孫 楊,秦文婧,黃水金,秦厚國
(江西省農業科學院 植物保護研究所,江西 南昌 330200)
不同蘆筍品種對薊馬抗性機制研究
孫 楊,秦文婧,黃水金*,秦厚國
(江西省農業科學院 植物保護研究所,江西 南昌 330200)
為了明確蘆筍品種對薊馬的抗性機制,以4個不同抗性水平的蘆筍品種為試材,測定并分析了蘆筍植株表皮蠟質、可溶性糖、游離脯氨酸、總酚、單寧酸和類黃酮含量與其對薊馬抗性的關系。結果顯示:抗性蘆筍品種Uc157的表皮蠟質、游離脯氨酸、總酚和單寧酸含量分別為4.39 mg/g FW、82.51 μg/g FW、5.38 mg/g FW和2.48 mg/g FW,均顯著高于感蟲品種和高感品種的;Uc157的可溶性糖和類黃酮含量顯著高于感蟲品種B25和高感品種臺南3號的,但與感蟲品種碩豐之間無顯著差異;蘆筍品種的抗薊馬性與表皮蠟質含量顯著相關,與單寧酸含量具有一定的相關性,而與總酚、可溶性糖、游離脯氨酸和類黃酮含量間的相關性均不顯著。
蘆筍;薊馬;抗性;生化物質
蘆筍(AsparagusofficinalisLirm),又名石刁柏,為百合科天門冬屬宿根性多年生草本植物,以嫩莖供食,具有極高的營養保健價值。蘆筍嫩莖中含有多種活性成分,具有防癌、抗癌、降低血脂、預防冠心病等功效,也是抗疲勞、增強體力的營養滋補品,在國際上享有“蔬菜之王”的美稱[1]。近年來,中國蘆筍產業發展迅速,全國種植面積已超過10萬hm2,成為世界第一大蘆筍生產國。薊馬是為害蘆筍的主要害蟲之一,薊馬的成蟲、若蟲均可銼吸蘆筍幼苗、嫩莖的汁液,使擬葉、嫩枝焦黃,向上反卷,節間縮短,受害嚴重的枝葉扭曲,植株枯死。目前對蘆筍薊馬的防治主要是藥劑防治[2],但化學農藥的過度使用一方面導致害蟲抗藥性上升,另一方面造成蘆筍農藥殘留量超標而嚴重影響食品安全和經濟效益。因此,尋求有效防治薊馬的策略和方法已成為當前亟待進行的一個重要課題。
植物抗蟲品種的培育與選用是害蟲治理系統中的重要組成部分。只有選用抗性品種和通過各種途徑提高作物的抗蟲性,并協調應用其它防治措施,才能持續地控制害蟲的發生和發展,取得良好的防治效果。此外,種植抗蟲品種防治害蟲,不需要額外增加設施和投資,是一種廣義的生物防治方法,可避免因施用化學農藥而引起的殘毒和對環境的污染。因此,作物抗病蟲育種愈來愈受到重視。有關作物對薊馬抗性的報道主要集中在桑樹[3]、苜蓿[4]、棉花[5]、辣椒[6]、洋蔥[7]、菊花[8]、大豆[9]和卷心菜[10]等作物。迄今有關蘆筍對薊馬的抗性研究尚未見報道。本研究測定并分析了蘆筍植株表皮蠟質、可溶性糖、游離脯氨酸、總酚、單寧酸和類黃酮含量與蘆筍抗薊馬性的相關性,以期為蘆筍抗蟲品種的選育以及利用抗蟲品種控制薊馬危害提供理論依據。
1.1 供試蘆筍品種
薊馬抗性品種UC157、感蟲品種碩豐和B25、高感品種臺南3號,均由江西省農業科學院蔬菜研究所蘆筍課題組提供。
1.2 主要試劑與儀器
福林試劑(folin)(天津市光復精細化工研究所)、五倍子酸(沒食子酸)(天津市大茂化學試劑廠)、鄰二氮菲(1,10-菲咯啉,C12H8N2·H2O)(西隴化工股份有限公司)、蘆丁(維生素P)標準品(中國科學院成都生物研究所);其它試劑均為國產分析純。高速離心機(美國貝克曼)、Unic UV-2000MFZ分光光度計(上海寰熙醫療器械有限公司)。
1.3 蘆筍植株相關成分的測定方法
1.3.1 表皮蠟質含量的測定 參照Massaquoi(1987)的方法[11]。選取處于營養生長盛期的同一部位的蘆筍組織(擬葉、嫩頭、莖稈) 8 g,用重蒸水洗凈,吸水紙吸干、剪碎后放入燒杯中,加入150 mL氯仿浸泡2 min,然后將提取液過濾到已知重量的蒸發皿中,在通風柜中使氯仿揮發完畢,再次稱重。減去蒸發皿的重量,即為蠟質含量。
1.3.2 可溶性糖含量的測定 參照陳克克(2009)的方法[12]。取各蘆筍種質材料的新鮮嫩枝葉并剪碎,稱取碎枝葉約0.5 g置于30 mL超純水中,沸水浴保持1 h。冷卻至室溫后在12000 r/min條件下離心10 min,小心收集上清液并用超純水定容至100 mL,備用。取提取液200 μL于10 mL刻度試管中,依次加入1.8 mL超純水、1 mL 9%苯酚溶液,隨后在20 s內滴入5 mL的濃硫酸,并緩慢搖勻,靜置反應30 min。以空白(超純水+試劑)為對照,在比色皿中加入2 mL比色液于485 nm波長讀取吸光度值,根據標準曲線和樣品吸光度值計算可溶性糖含量。重復3次。
1.3.3 總酚含量的測定 參照胡桂馨(2007)的方法[13]。取各蘆筍種質材料的新鮮嫩枝葉并剪碎。稱取碎枝葉約0.5 g置于30 mL超純水中,沸水浴保持1 h。冷卻至室溫后在12000 r/min條件下離心10 min,小心收集上清液并用超純水定容至100 mL,備用。在試管中依次加入1 mL提取液、1 mL福林試劑和4 mL飽和碳酸氫鈉并緩慢搖勻。以空白(蒸餾水+試劑)為對照,在比色皿中加入2 mL比色液于760 nm波長讀取吸光度值,根據標準曲線和樣品吸光度值計算總酚含量。重復3次。
1.3.4 單寧酸含量的測定 參照李水清(2009)的方法[14]并加以適當改進。取各蘆筍種質材料的新鮮嫩枝葉并剪碎,稱取碎枝葉約0.5 g置于30 mL超純水中,沸水浴保持1 h。冷卻至室溫后在12000 r/min條件下離心10 min,小心收集上清液并用超純水定容至100 mL,備用。在25 mL離心管中加入提取液750 μL和1.5 mL鐵(Ⅲ)溶液,混勻后,于80 ℃下水浴25 min。冷卻至室溫后依次加入2 mL緩沖液、3.0 mL鄰二氮菲溶液和0.5 mL EDTA溶液,靜置10 min。在比色皿中加入2 mL比色液于510 nm波長讀取吸光度值,根據標準曲線和樣品吸光度值計算單寧酸含量。重復3次。
1.3.5 類黃酮含量的測定 參照周春華(2007)的方法[15]。取各蘆筍種質材料的新鮮嫩枝葉并剪碎,稱取碎枝葉約0.5 g置于30 mL超純水中,沸水浴保持1 h。冷卻至室溫后在12000 r/min條件下離心10 min,小心收集上清液并用超純水定容至100 mL,備用。在25 mL的離心管中加入提取液3 mL和0.5 mL 5%亞硝酸鈉溶液并搖勻,靜置6 min后再加入0.5 mL 10%硝酸鋁溶液,搖勻并靜置6 min;最后加入4 mL 4%的氫氧化鈉和2 mL 60%的乙醇,搖勻并靜置12 min。以空白(蒸餾水+試劑)為對照,在比色皿中加入2 mL比色液于502 nm波長讀取吸光度值,根據標準曲線和樣品吸光度值計算類黃酮含量。重復3次。
1.3.6 脯氨酸含量的測定 參照胡桂馨(2007)的方法[13]。取各蘆筍種質材料的新鮮嫩枝葉并剪碎,稱取碎枝葉約0.5 g置于10 mL 3%的磺基水楊酸溶液中,沸水浴40 min。冷卻至室溫后在12000 r/min條件下離心10 min,小心收集上清液并用超純水定容至100 mL,備用。在25 mL離心管中加入提取液2 mL、2 mL冰醋酸和3 mL 2.5%茚三酮溶液并混勻,沸水浴40 min,冷卻至室溫后加入5 mL甲苯并充分振蕩以萃取紅色物質。靜置,待分層后,吸取2 mL上層紅色液體于520 nm波長讀取吸光度值,根據標準曲線和樣品吸光度值計算脯氨酸含量。重復3次。
1.4 數據分析
采用DPS軟件進行統計分析,應用Duncan氏新復極差法進行不同抗性蘆筍品種間物質含量的差異顯著性檢驗。應用Excel 2010軟件調用Pearson相關性程序分析各物質含量與蘆筍薊馬抗性的相關性。
2.1 不同蘆筍品種的表皮蠟質含量
測定結果見圖1。從圖1可以看出:抗性品種Uc157的表皮蠟質含量最高,為4.39 mg/g FW,顯著高于感蟲品種(碩豐和B25)和高感品種(臺南3號)的蠟質含量;碩豐和B25這2個感蟲品種的蠟質含量分別為3.58和3.73 mg/g FW,彼此之間無顯著差異,均高于高感品種臺南3號的蠟質含量(3.34 mg/g FW),但差異均沒有達到顯著性水平。蘆筍表皮蠟質含量與其薊馬抗性間的Pearson相關系數為-0.953,R2=0.908,P=0.047<0.05,說明蘆筍植株表皮的蠟質含量與蘆筍對薊馬的抗性水平呈顯著正相關。

圖1 不同抗性蘆筍品種植株的表皮蠟質含量
2.2 不同蘆筍品種的可溶性糖和游離脯氨酸含量
從圖2可知:抗性品種Uc157的可溶性糖含量為41.08 mg/g FW,顯著高于感蟲品種B25和高感品種臺南3號的可溶性糖含量,但與感蟲品種碩豐的可溶性糖含量之間無顯著差異;感蟲品種碩豐的可溶性糖含量為39.37 mg/g FW,顯著高于感蟲品種B25和高感品種臺南3號的,且后2個品種的可溶性糖含量之間無顯著差異。可溶性糖含量與抗性間的Pearson相關系數為-0.757,R2=0.573,P=0.242>0.05。抗性品種Uc157的游離脯氨酸含量最高,為82.51 μg/g FW,顯著高于其他3個品種的游離脯氨酸含量,且其他3個品種間游離脯氨酸含量均無顯著性差異。游離脯氨酸含量與抗性間的Pearson相關系數為-0.864,R2=0.746,P=0.136>0.05。上述結果表明,蘆筍植株的可溶性糖和游離脯氨酸含量與蘆筍對薊馬的抗性水平之間均無顯著的相關性。
2.3 不同蘆筍品種的總酚、單寧酸和類黃酮含量
由圖3可見:抗性品種Uc157的單寧酸含量為2.48 mg/g FW,顯著高于其他3個品種的單寧酸含量;感蟲品種碩豐和B25的單寧酸含量之間差異顯著,且均顯著高于高感品種臺南3號的單寧酸含量。單寧酸含量與抗性間的Pearson相關系數為-0.941,R2=0.885,P=0.059>0.05。抗性品種Uc157的總酚含量為5.38 mg/g FW,顯著高于感蟲品種和高感品種的總酚含量;感蟲品種碩豐的總酚含量顯著高于感蟲品種B25和高感蟲品種臺南3號的總酚含量,但后2個品種間總酚含量無顯著差異。總酚含量與抗性間的Pearson相關系數為-0.861,R2=0.746,P=0.139>0.05。抗性品種Uc157的類黃酮含量為6.57 mg/g FW,顯著高于感蟲品種B25和高感品種臺南3號的類黃酮含量,低于感蟲品種碩豐的類黃酮含量,但差異不顯著;高感品種臺南3號的類黃酮含量顯著低于感蟲品種碩豐的類黃酮含量,但與感蟲品種B25的類黃酮含量之間無顯著差異。類黃酮含量與抗性間的Pearson相關系數為-0.576,R2=0.331,P=0.424>0.05。上述結果表明,蘆筍植株的單寧酸含量與蘆筍品種對薊馬的抗性間存在一定的相關性(P值為0.059),但總酚和類黃酮含量與抗性相關不顯著。

圖2 不同抗性蘆筍品種的可溶性糖和游離脯氨酸含量
植物抗蟲性是指同種植物在昆蟲為害較嚴重的情況下,某些植株能避免受害、耐害或雖受害而有補償能力的特性。研究表明,某些植物組織結構(如葉片厚度、蠟質含量、茸毛密度等)、營養物質(如水分、氨基酸、可溶性糖等)和次生代謝物質(如酚類化合物、單寧、類黃酮等)在抵抗病蟲為害時能起到重要作用[16]。
3.1 蘆筍植株表皮蠟質含量與其對薊馬抗性的關系
植物表皮蠟質是由各種脂類化合物組成的一層疏水屏障,覆蓋在陸生植物地上大部分器官的表面,是植物表面的重要結構,對植物的生長發育和適應外界環境起著重要的作用[17]。許多研究都表明植株表面蠟質層越厚,蠟質含量越多,角質化程度也就越高,抗蟲性越強[18-20]。但是余德億等[21]的研究發現,對薊馬高感和低感榕樹品種的蠟質總量相對較高,即蠟質總量與抗性水平呈現負相關性。在本研究中,抗性品種Uc157的表皮蠟質含量最高,且顯著高于感蟲品種和高感品種的蠟質含量;相關分析也表明蘆筍植株表皮的蠟質含量與其對薊馬的抗性水平呈顯著正相關。說明蠟質含量作為一個形態抗性指標在蘆筍對薊馬抗性中發揮著明顯的作用。

圖3 不同抗性蘆筍品種的總酚、單寧酸和類黃酮含量
3.2 蘆筍植株可溶性糖和游離脯氨酸含量與其對薊馬抗性的關系
植物營養物質(如水分、氨基酸、可溶性糖等)是昆蟲正常生理活動不可缺少的物質。目前,對于可溶性糖含量與植物抗蟲性之間的關系,研究結果并不一致。有的研究結果表明植物的可溶性糖含量與抗蟲性呈正相關關系[22-24];有的研究結果表明,抗蟲性較強的品種,其可溶性糖含量較低[25-26];還有學者認為,作物品種的可溶性糖含量與其抗蟲性水平無關[27-28]。本研究結果表明,蘆筍抗性品種Uc157的可溶性糖含量顯著高于感蟲品種B25和高感品種臺南3號的可溶性糖含量,但是可溶性糖含量與抗性間的相關性并沒有達到顯著水平,說明蘆筍植株中的可溶性糖含量并不是其對薊馬產生抗性的相關因子。
植物體內氨基酸的含量、種類與植物抗蟲性緊密相關[29-30],其中脯氨酸是抗性表現最突出的一種氨基酸。蘆屹等(2013)的研究結果表明棉花植株內游離脯氨酸在固有抗蚜性中作用明顯[31];胡桂馨等(2007)[13]以及寇江濤等(2015)[32]的研究均表明,苜蓿游離脯氨酸含量與薊馬的發生數量呈正相關,且高抗苜蓿品系的游離脯氨酸含量變化速率較慢。但周福才等(1997)報道脯氨酸含量越低的小麥品種對禾谷縊管蚜的抗性越強[33];西瓜品種抗蚜性與游離脯氨酸含量也呈顯著負相關[28]。本研究結果顯示,抗薊馬蘆筍品種的游離脯氨酸含量顯著高于感蟲和高感品種的游離脯氨酸含量,但在游離脯氨酸含量與抗性間并不存在顯著的相關性。
3.3 蘆筍植株總酚、單寧酸和類黃酮含量與其對薊馬抗性的關系
酚類化合物、單寧酸和類黃酮是重要的植物次生代謝物質,是植物抗蟲的重要生化因子,在植物抗蟲性中具有重要作用。胡桂馨等(2007)的研究結果表明,在牛角花齒薊馬為害后,高抗苜蓿品種的總酚含量增加極顯著,高于其他抗級品種,感蟲苜蓿品種的增加量最低,說明總酚含量與苜蓿品種對牛角花齒薊馬的抗性相關,或具有誘導抗性效應[13];陳青等(2016)的研究結果表明西瓜品種的抗蚜性與總酚、單寧酸含量均呈顯著正相關[28]。此外,Todd等(1971)的研究顯示,槲皮素和柚苷等類黃酮化合物對麥二叉蚜有明顯的抗性作用[34]。在本研究中,抗性蘆筍品種Uc157的總酚和單寧酸含量均顯著高于感蟲和高感品種的,Uc157的類黃酮含量顯著高于高感品種的;蘆筍對薊馬的抗性與單寧酸含量有一定的相關性,但與總酚和類黃酮含量的相關性不顯著。
本研究分析了不同抗性蘆筍品種植株的表皮蠟質、2種營養物質(可溶性糖、游離脯氨酸)和3種次生代謝物質(總酚、單寧酸和類黃酮)含量與其對薊馬抗性的關系,為深入開展蘆筍對薊馬抗性的研究提供了理論依據。但是,作物的抗蟲性是寄主、昆蟲和環境三者相互作用的結果,其抗蟲性的高低還與施肥水平密切相關[35-36]。因此,施肥對蘆筍抗蟲性的影響及其抗蟲性機制還有待進一步研究。
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(責任編輯:黃榮華)
Study on Mechanism of Resistance of VariousAsparagusofficinalisCultivars toThripstabaci
SUN Yang, QIN Wen-jing, HUANG Shui-jin*, QIN Hou-guo
(Institute of Plant Protection, Jiangxi Academy of Agricultural Sciences, Nanchang 330200, China)
FourAsparagusofficinaliscultivars with different resistant levels againstThripstabaciwere used to clarify their resistant mechanism. The contents of epidermic waxiness, soluble sugar, free proline, total phenol, tannic acid, and flavonoid in asparagus plants were determined, and their relationships with the resistance againstT.tabaciwere further studied. The results indicated that the contents of epidermic waxiness, free proline, total phenol, and tannic acid in resistant asparagus cultivar Uc157 were 4.39 mg/g FW, 82.51 μg/g FW, 5.38 mg/g FW and 2.48 mg/g FW, respectively, which were significantly higher than those in susceptible and highly-susceptible cultivars. The contents of soluble sugar and flavonoid in Uc157 were significantly higher than those in susceptible cultivar B25 and highly-susceptible cultivar Tainan No. 3, but they were not significantly different from those in susceptible cultivar Shuofeng. Further analysis showed that the resistance of asparagus cultivars toT.tabacihad a significant correlation with the content of epidermic waxiness, and had a certain correlation with the content of tannic acid, but it was not significantly correlated with the contents of total phenol, soluble sugar, free proline, and flavonoid.
Asparagusofficinalis;Thripstabaci; Resistance; Biochemical substance
2017-05-07
江西省自然科學基金項目(2008GZN0010)。
孫楊(1988─),男,江蘇淮安人,助理研究員,博士,主要從事害蟲綜合治理技術研究。*通訊作者:黃水金。
S644.6
A
1001-8581(2017)09-0075-05