安徽種豬場仔豬豬瘟免疫效果分析

潘孝成，趙瑞宏，沈?qū)W懷，胡曉苗，戴 銀，周學(xué)利，侯宏艷，張丹俊

（安徽省農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所，安徽 合肥 230031）

安徽種豬場仔豬豬瘟免疫效果分析

潘孝成，趙瑞宏，沈?qū)W懷，胡曉苗，戴 銀，周學(xué)利，侯宏艷，張丹俊

（安徽省農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所，安徽 合肥 230031）

為了解安徽省種豬生產(chǎn)企業(yè)的仔豬階段豬瘟免疫效果，選擇不同地區(qū)6家種豬場，用ELISA方法，對其仔豬豬瘟一免和二免后3周左右的抗體水平進行了檢測，并對其抗體陽性率、合格率和離散度等進行了分析。結(jié)果顯示：在仔豬階段，6家豬場均使用傳代細胞源疫苗實施兩次豬瘟免疫，首免和二免日齡分別為23～28日齡和49～60日齡。二免后的抗體陽性率均達到較高水平，為81.81%～100%。二免后的抗體合格率均較首免有明顯提高，提升幅度為9.75～50個百分點，其中5家達到較高水平，為72.73%～100%，但仍有一家較低，為45.45%。各場抗體離散度稍高，為17.4% ～28.87%。研究結(jié)果將為種豬場乃至其他規(guī)模豬場的豬瘟免疫提供參考和依據(jù)。

豬瘟；種豬場；仔豬；免疫效果

豬瘟（Classical Swine Fever,CSF）是一種急性、高度接觸性傳染病，是目前危害我國養(yǎng)豬生產(chǎn)的主要傳染病之一。該病1833年首先發(fā)現(xiàn)于美國的俄亥俄州[1]，被世界動物衛(wèi)生組織（Office International des Epizooties,OIE）列為必須上報的傳染病，我國將其列為一類動物疫病。弱毒疫苗免疫是目前我國控制豬瘟的主要手段，在生產(chǎn)中起到了極其重要的作用，但是仍有少部分豬場反映豬瘟免疫沒有達到理想的效果。豬瘟病毒可通過水平傳播，也可通過垂直傳播，因此種豬群的豬瘟控制就顯得尤為重要。為了解安徽省種豬企業(yè)的豬瘟免疫狀況，2016年3—8月，我們選擇安徽省不同地區(qū)的6家種豬生產(chǎn)企業(yè)，對其仔豬豬瘟一免和二免后3周左右的抗體水平進行了抽樣檢測和分析，以期給豬瘟的控制提供參考和借鑒。

1 材料與方法

1.1 血清樣本來源

血清樣本采自安徽省不同地區(qū)的6家種豬場，分別命名為A、B、C、D、E和F場，這6家種豬場均為有一定規(guī)模的種豬生產(chǎn)企業(yè)，建場均在10年以上，存欄生產(chǎn)母豬數(shù)最少的也在500頭以上，多的存欄生產(chǎn)母豬幾千頭乃至上萬頭，分別位于肥東縣、宿州市、亳州市、利辛縣、鳳陽縣、滁州市等地。

1.2 采樣及處理

每個豬場采樣兩次，采樣時間為仔豬首免和二免后的3周左右，首免和二免后采樣的豬群均為同一批豬，二免后的采樣豬可能與首免后的采樣豬相同，但也有可能不同。每個豬場選10窩以上的仔豬進行采樣，每窩采樣1～3頭，采樣豬的品種為長白豬和大白豬，B場只有大白豬，A、C、D、E和F場均有長白豬和大白豬，采樣時盡量保證樣本中的長白豬和大白豬各占一半。前腔靜脈采集血液，分離血清保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試劑盒和儀器

豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測試劑盒，美國IDEXX公司產(chǎn)品；BIO-RAD680型酶標儀，美國伯樂公司；低溫冷凍離心機，美國貝克曼公司；37℃恒溫培養(yǎng)箱，上海三發(fā)科學(xué)儀器公司。

1.4 免疫情況調(diào)查

對采樣豬場豬瘟免疫所使用的疫苗種類、疫苗生產(chǎn)場家、免疫接種時間、免疫劑量、免疫途徑等幾個方面進行調(diào)研。

1.5 ELISA檢測

按照IDEXX公司的豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測試劑盒說明書進行試驗操作。結(jié)果判定：若被檢樣本的阻斷率≥40%，該樣本就可以被判為陽性；若被檢樣本的阻斷率≤30%，該樣本就可以被判為陰性；若被檢樣本的阻斷率為30%～40%，數(shù)日后再對樣本進行重測。若被檢樣本的阻斷率≥50%，該樣本判為抗體合格。

2 結(jié)果

2.1 免疫情況調(diào)查

采樣的6家種豬場均使用的是豬瘟傳代細胞源活疫苗，分別來自4個疫苗生產(chǎn)廠家。仔豬階段的免疫程序，6家豬場均采用兩次免疫的方式，首次免疫時間為23～28日齡，二次免疫時間為49～60日齡，A、B和E場的首次免疫劑量為1頭份，二次免疫劑量為2頭份，C、D和F場的首次免疫和二次免疫所使用的免疫劑量均為2頭份，具體見表1。

2.2 首次免疫后抗體檢測結(jié)果

檢測顯示，A、B、C、D、E和F場的豬瘟抗體陽性率（被檢樣本的阻斷率≥40%）存在較大差異，其中最高的是B場，達到了100%，E場和A場次之，為86.67%和84.09%，最低的是F場，為44.64%；6家豬場的豬瘟抗體合格率（被檢樣本的阻斷率≥50%）與陽性率相比較低，雖存在一定的相關(guān)性，但并不是等比關(guān)系，抗體合格率最高的變成了E場，合格率為63.33%，A和 B場次之，合格率為 52.27%和50.00%，最低的還是F場，合格率只有17.86%。6家豬場的抗體離散度為17.40%～26.78%，平均抗體阻斷率為35.50%～55.68%，具體見表2。

表2 第1次免疫后抗體檢測結(jié)果

2.3 第2次免疫后抗體檢測結(jié)果

二免后，C、D、E和F場的豬瘟抗體陽性率（被檢樣本的阻斷率≥40%）分別為81.81%、100.00%、100.00%和90.90%，與一免后的抗體檢測相比均存在大幅度提高，提高幅度分別為17.52、43.33、13.33和46.26個百分點，A場雖有提高，但變化不大，提高幅度為2.02個百分點，B場抗體陽性率仍保持為100%；6家豬場的豬瘟抗體合格率（被檢樣本的阻斷率≥50%）分別為 75.00%、100.00%、72.73%、85.71%、73.08%和45.45%，與一免后的抗體檢測相比，均大幅度提高，提高幅度為9.75～50個百分點。6家豬場的抗體離散度為19.76%～28.87%，平均抗體阻斷率相較于第1次免疫后有較大提高，提高幅度為4.97～20.98個百分點，具體見表3。

表3 第2次免疫后抗體檢測結(jié)果

3 討論

豬瘟一直是影響?zhàn)B豬生產(chǎn)的關(guān)鍵疫病之一，是需要加快控制和凈化的重要豬病，2016年以前一直是國家強制免疫的豬病之一，雖然2016年7月21日，農(nóng)業(yè)部聯(lián)合財政部發(fā)布公告稱，豬瘟與高致病性藍耳病暫不實施強制免疫政策，并且《2017年國家動物疫病強制免疫計劃》中也取消了對豬瘟、高致病性豬藍耳病強免。但這不代表豬瘟的免疫不重要，應(yīng)該是現(xiàn)階段暫不實施強制免疫更利于豬瘟的控制和凈化。《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》中對豬瘟提出要求，到2015年，原種豬場達到凈化標準，到2020年，全國所有種豬場達到凈化標準。這說明種豬群豬瘟的控制和凈化處于更加重要和緊迫的位置。

據(jù)《國家動物疫病監(jiān)測與流行病學(xué)調(diào)查計劃》，豬瘟免疫21天后，進行免疫效果監(jiān)測，采用抗體阻斷ELISA和抗體間接ELISA，抗體陽性判定為合格，正向間接血凝試驗抗體效價≥25判定為合格。本試驗中，由于6家豬場生產(chǎn)的不同步性，導(dǎo)致采樣時間點不能完全一致，但盡量選擇了差別不大的時間點，從檢測結(jié)果看，并不影響分析和比較。首次免疫后3周左右，6家豬場的豬瘟抗體陽性率為44.64%～ 100%；二免后3周左右，抗體陽性率為81.81%～ 100%，全部達到國家農(nóng)業(yè)部規(guī)定的ELISA陽性≥70%的合格標準。本試驗使用的豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測試劑盒，是美國IDEXX公司產(chǎn)品，據(jù)有關(guān)研究表明，該試劑盒檢測豬瘟抗體阻斷率達到50%時的水平相當(dāng)于中和抗體滴度1∶32，此水平的中和抗體水平才對豬群具有保護力，實際生產(chǎn)中要以阻斷率≥50%作為豬瘟免疫抗體的合格標準[2-4]。如果按此標準，一免后3周左右抗體合格率為17.86%～63.33%；二免后3周左右抗體合格率為45.45%～100%，除F場外，其他5家豬場抗體合格率均≥70%。另外，韓崇江和張大丙建議種豬豬瘟抗體免疫合格標準提高到1∶64[5]，即便是按此標準（豬瘟抗體阻斷率≥50%判為免疫合格），F(xiàn)場的抗體合格率僅為45.45%，因此該場豬瘟免疫程序的合理性需進一步探究。

關(guān)于豬瘟在仔豬階段免疫程序報道較多，普遍的認識是在仔豬階段開展兩次免疫是較為合理的免疫方式。研究表明，對當(dāng)前的豬場僅僅實施一次免疫是不夠的，只有實施二次免疫，才能獲得較高的免疫抗體水平，有效地防控豬瘟疫病的發(fā)生。本試驗調(diào)查的6家種豬生產(chǎn)企業(yè)，在仔豬階段，均實行兩次豬瘟免疫，首免時間為23～28日齡，二免時間為49～60日齡，與人們常在20～35日齡和50～70日齡分別進行首免和二免基本相符[6-10]。也有研究認為，40日齡或50日齡是最佳豬瘟首次免疫開展時間[9,11]，首免時間的合理選擇與母源抗體水平的高低有關(guān)，因此，豬瘟免疫程序的合理制訂需要因場而異，在抗體水平監(jiān)測的前提下，制訂適合本場的免疫程序。豬瘟活疫苗（脾淋苗）因其免疫原性好，一直是眾多豬場的首選，豬瘟活疫苗（傳代細胞源），由于其可傳代的特點，不僅生產(chǎn)工藝更加穩(wěn)定，批間差異較小，并可以顯著提高病毒滴度，近年來得到了廣泛的應(yīng)用。本試驗的6家豬場使用的都是豬瘟傳代細胞源活疫苗，二免均使用二倍免疫劑量，首次免疫，各有3家豬場使用1倍免疫劑量和2倍免疫劑量進行免疫，從檢測結(jié)果看，抗體陽性率或合格率與免疫劑量不存在必然相關(guān)性。

抗體離散度是評價抗體水平均勻度的指標，種豬群一般要求在20%以下，商品豬可放寬到25%[12]，兩次抗體檢測，首免后豬瘟抗體檢測，各場抗體離散度在17.40%～26.78%之間，二免后豬瘟抗體檢測，各場抗體離散度在19.76%～28.87%，只有B場的兩次豬瘟抗體檢測離散度均低于20%，說明B場的豬瘟抗體水平均勻度較好，是否與B場只采樣了大白豬有關(guān)，這可能需要進一步研究和分析，但也僅僅稍低于20%（17.40%和19.76%），說明這6家種豬場的抗體水平個體間相對差異較大。本試驗雖然只是對種豬企業(yè)的仔豬階段免疫進行了檢測和分析，但對其他類型的規(guī)模豬場均具有借鑒作用。

[1]殷震，劉景華.動物病毒學(xué)[M].第2版.北京:科學(xué)出版社，1997：652-664.

[2]李維誠.Idexx ELISA法在豬瘟之監(jiān)控與應(yīng)用[J].臺灣中興大學(xué)學(xué)報，2000（8）：23-30.

[3]南文金，黃健強，胡鴻惠，等.某規(guī)模化豬場豬瘟抗體水平的監(jiān)測[J].動物醫(yī)學(xué)進展，2016，37（3）：120-123.

[4]苗得園.Herdchek豬瘟抗體ELISA試劑盒在豬瘟控制中的應(yīng)用[J].中國獸醫(yī)雜志，2011，42（11）：50-51.

[5]韓崇江，張大丙.部分豬場豬瘟抗體有效保護水平的探討[J].中國畜牧獸醫(yī)，2009，36（10）：191-192.

[6]呼顯生，李雪.豬瘟、豬偽狂犬病和豬繁殖與呼吸綜合征免疫程序設(shè)計[J].中國獸醫(yī)學(xué)報，2015，35（1）：22-24，30.

[7]李安鵬，趙力，張智鵬.不同廠家豬瘟疫苗免疫效果比對試驗[J].動物醫(yī)學(xué)進展，2017，38（1）：132-135.

[8]李海明.豬瘟免疫程序的研究[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2003.

[9]原霖，顧小雪，張碩，等.規(guī)模豬場豬瘟免疫失敗調(diào)查及免疫程序優(yōu)化[J].中國獸醫(yī)雜志，2013，49（7）：27-29.

[10]范輝.優(yōu)化豬瘟免疫程序初探[D].福州:福建農(nóng)林大學(xué)，2014.

[11]何海健，張傳亮，陸國林，等.不同年齡豬群中豬瘟抗體監(jiān)測及免疫效果分析[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2012，32（7）：573-575，580.

[12]覃紹敏，龍愛淑，吳健敏，等.規(guī)模豬場種豬豬瘟群體免疫合格率與抗體離散度監(jiān)測及免疫效果分析[J].中國獸醫(yī)雜志，2011，47（11）：3-5.

（編輯：柳青）

中國多人感染黏菌素耐藥菌

【美聯(lián)社倫敦1月27日電】新研究顯示，在中國，一些人可能染上對用作最后治療手段的抗生素具有耐藥性的細菌，且感染者數(shù)量令人擔(dān)憂。

研究人員分析了超過1.7萬份樣本，它們出自浙江省和廣東省兩家醫(yī)院的普通腸道感染患者。

這些樣本約有1%對黏菌素具有耐藥性，而黏菌素常常被視為各種抗生素中的最后選擇。

這項研究周五發(fā)表在英國《柳葉刀》周刊上，是率先記錄中國多個省份耐藥性感染情況的文件之一。

幾十年來，中國一直把黏菌素用于農(nóng)業(yè)，以加速動物的生長發(fā)育，但這種藥物沒有用于人的治療。

科學(xué)家說，這項最新研究進一步證明，對動物過度使用抗生素可能波及人類。

衛(wèi)生官員早就擔(dān)心能抵抗黏菌素的細菌可能廣泛傳播，從而導(dǎo)致理論上無法醫(yī)治的超級細菌感染。在世界范圍內(nèi)，人們只發(fā)現(xiàn)很少的此類病例。

對耐藥細菌日益加劇的擔(dān)憂促使聯(lián)合國鼓勵各國減少抗生素的使用并研制新的藥物。

感染了這類耐藥細菌的患者通常可用現(xiàn)有的抗生素治療。但醫(yī)生警告說，隨著這些細菌產(chǎn)生對現(xiàn)有藥物的耐藥性，感染可能無法醫(yī)治。

專家還指出一個令人意外的情況：耐藥基因在細菌之間的傳播看起來非常容易。

英國微生物學(xué)學(xué)會發(fā)言人奈杰爾·布朗說：“現(xiàn)在看來這種耐藥基因有可能四處擴散，在不同類型的細菌之間傳播。”他還說，這可能導(dǎo)致感染急劇增加。

（轉(zhuǎn)自參考消息[N]，2017-01-30）

S858.285.3

A

1002-1957(2017)04-0102-03

2017-06-14

安徽省科技攻關(guān)（1704a07020066）；安徽省農(nóng)科院創(chuàng)新團隊（13C0405）；安徽省生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項目；安徽省生豬產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)發(fā)展資金項目

潘孝成（1971-），男，安徽霍邱人，助理研究員，博士，主要從事畜禽傳染病研究.E-mail:pxcpyq@sina.com

張丹俊（1962-），男，安徽含山人，研究員，主要從事畜禽傳染病研究.E-mail:zhangdj694@sina.com