical intrarpithelial neoplasia,CIN)持續發展的結果。隨著科技的發展和醫療衛生的進步，CIN的檢出率逐步增加[2-3]。目前，為了降低宮頸癌的發生率，對活檢病理診斷為高級別CIN(CIN Ⅱ、CIN Ⅲ)的患者進行宮頸錐形切除，醫療行業已取得廣泛的共識[4]。但是高級別CIN殘留是宮頸癌的重要危險因素，嚴重影響了宮頸錐形切除的治療效果[5-6]。由于臨床醫生進行宮頸錐形切除術時對宮頸組織過度鉗夾及燒灼增加了病變殘留的判定難度。因此，如何準確地判定宮頸錐形切除標本是否有高級別CIN殘留成為臨床醫生關注的難題。近年來，隨著科技的進步，人們發現P16免疫組織化學染色可以提高CIN的診斷準確率[7-8]。2014年WHO女性生殖系統分類中，在宮頸鱗狀細胞癌前病變中推薦使用P16免疫組織化學染色將鱗狀上皮內病變進行兩級分類，即低級別鱗狀上皮內瘤變(LSIL)和高級別鱗狀上皮內瘤變(HSIL)[9]。但P16免疫組織化學檢測是否可以提高對宮頸錐形切除標本殘留的診斷準確率，特別是過度鉗夾及燒灼的標本，目前尚無相關報道。本研究采用P16免疫組織化學檢測評價宮頸高級別病變錐形切除后是否殘留，探討P16免疫組織化學檢測能否降低宮頸癌的發病率。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年1月至2016年5月到本院就診的高級別CIN患者，進行錐形切除治療并對錐形切除標本送檢病理。對患者進行知情同意告知，根據患者的意愿分為P16免疫組織化學檢測結合常規病理評價組[患者104例，平均年齡(31.5±6.3)歲]和常規病理評價組[患者112例，平均年齡(29.3±8.1)歲]。對病理診斷病灶殘留的患者進行相關臨床治療，并隨訪6個月。納入標準：年齡大于18歲；均有性生活史；無婦科腫瘤手術及相關治療史；整個研究過程無妊娠狀態；無免疫、內分泌系統疾病及相關藥物使用史；整個研究過程中資料完善。排除標準：隨訪期間存在陰道炎等生殖系統疾?。诲F形切除標本發現微浸潤或癌者；因其他疾病，如子宮肌瘤、子宮脫垂等需行全子宮切除的患者。

1.2 方法

1.2.1 宮頸液基薄層細胞學(TCT)檢查方法 用特制的宮頸刷完全打開，旋轉360°，收集宮頸管及宮頸外口的脫落細胞，裝入保存液瓶中，采用全自動細胞制片法制片并進行巴氏染色，最后在顯微鏡下進行觀察[10-11]。

1.2.2 組織病理學診斷 將高級別CIN錐形切除標本進行12點取材，經脫水、包埋、切片、蘇木素-伊紅(HE)染色等一系列制片過程，最后顯微鏡下進行診斷。根據患者的知情同意情況，對切緣燒灼、鉗夾過度、懷疑有殘留的標本在患者同意行P16免疫組織化學檢測時進行免疫組織化學檢測(圖1)，根據常規病理和免疫組織化學結果判斷切緣是否干凈；對患者不同意行P16免疫組織化學檢測時只采用常規病理判定切緣是否殘留。

1.2.3 隨訪 高級別CIN錐形切除標本病理診斷顯示切緣干凈后6個月進行TCT復查。TCT提示標本滿意，見可疑細胞進行陰道鏡檢查并活檢送病理檢查。

1.2.4 效果評判標準 術后6個月TCT復查陽性(見可疑細胞)且組織病理證實有CIN病變者為病變殘留陽性；術后6個月TCT復查陰性(未見可疑細胞)，為錐形切除治療無殘留陰性。以6個月隨訪結果為金標準，比較P16免疫組織化學檢測聯合常規病理與單純常規病理評判宮頸錐形切除標本的靈敏度、特異度、準確率及臨床符合率。

常規病理顯示細胞核異型明顯，切緣見可疑病灶殘留。P16免疫組織化學P16呈彌漫的強陽性表達，可以明確診斷出病灶殘留

圖1 高級別CIN錐形切除標本切緣殘留(×200)

2 結 果

P16免疫組織化學檢測聯合常評判組與常規平常組對宮頸高級別CIN錐形切除標本切緣殘留的診斷：納入研究的高級別CIN患者術后6個月進行TCT或/和活檢病理復查。在P16免疫組織化學檢測聯合常規病理評判組，術后6個月復查104例均為陰性；但在單純常規病理評判組中，術后6個月復查112例中7例(6.25%)診斷為陽性,105(93.75%)例診斷為陰性，提示有錐形切除殘留。P16免疫組織化學檢測聯合常規病理評判組的患者術后6個月復查陽性率顯著低于單純常規病理評判組(χ2=6.718,P<0.05)；P16免疫組織化學聯合常規病理判定宮頸高級別CIN錐形切除標本切緣殘留的靈敏度、準確率、臨床符合率高于單純常規病理組，特異度低于單純常規病例組，見表1。

表1 兩組方法對宮頸CIN錐形切除標本切緣的診斷[n(%)]

3 討 論

P16是1994年美國冷泉港實驗室Kamb等發現的新型抑癌基因，是一種周期依賴性蛋白激酶抑制劑，對細胞生長周期發揮抑制作用。已有研究證實P16與肺癌、乳腺癌、腦腫瘤、骨腫瘤、皮膚癌、膀胱癌、腎癌、卵巢癌、淋巴瘤、惡性黑色素廇的發病有關[12-14]。P16在宮頸癌和CIN中高表達，是由人乳頭瘤病毒(HPV)的早期基因E7蛋白通過抑制Rb蛋白釋放的E2F而直接誘導P16產生[15-17]。目前，P16被認為是CIN和宮頸癌診斷敏感度和特異度均較高的標志物，作為宮頸組織病理和宮頸細胞病理的補充診斷已廣泛應用于臨床[18]。在本項研究中，P16免疫組織化學檢測被用于宮頸錐形切除標本切緣燒灼、鉗夾過度、懷疑有殘留時的病灶輔助診斷。宮頸癌是CIN病情進展的結果，對CIN的有效治療是降低宮頸癌發病率的重要手段。目前，對CIN，尤其是高級別CIN(CIN Ⅱ、CIN Ⅲ)的患者進行宮頸錐形切除是有效的治療手段之一，但宮頸錐形切除標本的切緣病灶殘留仍是影響治療效果和宮頸病變復發的重要因素。在臨床工作中，宮頸錐形切除標本通常存在切緣燒灼、鉗夾過度等問題。這些問題增加病理醫生的切緣診斷難度，提高了切緣殘留風險[19]。本研究采用P16免疫組織化學檢測降低病理醫生的診斷難度，提高診斷準確率。

TCT檢查是一種無創的宮頸癌及癌前病變篩查方法，是醫學界公認的宮頸癌篩查方法。年滿18歲且有性生活的女性進行定期宮頸癌篩查已在醫學界達成廣泛共識。對于CIN已錐形切除的患者，TCT檢查亦是一種判斷病灶殘留和復發的方法[20]。在本項研究中，在宮頸錐形切除后患者進行TCT隨訪，采用P16免疫組織化學聯合常規病理評判組104例患者隨訪均為陰性，靈敏度和準確率均達到100%。但在常規病理評判組112例患者有7例隨訪為陽性，提示常規病理對宮頸錐形切除標本的切緣評判可能存在錐形切除切緣病灶殘留漏報情況。

綜上所述，P16免疫組織化學檢查對宮頸病變的診斷具有較高的敏感度和特異度，是宮頸病變病理診斷的一種輔助手段。對錐形切除標本存在切緣燒灼、鉗夾過度等問題時，P16免疫組織化學聯合常規病理是評判切緣有無殘留的一種有效方法。對常規病理評判切緣干凈患者進行定期TCT篩查可以對宮頸癌防治起到防微杜漸的作用。

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The value of P16 immunohistochemical detection in judge residue of patients with conization in high grade intraepithelial neoplasia*

WangXingmin1,FuJinjian2△,PangLang1,LvJianyong1

(1.DepartmentofPathology;2.DepartmentofClinicalLaboratory,LiuzhouMatemityandChildHealthcareHospital,Liuzhou,Guangxi545001,China)

Objective To investigate the feasibility of P16 immunohistochemistry combined with routine pathology in judging the residual lesion of high grade cervical intraepithelial neoplasia.Methods Patients with cervical conization for high grade cervical intrapithelial neoplasia in this hospital from January 2014 to May 2016 were chose and divided into P16 immunohistochemical detection combined with pathological diagnosis group and pathological evaluation group according to patient′s motivation.Patients with residual margins were treated in accordance with the clinical guidelines and TCT was followed up for 6 months after no margin.Then sensitivity and accuracy of two group were analyzed by gold standard of follow-up results.Results 104 patients in P16 immunohistochemical detection combined with pathological diagnosis group were negative in TCT test after 6 month of following up after surgery.However,at the time of 6 months follow-up after surgery,7 patients of 112 patients have been diagnosed with positive by TCT in pathological evaluation group.The Sensitivity and accuracy in P16 immunohistochemical detection combined with pathological diagnosis group were 100% which were higher than pathological evaluation group.Conclusion P16 immunohistochemical detection combined with conventional pathology can accurately diagnose the cervical cutting edge of conization.

P16;cervical conization;neoplasm,residual;thinprep cytology test

柳州市科學研究與技術開發計劃(2014J030418)。

王興民(1982-)，病理醫師、助理研究員，博士，主要從事病理診斷研究。

△通信作者，E-mail:fujinjianaa@126.com。

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.23.015

R737.33

A

1671-8348(2017)23-3216-03

2017-03-22

2017-04-23)

論著·臨床研究