高效液相色譜法應用中常見問題與處理

包東東+努爾古麗·買買提

摘 要：文章針對HPLC使用常見故障進行了全面的分析，如輸液泵、單向閥、色譜柱、檢測器的常見故障，并總結日常工作實際，提出一些個人的做法和解決對策，以便使用者能及時注意所述問題，做到有問題及時解決。

關鍵詞：高效液相色譜 色譜柱 檢測器 問題及對策

高效液相色譜（HPLC）作為一種分離技術和方法，目前已經發展到一個全新的階段。高精度的輸液泵，應用廣泛的色譜分離柱，低噪音、高靈敏度的各種檢測器和功能強大的數據處理軟件系統的出現，都推動了液相色譜技術的迅猛發展。液相色譜儀正以它分辨率高、分析速度快和應用廣泛的優點倍受儀器分析工作者的青睞，廣泛地應用于醫藥衛生、環境監測、食品檢測等領域。本人從事液相色譜分析工作十年，應用HPLC技術在農藥殘留、獸藥殘留、色素、防腐劑測定等實際工作中，積累了許多的方法和經驗，在這里與大家交流，希望能對同行們有所幫助和借鑒，共同促進液相色譜分析技術的發展[1]。

1、對流動相的要求

1.1應使用色譜純的液體試劑配制流動相，固體試劑至少使用優級純。流動相配制后應立即使用，時間久了（超過2天），不宜再用；特別是加有緩沖鹽的流動相，過久的貯存會導致其內部生長肉眼看不見的細菌，若仍然使用它，大量的菌絲體就會附著在色譜柱內，將大大縮短色譜柱的使用壽命。

1.2高純水也應該使用新鮮制備的，否則回出現同樣的問題。高純水中若存在有機物雜質，當時對檢測好像也沒有什么影響，當日積月累的雜質吸附達到飽和時，在以后某次檢

測中就有可能發生吸附雜質的脫落，引起“鬼峰”現象，如果“鬼峰”疊加到了組分的吸收峰上面，就會出現不準確的檢測數據。

1.3流動相在使用前均應進行脫氣處理，避免溶解在其中的氣體影響基線的穩定性和檢測的靈敏度。

2、輸液泵的常見故障及對策

2.1液相色譜儀壓力過低壓力過低的現象一般是由于系統泄漏，處理方法：尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。

2.2液相色譜儀壓力過高這是高效液相在使用中最常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時，我們應該分段進行檢查。

（1）首先斷開真空泵的入口處，此時PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法：用30%的硝酸浸泡半個小時，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，在檢查。

（2）打開Purge閥，使流動相不經過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。處理方法：將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI以下，過濾白頭正常，在檢查。

（3）把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常；如果是一些強保留的物質導致堵塞，則要用比現在流動相更強的流動相沖至壓力正常。

3、色譜分離柱的使用與維護

色譜柱加保護柱（預柱）是保護分離柱的有效辦法。保護柱是根內裝填料與分離柱性質相近的短柱，接在分離柱之前，或代替流路過濾器。保護柱的作用是收集和阻塞分離柱口的化學垃圾，這些垃圾如果直接進入分離柱會逐漸堆積在柱頭，最終降低柱效能。保護柱是消耗品，如分析含糖量較高的樣品，一般分析80個樣品后需更換新柱芯。

4、檢測器的使用與維護

當流動相用了緩沖鹽更換流動相又不當時，常會在檢測器管路中產生沉淀，可先用5倍柱積的水沖洗，再用10倍柱積的強溶劑（如乙腈）流過，再用50倍的柱體積的異丙醇沖洗，最后換上反相流動相平衡。當檢測器管路堵塞時，可表現為柱壓升高，此時，應和柱頭堵塞相區分。可斷開柱子，直接接檢測器，如泵壓仍較高，可判斷壓力升高是由于檢測器管道堵塞造成。檢測器進口是常發生阻塞的地方，正向沖洗效果常不明顯，我們的經驗是將檢測器進出口管道對調，用6mol/L硝酸溶液反沖檢測器，能很快將阻塞沖開，但要注意用低流速沖洗，觀察壓力變化[2]。

檢測池阻塞和污染多見紫外檢測器。池阻塞也可用上述方法反沖，一般都能疏通。通常，池阻塞的故障比較少見，而池污染常發生，如不干凈的樣品在池窗上積聚等，都會造成檢測池污染。表現為基線噪音增大，儀器靈敏度下降。可用注射器依此回抽異丙醇、6mol/L硝酸，要小心操作，將池中的污物沖洗干凈，最后用100ml純水正向沖洗檢測池。反向沖洗還可防止池滲漏。

以上只是對液相色譜常見的問題進行了分析，當然在實際應用中還會遇到更多的問題，在排除故障時要遵守以下原則：一次只改變一個因素，確定假定因素與問題之間的聯系；如果通過更換組件來排查故障時要注意將拆下的完好組件裝回原位，避免浪費；養成良好的記錄習慣，這是成功進行故障排除的關鍵。總之，在使用高效液相色譜儀時一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養。

參考文獻

[1]靳建中.如何正確使用高效液相色譜儀[J].內蒙古科技與經濟，2006，20：9～10.

[2]孫毓慶，王延琮，方群等.現代色譜法及其在藥物分析中的應用[M].北京：科學出版社，2005： 253-254.