電針療法聯合康復運動訓練治療腦卒中肢體痙攣大鼠的機制

葛亞博 馮曉東

(河南中醫藥大學第一附屬醫院康復中心，河南 鄭州 450000)

電針療法聯合康復運動訓練治療腦卒中肢體痙攣大鼠的機制

葛亞博 馮曉東

(河南中醫藥大學第一附屬醫院康復中心，河南 鄭州 450000)

目的 探討電針聯合康復運動對腦卒中模型大鼠肢體痙攣的治療機制。方法 取60只SD大鼠，將造模成功者隨機分為電針+康復運動組、電針組、康復運動組及正常組和模型組每組10只。建模成功后第3天開始治療，康復運動組治療1次/d，30 min/次；電針組治療1次/d，30 min/次；電針+康復運動組治療時先進行康復訓練治療，再進行電針治療，治療方法及時間與單獨治療組相同三組均連續治療1 w。分別于術后1、3、10 d對各組大鼠進行神經功能評定，治療前后測定肌張力實驗結束時，取各組大鼠脊髓頸膨大、腰膨大和腦干，測定大鼠突觸結合蛋白Ⅰ表達水平。結果 電針+康復運動組治療后大鼠神經功能分數降低最顯著，與單獨治療比較差異有統計學意義(P<0.05)。與電針組和康復運動組相比，電針+康復運動組改善模型大鼠肌張力效果更明顯(P<0.05)，各組織中的突觸結合蛋白Ⅰ表達增多最明顯(P<0.05)。結論 電針聯合康復運動訓練治療對模型大鼠脊髓頸膨大組織、腦干組織及腰膨大組織中的突觸結合蛋白Ⅰ表達具有明顯的促進作用，這可能是聯合療法改善腦卒中大鼠肢體痙攣神經功能及肌肉功能更優的內在機制之一。

腦卒中；肢體痙攣；電針；康復運動；突觸結合蛋白Ⅰ

腦卒中后約90%的患者伴肢體痙攣，導致腦卒中后運動功能障礙成為一個嚴重的社會問題，嚴重影響生存質量〔1，2〕。腦卒中后神經功能障礙導致關節出現攣縮、甚至畸形，常伴隨不同程度的疼痛不適，對患者肢體功能的正常活動造成嚴重妨礙并嚴重影響肢體功能恢復，從而對患者的生活質量帶來嚴重影響。針刺治療腦卒中肢體痙攣主要是影響抑制性遞質及其受體。突觸結合蛋白Ⅰ是囊泡膜融合的Ca2+感受蛋白，位于神經元的突觸囊泡上，結合鈣離子后可以誘導神經遞質的正常釋放，參與突觸囊泡融合過程，起到至關重要的作用。

1 材料和方法

1.1 實驗動物 由廣東藥學院實驗動物中心提供SPF級，體質量(350±20)g的健康雄性SD大鼠60只，許可證號SCXK(粵)2015- 0031；購回后適應性飼養7 d，將其隨機分為電針+康復運動組、電針組、康復運動組及正常組和模型組每組10只。本實驗操作過程中及實驗結束后，對各大鼠的處理方法均符合2006年中華人民共和國科學技術部頒發的《關于善待實驗動物的指導性意見》。

1.2 主要試劑及儀器 滾筒式網狀訓練器(自制)，G6805- 2型電針儀(中國青島鑫升實業有限公司)，針灸針(蘇州醫療用品廠)，水合氯醛(天津科密歐)，血管內栓線(北京沙東生物)，I抗、Ⅱ抗及顯色劑DAB(Sigma公司)。

1.3 大鼠模型的制備 參照文獻〔3，4〕，在Ngaaswaa法基礎上進行改良，使用血管內線栓阻斷法造模，制作大鼠右側大腦中動脈阻塞(MCAO)模型：各大鼠禁食12 h后，于腹腔注射10%水合氯醛(0.3 ml/100 g劑量)進行麻醉，固定于潔凈手術操作臺上，消毒；沿大鼠頸部正中剪開，慢慢剝離組織，使大鼠右側頸總動脈及其分叉處，頸內、外動脈完全暴露，在頸外動脈及頸總動脈近心端結扎，在分叉膨大處開口，將事先浸泡過鹽水的栓線(干燥后)插入頸內動脈，深度18～20 mm，阻斷大腦中動脈的血流。插線完畢后，將頸內動脈與栓線一起結扎，然后逐層縫合。術后為防止出現感染或腦水腫，給予腹腔注射慶大霉素(2萬U)及呋塞米(10 μg/100 g劑量)。

1.4 大鼠模型的評價方法及模型成功標準〔5〕對大鼠神經功能采用Zealonga標準評分，采用改良Ashworth標準評定大鼠肌張力。

模型成功及入組實驗標準：神經功能評分1～3分者以及肌張力1級及其以上者為模型建造成功，可以入選分組實驗。

1.5 電針操作及康復運動訓練方法〔6，7〕

1.5.1 康復訓練 (1)滾筒訓練：對大鼠進行抓握能力及抓力大小、旋轉方向、行走功能等運動訓練，采用滾筒式網狀訓練器，進行訓練；(2)平衡訓練：訓練大鼠的平衡能力，將大鼠輕輕平放于離地15 cm的平衡木上，讓其自由行走；(3)網屏訓練：訓練大鼠的前爪抓握能力，先將一塊厚的海綿鋪于網屏的下方，將大鼠置于水平放置的網屏上，從網屏一端慢慢將其抬高，2 s內轉動90°，保持5 s。

1.5.2 電針治療 取大鼠右側申脈(后肢外踝正下方凹陷處)、照海(后肢內踝下1 mm)兩個穴位，用普通30號0.5寸不銹鋼毫針，于申脈處直刺0.5 mm，照海處直刺1.5 mm。接G6805型電針治療儀，選取連續波段刺激，強度以肢體肌肉有節律性收縮為度，頻率50 Hz，調整輸入電流。

1.5.3 療程 各組治療均于建模成功后第3天開始，康復運動組治療1次/d，30 min/次，連續治療1 w；電針組治療1次/d，30 min/次，連續治療1 w；電針+康復運動組治療時先進行康復訓練治療，再進行電針治療，治療方法及時間與單獨治療組相同；正常組、模型組自由飲水進食，不做治療處理。

1.6 療效評價

1.6.1 神經功能評定 分別于術后1、3、10 d對各組大鼠進行運動功能、感覺功能、平衡能力、異常運動測定，評估大鼠神經損傷程度，評定1～6分為輕度損傷，7～12分為中度損傷，13～18分為重度損傷。

1.6.2 肌張力測定 ①采用改良Ashworth評分標準判定治療前后各組大鼠的肌張力是否異常；②對各組大鼠股四頭肌肌張力進行電生理描記。

1.6.3 免疫組織化學檢測 實驗結束時，取各組大鼠脊髓頸膨大、腰膨大和腦干，固定后，石蠟包埋，切片，處理后依次加入一抗、生物素化山羊抗小鼠(或兔)IgG，最后進行DAB顯色和蘇木素復染，鏡下觀察，神經細胞核周和胞質出現棕黃色反應物即為陽性表達，采用圖文分析軟件。

1.7 統計學方法 采用SPSS16.0軟件，計量資料組間比較采用LSD方差分析。

2 結 果

2.1 各組大鼠神經功能測評結果分析 模型組與正常組(0.00±0.00)比較，模型組有神經損傷，評分(11.77±0.91)高(P<0.05)；除正常組外，造模后第1天，其他各組的神經功能損傷評分沒有差異〔電針組(11.81±0.89)、康復運動組(11.92±1.01)、電針+康復運動組(11.86±1.11)，P>0.05〕，說明造模對各組大鼠神經損傷影響相同；造模成功后第3天，其他各組的神經功能損傷評分均開始逐漸下降〔模型組(9.83±0.85)、電針組(10.14±0.90)、康復運動組(9.94±0.96)、電針+康復運動組(9.85±0.77)〕，但各組間無差異(P>0.05)；造模成功后第10天，與模型組(7.69±0.93)相比，電針組(5.44±0.96)、康復運動組(5.21±0.91)、電針+康復運動組(3.87±0.88)神經功能評定分數均有降低，結果顯示對神經功能損傷具有一定的改善效果，而且存在顯著差異(P<0.05)，組間比較顯示，電針+康復運動組神經功能分數降低最顯著，與單獨治療有顯著差異(P<0.05)。

2.2 肌張力檢測結果 治療前,模型組與各治療組大鼠比較肌張力差異無統計學意義(P>0.05)，與正常組相比，模型組肌張力升高顯著(P<0.05)；治療后，與電針組相比，電針+康復運動組大鼠肌張力降低(P<0.05)，康復運動組與電針+康復運動組亦有明顯差異(P<0.05)。綜合評估比較，電針+康復運動組改善模型大鼠肌張力效果更明顯。見表1。

表1 改良Ashworth評分標準判定肌張力(n,n=10)

2.3 電生理描記結果 與正常組比較，治療前各模型大鼠的電生理描記數值明顯下降(P<0.05)；與模型組相比，治療后康復運動組、電針組及電針+康復運動組大鼠的電生理描記結果明顯升高(P<0.05)，而電針+康復運動組與單組相比肌張力改善更明顯(P<0.05)。見表2。

2.4 各組大鼠組織突觸結合蛋白Ⅰ免疫組化檢測結果 與正常組比較，模型組大鼠各神經組織中的突觸結合蛋白Ⅰ表達顯著減少(P<0.05)；與模型組相比，電針+康復運動組、電針組、康復運動組各組大鼠各神經組織中的突觸結合蛋白Ⅰ表達均顯著增多(P<0.05)；與單獨治療的康復運動組、電針組相比，電針+康復運動組各組織中的突觸結合蛋白Ⅰ表達增多最明顯(P<0.05)。 見表3。

表2 各組電生理描記結果

與模型組比較：1)P<0.05；與電針+康復運動組比較：2)P<0.05；下表同

表3 各組大鼠突觸結合蛋白Ⅰ免疫組化結果積分光密度(×105)〕

3 討 論

腦卒中后肢體痙攣歸屬于中醫文獻中的“筋病”范疇，一般認為腦中風后引起經脈肌肉失養，導致肢體痙攣〔8，9〕。現代醫家研究認為，腦卒中后肢體痙攣的主要病因病機是痰癖痹阻血脈，氣血不足，最終導致筋脈失養，引起肢體拘攣、僵硬〔10，11〕。針灸療法是中醫傳統療法，具有通絡關節及活血行氣的療效。對肢體痙攣狀態的針刺治療顯示，針刺申脈、照海穴對改善肢體痙攣有明顯效果〔12～15〕，這也是本實驗選取照海和申脈穴的主要原因。本研究顯示，康復運動訓練治療對腦卒中后神經元及突觸結構的影響是神經功能提高的基礎。

電針療法結合滾筒、平衡及網屏3種康復運動訓練治療腦卒中后大鼠神經功能恢復效果更明顯，對降低大鼠的肌張力效果更優。電針+康復運動組后突觸結合蛋白I表達增多最明顯，這可能是電針療法聯合康復運動訓練治療改善腦卒中大鼠肢體痙攣神經功能及肌肉功能的內在機制之一。

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〔2016- 10- 15修回〕

(編輯 徐 杰)

國家中醫臨床研究項目(2015ZS102)

葛亞博(1981- )，男，主治醫師，碩士，主要從事康復方面研究。

R743

A

1005- 9202(2017)15- 3643- 03；

10.3969/j.issn.1005- 9202.2017.15.002