食管癌組織中VEGF與MMP- 2的表達及與淋巴結轉移的關系

葛 威 于在誠 張仁泉 康寧寧 萬 軍 司盼盼

(安徽醫科大學第一附屬醫院胸外科，安徽 合肥 230000)

食管癌組織中VEGF與MMP- 2的表達及與淋巴結轉移的關系

葛 威 于在誠 張仁泉 康寧寧 萬 軍 司盼盼

(安徽醫科大學第一附屬醫院胸外科，安徽 合肥 230000)

目的 探討食管癌組織中血管內皮生長因子(VEGF)、基質金屬蛋白酶(MMP)- 2的表達水平及其與淋巴結轉移的關系。方法 133例食管癌患者為實驗組，30例食管良性病變患者為對照組，采用免疫組織化學法測定兩組組織標本中VEGF、MMP- 2表達水平，并分析其與淋巴結轉移的關系。結果 VEGF、MMP- 2主要在病變組織細胞的胞質中表達陽性，且實驗組陽性表達率高于對照組(P<0.05)。高分化、Ⅲ+Ⅳ期、淋巴結轉移的食管癌患者組織標本VEGF、MMP- 2陽性表達率高于中、低分化、Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結轉移食管癌患者(P<0.05)。經Spearman秩相關分析，VEGF與MMP- 2呈正相關(r=0.339，P<0.05)。結論 食管癌組織中VEGF、MMP- 2水平呈高表達，且與淋巴結轉移密切相關，聯合檢測有助于早期診斷食管癌、評估患者預后。

食管癌；血管內皮生長因子；基質金屬蛋白酶- 2；淋巴結轉移

食管癌早期缺乏特異性的臨床癥狀和體征，很多患者被確診時已處于中晚期，延誤了治療的最佳時機。研究表明，多種因素共同作用參與了惡性腫瘤的發生發展過程，其中腫瘤浸潤以及淋巴結轉移兩個生物學特征對惡性腫瘤的治療以及預后有重要的影響〔1〕。在腫瘤的生長及轉移過程中，腫瘤組織內的血管生成與其聯系緊密。血管內皮生長因子(VEGF)是血管通透性因子，主要在乳腺癌、大腸癌等惡性腫瘤組織中呈高度表達，在血管通透能力提高后引起新血管快速繁殖擴散，VEGF的高表達是影響患者預后以及腫瘤侵襲轉移的重要因素〔2〕。基質金屬蛋白酶(MMP)- 2是一種可使各種細胞外基質以及基底膜降解的未被糖化的明膠酶，主要功能是使Ⅳ型膠原降解。報道顯示〔3〕，MMP- 2可在一定程度上促進惡性腫瘤細胞向其他組織侵襲以及轉移。關于VEGF、MMP- 2在食管癌組織中的表達情況及其與淋巴結轉移關系的研究，目前相關的報道相對較少。本文旨在探討其與淋巴結轉移的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年8月至2016年8月安徽醫科大學第一附屬醫院收治的133例食管癌患者的組織標本為實驗組，納入標準：①術后均經病理組織學檢查確診；②術前未經任何放化療治療；③未接受可能影響本研究結果的藥物治療者；④患者及家屬簽署知情同意書；⑤獲得醫院倫理委員會的批準。排除標準：①妊娠期及哺乳期的婦女；②心功能不全者；③肝、腎功能障礙者；④合并有其他惡性腫瘤。其中男72例，女61例；年齡43～79〔平均(51.37±12.50)〕歲；分化程度：高分化45例，中、低分化88例；TNM分期〔4〕：Ⅰ+Ⅱ期73例，Ⅲ+Ⅳ期60例；組織學類型：57例鱗癌，41例腺癌，35例小細胞癌；57例有淋巴結轉移，76例未出現淋巴結轉移。于同期隨機選取30例術后經病理組織學檢查證實為食管良性病變患者的組織標本為對照組，其中男19例，女11例；年齡38～75〔平均(48.92±14.11)〕歲。兩組性別及年齡比較差異無統計學意義(P<0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 試劑 兔抗人VEGF抗體(美國Antibody diagnosis公司)、鼠抗人MMP- 2抗體(美國Chemicon公司)。

1.2.2 檢測方法 對組織標本采用免疫組織化學染色，即將制作好的組織切片標本經過脫蠟和水化處理，采用組織抗原微波進行修復，加入10%的羊血清封閉，滴加一抗后在4℃的環境下過夜，然后加入生物素標記的二抗，在室溫下孵育10 min后滴加過氧化物酶溶液，室溫下孵育10 min，各個步驟之間均以磷酸鹽緩沖液(PBS)持續沖洗5 min，連續沖洗3次，二氨基聯苯胺(DAB)顯色后進行脫水、透明以及封片處理。以PBS代替一抗染色的標本作為陰性對照標本，以VEGF、MMP- 2表達結果顯示為陽性的食管癌組織為陽性標本。

1.3 評價標準 根據細胞的染色程度進行評分，其中0分為細胞未顯色，1分為細胞染色為黃色，2分為細胞染色為棕黃色，3分為細胞染色為明顯的棕褐色；根據VEGF、MMP- 2陽性細胞數目占切片細胞的比例進行評分，其中0分為陽性細胞數目的比例≤5%，1分為比例在6%～25%，2分為比例在26%～50%，3分為比例在51%～75%，4分為比例≥76%。將染色程度評分與陽性細胞比例評分相加，陽性為評分之和>3分，陰性為評分之和≤3分〔5〕。

1.4 統計學方法 應用SPSS21.0軟件進行t及χ2檢驗、Spearman秩相關分析。

2 結 果

2.1 VEGF與MMP- 2在病變組織中的表達情況 VEGF、MMP- 2主要在病變組織細胞的胞質中表達陽性，并且實驗組陽性表達率〔105例(78.95%)，79例(59.40%)〕高于對照組〔7例(23.33%)，5例(16.67%)；χ2=35.216,17.896；均P<0.001〕。

2.2 VEGF、MMP- 2陽性表達率與臨床病理特征的關系 高分化、Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴結轉移的食管癌患者組織標本中VEGF、MMP- 2陽性表達率高于中、低分化、Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結轉移的食管癌患者(P<0.05)，不同性別、年齡、組織學類型食管癌患者組織標本中VEGF、MMP- 2陽性表達率比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.3 VEGF、MMP- 2的相關性分析 VEGF與MMP- 2呈正相關(r=0.339，P<0.05)。

表1 VEGF、MMP- 2陽性表達率與臨床病理特征的關系〔n(%)〕

3 討 論

在血源性擴散時，腫瘤細胞通過淋巴細胞進行擴散進而形成淋巴結的轉移，臨床上確診的食管癌多數伴有淋巴結的轉移，頸部淋巴結狀態是決定預后和治療方法的關鍵之一〔6〕。惡性腫瘤細胞的擴散轉移過程中，蛋白類物質以及多種細胞因子參與到其中。VEGF作為血小板源性生長因子家族成員，具有高度的特異性，可調節內皮細胞的分裂和增殖，作為重要的血管內皮生長刺激因子參與了腫瘤血管的形成過程，同時，VEGF還可增加血管的通透性，促進血管的生成以及新基質的形成〔7〕。研究表明〔8〕，VEGF的表達可以評估血管上皮細胞的增殖、生長以及轉移，同時還能有效評估病變部位腫瘤細胞的生長速度以及轉移方向等。在惡性腫瘤細胞中，VEGF呈高度表達，并且其與腫瘤的侵襲性轉移和預后密切相關〔9〕。MMP具有使細胞外基質降解的功能，同時也能促進腫瘤細胞的侵襲、轉移以及血管的生成。MMP- 2屬于Ⅳ型膠原酶，在腫瘤細胞基底膜、外基質存在的Ⅳ型膠原降解過程中，MMP- 2作為關鍵酶在其中發揮重要作用，并進一步損傷細胞外基質而促進惡性腫瘤細胞快速的浸潤至其他組織并且擴散〔10〕。研究認為〔11〕，因MMP- 2在Ⅳ型膠原降解過程中發揮的特異性作用，將其作為腫瘤侵襲程度以及轉移的評價指標有重要價值。有報道發現〔12〕，在泌尿系統惡性腫瘤、乳腺癌等惡性腫瘤中，MMP- 2均呈高水平表達，同時參與了病變部位腫瘤細胞的轉移、浸潤等。本研究結果提示VEGF、MMP- 2可能參與了食管癌的發生過程，早期檢測有助于早期輔助診斷食管癌。進一步的結果提示VEGF、MMP- 2參與了食管的發生發展過程，聯合檢測VEGF和MMP- 2可評估食管癌患者的病情進展和淋巴結的轉移情況，進而判斷預后。研究顯示〔13〕，VEGF的表達上調可促進MMP- 2的表達，兩者協同作用促進新生血管的形成以及細胞外基質的降解。本研究相關性分析顯示，VEGF與MMP- 2通過協同作用，使新生血管生成以及細胞外基質降解，進而促進惡性腫瘤細胞的侵襲以及發生淋巴結轉移。

1 王 琳,李蘇宜.食管鱗癌干細胞相關標志物的研究進展〔J〕.世界華人消化雜志,2013;21(6):490- 7.

2 劉思杰,陳應泰,賈純增,等.卡培他濱聯合參芪扶正注射液對食管癌術后VEGF表達及生活質量的影響〔J〕.現代生物醫學進展,2016;16(24):4783- 6.

3 Miao C,Ma J,Zhang Y,etal.Perfluorooctanoic acid enhances colorectal cancer DLD- 1 cells invasiveness through activating NF- κB mediated matrix metalloproteinase- 2/- 9 expression〔J〕.Int J Clin Exp Pathol,2015；8(9):10512- 22.

4 Shao Y,Geng Y,Gu W,etal.Assessment of lymph node ratio to replace the pN categories system of classification of the TNM system in esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.J Thorac Oncol,2016；11(10):1774- 84.

5 洪英財,陳懷生,林少霖.VEGF、CD44v6、MMP- 2在食管癌中的表達及其與淋巴結轉移的相關性〔J〕.海南醫學,2016；27(6):888- 90,891.

6 Leng XF,Zhu Y,Wang GP,etal.Accuracy of ultrasound for the diagnosis of cervical lymph node metastasis in esophageal cancer:a systematic review and meta- analysis〔J〕.J Thorac Dis,2016；8(8):2146- 57.

7 Li YL,Zhao H,Ren XB.Relationship of VEGF/VEGFR with immune and cancer cells:staggering or forward〔J〕.Cancer Biol Med,2016;13(2):206- 14.

8 Zhang L,Wang Y,Bai G,etal.The relationship between the expression of VEGF,EGFR,and HER- 2 mRNA in esophageal squamous cell carcinoma(ESCC)and clinicopathological features of different ethnic groups in Xinjiang〔J〕.Tumour Biol,2015；36(12):9277- 83.

9 Quagliata L,Klusmeier S,Cremers N,etal.Inhibition of VEGFR- 3 activation in tumor- draining lymph nodes suppresses the outgrowth of lymph node metastases in the MT- 450 syngeneic rat breast cancer model〔J〕.Clin Exp Metastasis,2014;31(3):351- 65.

10 Giganti MG,Tresoldi I,Sorge R,etal.Physical exercise modulates the level of serum MMP- 2 and MMP- 9 in patients with breast cancer〔J〕.Oncol Lett,2016;12(3):2119- 26.

11 Aroner SA,Rosner BA,Tamimi RM,etal.Plasma matrix metalloproteinase 2 levels and breast cancer risk〔J〕.Cancer Epidemiol,2015;39(3):321- 7.

12 Radenkovic S,Konjevic G,Jurisic V,etal.Values of MMP- 2 and MMP- 9 in tumor tissue of basal- like breast cancer patients〔J〕.Cell Biochem Biophys,2014;68(1):143- 52.

13 Suh YG,Lee EJ,Cha H,etal.Prognostic values of vascular endothelial growth factor and matrix metalloproteinase- 2 in hepatocellular carcinoma after radiotherapy〔J〕.Dig Dis,2014;32(6):725- 32.

〔2017- 05- 15修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

于在誠(1957- )，男，主任醫師，主要從事食管癌的外科治療研究。

葛 威(1983- )，男，主治醫師，主要從事食管癌的外科治療研究。

R73

A

1005- 9202(2017)15- 3792- 02；

10.3969/j.issn.1005- 9202.2017.15.066