產前抑郁癥與生物鐘基因表達水平的相關性研究

吳新華

[摘要] 目的 比較產前抑郁癥患者與正常孕婦生物鐘基因表達水平差異。 方法 方便選取2015年3月—2015年10月于該院就診的20例產前抑郁癥患者（研究組）和20名正常孕婦（對照組）為研究對象，檢測生物鐘基因Clock和PER1不同時間點的相對表達水平，并分析生物鐘基因表達的節律性。結果 研究組和對照組不同時間點Clock和PER1表達水平差異有統計學意義（P<0.05），研究組各時間點Clock和PER1表達水平Ct值顯著高于對照組（P<0.05），雖Clock和PER1在對照組（Clock： 0.000；PER1： 0.004）和研究組（Clock： 0.035；PER1： 0.038）的表達均有晝夜節律性（P<0.05），但研究組Clock和PER1表達水平的峰值和谷值之差（3.44，4.44）較對照組（6.36，5.35）更小。結論 產前抑郁癥與生物鐘基因表達水平變化具有相關性，應予以關注。

[關鍵詞] 產前抑郁癥；生物鐘基因；表達水平；節律性

[中圖分類號] R5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）06（b）-0156-03

[Abstract] Objective To compare the difference in the antenatal depression and expression level of circadian clock genes. Methods 20 cases of patients with antenatal depression and 20 cases of normal delivery women in our hospital from March 2015 to October 2015 were convenient selected as the research objects. Results The differences in the Clock and PER1 expression levels between the two groups at different time points were statistically significant（P<0.05）， and the Ct values of Clock and PER1 expression levels at different time points in the research group were obviously higher than those in the control group（P<0.05）， and the expressions of Clock and PER1 in the control group and in the research group had the diurnal rhythmicity， in the control group （Clock： 0.000；PER1： 0.004）and in the research group（Clock： 0.035；PER1： 0.038）（P<0.05）， but the difference in the peak value and valley value of Clock and PER1 expression levels in the research group was smaller than that in the control group[（3.44，4.44） vs （6.36，5.35）]. Conclusion The antenatal depression and expression level of circadian clock genes have the correlation， and we should pay attention to it.

[Key words] Antenatal depression； Circadian clock genes； Expression level； Rhythmicity

產前抑郁癥是孕婦生產常出現的心理障礙疾病，臨床常表現為睡眠減少、沮喪、焦慮、恐懼、絕望、易怒甚至自殺傾向[1-2]，對產婦健康造成不利影響[3-4]。前期關于產前抑郁癥患者行為和心理改變的報道較多[5-7]，而鮮有關于產前抑郁癥患者在基因調控層面變化的報道。該研究以2015年3—10月于該院就診的20例產前抑郁癥患者和20名正常待產孕婦為研究對象，比較產前抑郁癥患者和正常孕婦生物鐘基因表達水平的變化情況，以期為相關工作者提供借鑒。

1 對象與方法

1.1 研究對象

方便選取于該院就診的20例產前抑郁癥患者和20名正常孕婦為研究對象，納入條件：①受試者產前無精神性疾病史和其他基礎性疾病；②無溝通障礙；③未服用抗抑郁類藥物；④自愿參與該研究。將產前抑郁癥患者納入研究組，平均年齡（25.32±4.79）歲；將正常待產孕婦納入對照組，平均年齡（24.85±5.02）歲，兩組患者數量、年齡和基礎性疾病等情況差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 樣品采集

入院15 d后，分別于00：00、06：00、10：00、14：00、18：00 和22：00 各采靜脈血4 mL。

1.3 血液樣本

RNA提取和cDNA的合成使用QIAamp RNA Blood Mini Kit試劑盒（德國 QIAGEN公司）提取總RNA。用紫外分光光度法對總RNA定量，OD260/OD280比值>1.7為合格樣品。取1 μg總RNA，用TransScript II Reverse Transcriptase反轉錄試劑盒合成cDNA，合成產物使用紫外分光光度法定量，于-20℃保存。endprint

1.4 引物的合成與設計

參照NCBI數據庫中Clock、PER1和β-actin的mRNA序列，使用OligoAnalyzer 3.1進行PCR引物設計，由大連寶生物公司合成引物，引物信息見表1。

1.5 實時定量PCR反應體系

以反轉錄得到的cDNA為模板，使用StepOnePlus？ Real-Time PCR System（美國Applied Biosystems Inc公司），PCR反應體系為25 μL：cDNA 2 μL（相當于100 ng），2× SYBR Premix Ex TaqTMⅡ×12.5 μL，10 μmol/L上游引物0.5 μL，10 μmol/L下游引物0.5 μL，雙蒸水9.5 μL。反應條件：95 ℃變性5 min；擴增40個循環（95 ℃變性10 s，60 ℃退火延伸45 s）；72 ℃放置5 min。

1.6 統計方法

使用SPSS 19.0統計學軟件進行數據統計，以目的基因與參比基因Ct值差值作為相對表達水平的評價指標，結果以（x±s）表示，進行t檢驗分析，P<0.05為差異有統計學意義；使用CircWave V1.4 軟件和Clock Lab軟件進行余弦分析，獲得節律性參數。

2 結果

2.1 產前抑郁癥患者和正常孕婦Clock基因的表達水平差異

產前抑郁癥患者和正常孕婦不同時間點Clock表達水平均差異有統計學意義（P<0.05），且產前抑郁癥患者較正常孕婦Clock表達水平顯著下調（P<0.05）。經余弦分析，產前抑郁癥患者和正常孕婦Clock表達均有晝夜節律性（P<0.05），正常孕婦Clock表達峰值為12.41，谷值為6.06；產前抑郁癥患者Clock表達峰值為13.93，谷值為10.49。見表2和3。

2.2 產前抑郁癥患者和正常孕婦PER1基因的表達水平差異

產前抑郁癥患者和正常孕婦不同時間點PER1表達水平差異有統計學意義（P<0.05），產前抑郁癥患者較正常待產孕婦的PER1表達水平顯著下調（P<0.05）。經余弦分析，產前抑郁癥患者和正常孕婦PER1表達均有晝夜節律性（P<0.05），正常孕婦PER1表達峰值為10.01，谷值為4.66；產前抑郁癥患者PER1表達峰值為11.55，谷值為7.11。見表4和表5。

3 討論

產前抑郁是產婦常見的精神障礙性疾病[3]。產前抑郁癥患者常出現睡眠障礙，生物鐘基因表達水平與睡眠質量直接相關[8]，Clock基因和PER1基因是人類生物鐘正負反饋通路的重要調節基因[9]。該研究以2015年3月—2015年10月于該院進行就診的20例產前抑郁癥患者（研究組）和20名正常待產孕婦（對照組）為研究對象，通過檢測生物鐘基因Clock和PER1不同時間點的相對表達水平，比較產前抑郁癥患者與正常孕婦生物鐘基因相對表達水平和節律性差異。結果表明，研究組和對照組不同時間點Clock和PER1表達水平差異有統計學意義（P<0.05），研究組較對照組Clock和PER1擴增的Ct值顯著增加，說明表達水平較對照組均顯著降低（P<0.05），Clock和PER1在兩組研究對象的表達均有晝夜節律性（P<0.05），正常孕婦Clock表達峰值為12.41，谷值為6.06，產前抑郁癥患者Clock表達峰值為13.93，谷值為10.49；正常孕婦PER1表達峰值為10.01，谷值為4.66；產前抑郁癥患者PER1表達峰值為11.55，谷值為7.11。研究組Clock和PER1表達峰值和谷值之差（3.44，4.44）較對照組（6.36，5.35）更小，說明產前抑郁癥患者生物鐘基因波動幅度更小，表達節律性較正常孕婦更不明顯。有研究表明，PER1低表達水平下，90%受試者出現睡眠時間減少和易被喚醒的情況，PER1表達水平下降，更容易使人維持清醒狀態而阻礙睡眠狀態的持續[10]。該研究結果正好與之相符，生物鐘基因相對表達水平的降低及節律性波動幅度減弱，可能是造成產前抑郁癥患者睡眠障礙的原因。

綜上所述，生物鐘基因表達水平變化與產前抑郁相關，將生物鐘基因表達水平作為產前抑郁癥診療效果的輔助評價指標具有臨床價值，值得推廣。

[參考文獻]

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（收稿日期：2017-03-13）endprint