豬流行性腹瀉和豬圓環病毒病混合感染的診治

王貴平，胡曉通，劉 帥

（湖南農業大學動物醫學院，湖南 長沙 410128）

豬流行性腹瀉和豬圓環病毒病混合感染的診治

王貴平，胡曉通，劉 帥

（湖南農業大學動物醫學院，湖南 長沙 410128）

2017年1月，湖南省婁底市某規模化豬場暴發了一場以新生仔豬腹瀉和嘔吐為主要癥狀的傳染病，從送檢腹瀉仔豬中經PCR檢測到了豬流行性腹瀉病毒和豬圓環病毒2型。經過調整免疫程序和對癥治療，該病得到了有效的控制，現報告如下。

1 發病情況

該場存欄經產母豬500頭，母豬產前60天和30天注射了國產某公司的豬流行性腹瀉病毒活疫苗。上月（12月）下旬開始母豬產仔后第2天，整窩仔豬突然出現嘔吐和水樣噴射狀腹瀉。0～7日齡的仔豬腹瀉后大多數死亡，8～40日齡以后仔豬腹瀉后大多數經過治療能康復，日齡越大死亡率越低。統計結果：2017年1月份產仔95窩998頭，發病881頭（占88.28%），死亡609頭（占61.02%）。

2 臨床癥狀及現場剖檢

3 病原檢測

采集6頭病豬的淋巴結、肺和腸等病料，送至湖南農業大學動物醫學院進行PCR檢查。根據流行病學、臨床癥狀和病理剖檢變化，初步確定檢查項目為豬圓環病毒2型（PCV2）和豬流行性腹瀉病毒（PEDV）。

3.1 引物

參考相關文獻，送上海生工生物工程股份有限公司合成（表1）。

3.2 樣品處理

取病豬的腸道內容物及腸系膜淋巴結和腹股溝淋巴結等組織約0.5 g，剪碎，加1 mL無菌PBS勻漿，加入無菌EP管中，-80℃反復凍融3次，10 000 r/min離心5 min，取100 μL上清液加入無菌EP管中。

表1 本試驗中所用到的引物

3.3 RNA提取及反轉錄

取上述上清液100 μL，按照RNA提取試劑盒操作說明提取總RNA，最后病料RNA溶于100 μL滅菌水中。按照反轉錄試劑盒操作說明進行反轉錄操作，獲得cDNA。

五是與中國農業科學院合作，在小嶺鄉大路村建立了小麥苗情數字化遠程監控監測點，可適時了解當地的土壤溫度、濕度、風力、風向等環境因素以及小麥的長勢情況。對現代微電子技術和網絡信息技術改造傳統農業，適應現代農業智能化、信息化發展要求，提升農業科學決策水平意義深遠。

3.4 DNA提取

取上述上清液100 μL，按照DNA提取試劑盒操作說明提取總DNA，最后病料RNA溶于100 μL滅菌水中。

3.5 PCR反應（25 μL）

1.5 μmol/L上、下游引物各1.0 μL，模板（DNA或cDNA）3.0 μL，10×PCR Mix 2.0 μL，加無菌水至20.0 μL。94℃預變性5 min后，按94℃ 45 s，表1中退火溫度30 s，72℃45 s的循環程序進行30次循環，最后一個循環結束后72℃再延伸7 min，取PCR產物于含EB的0.8%瓊脂糖膠中電泳，紫外線燈下觀察分析。

4 防控措施

4.1 加強生物安全措施

全場封群：在疫情期間，嚴禁生產區工作人員出入，飼養員和生產工具嚴禁串舍。進出豬場的車輛都要進行嚴格清洗和消毒。豬舍外面場地和豬舍空欄用2%～3%的燒堿溶液噴灑消毒，沖洗干凈后，再用福爾馬林液徹底消毒，空欄至少7 d再進豬。豬舍內每3 d用消毒水帶豬消毒1次，豬舍走廊和過道用福爾馬林液每3天消毒1次。病死豬都要經過深埋或化糞池處置等無害化處理。

4.2 緊急接種疫苗和對癥治療

對全群母豬進行PEDV和PCV2緊急接種。然后對產前30 d的生產母豬進行PEDV和PCV2跟胎接種。可以自配口服補液鹽，配方：氯化鈉4.5 g、氯化鉀1.5 g、碳酸氫鈉2.5 g、葡萄糖20 g，充分溶解于1 000 mL溫開水中即成；也可以用市售的口服補液鹽。將腹瀉欄的豬舍上游飲水開關關閉，下游飲水開關打開將管中水全部放完后關閉。從飲水管上游導入口服補液鹽，讓全豬群飲服。 即將分娩的母豬進產房前全身消毒，分娩前將會陰部和乳腺部仔細消毒后抹干。將新生腹瀉仔豬隔離，灌服奶粉和口服補液鹽和慶大霉素；用消毒藥水浸泡過的干燥抹布將仔豬嘔吐物和腹瀉物擦拭干凈。

5 結果與分析

5.1 臨床癥狀

腹瀉嚴重仔豬脫水，皮膚無彈性；被毛蓬亂，精神萎靡，水樣腹瀉，糞便呈水泥漿樣或黃色，體表常被稀糞污染。長期腹瀉仔豬極度消瘦最后死亡。將發病仔豬倆后腿往上提，發現仔豬腹股溝淋巴結明顯腫大，呈青紫色。

5.2 剖檢病變

腹瀉死亡仔豬小腸腸管內容物稀薄，呈黃色充滿黃色液體；腸壁變薄，常充滿氣體，腸系膜水腫、充血或出血變化，腸系膜淋巴結腫脹；有的腸系膜淋巴結有勻質蒼白色變化；漿膜可見到斑網狀變化。胃內充滿未消化的乳糜，胃壁呈現暗紅色於血，其他臟器無顯著一致性病變。

5.3 PCR檢測結果

用PCR方法從送檢的 6份病料中檢測到PEDV核酸片段（約450 bp，圖1）和PCV2核酸片段（約630 bp，圖2）的條帶，與預期大小一致。其中PEDV的檢出率為100%（6/6，圖1），PCV2的檢出率為50%（3/6，圖2）。

圖1 PEDV-PCR結果

圖2 PCV2-PCR結果

5.4 防控結果

經1個多月的綜合防控，新發腹瀉仔豬逐漸明顯減少，死亡率也大幅度降低至10%以內。45 d后恢復正常生產秩序。

6 討論

本次腹瀉主要發生于0～15日齡仔豬，尤其1～7日齡仔豬死亡率極高，幾乎達到100%。病料經疫苗公司檢測發現，豬瘟病毒（CSFV）、豬偽狂犬病病毒（PRV）、豬藍耳病病毒（PRRSV）以及豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）等均為陰性，可排除其他常見病毒致病的可能。根據發病情況、臨床癥狀、剖檢病變及（RT）PCR檢測，最終確定為PEDV和PCV2混合感染引起的仔豬腹瀉。

豬圓環病毒感染可以加重流行性腹瀉病毒感染程度，這一點可以在病原學PCR結果和臨床癥狀中得到證明，PCV2-PCR檢測為陰性者，PEDV-PCR檢測陽性條帶較弱，并且病豬淋巴結組織學變化不明顯；PCV2-PCR檢測陽性病豬的淋巴結病變嚴重[3]。感染圓環病毒2型的仔豬有可能受到免疫抑制，從而對流行性腹瀉病毒等其他病毒或細菌的易感性增加[4]。這些研究結果提示豬場應重視圓環病毒2型的預防工作，以免因其引起免疫抑制繼發其他病毒或細菌感染導致豬場出現嚴重疾病造成極高的仔豬死亡率。

一旦豬場出現比較嚴重的、死亡率較高的傳染病，首先應考慮的是及時隔離和消毒，然后及時準確地采集病料檢測，在參考實驗室檢測的結果上進行及時診斷。然后立即制定治療方案，包括綜合防控方案及特異性對癥治療措施，包括生物安全防控、對病豬群體進行全群緊急免疫及全群投藥、對個體病豬進行對癥治療。

混合感染案例提示應做好PCV2和PRRSV等導致機體免疫抑制病原的預防工作，以減少復雜疫病的發生。

[1]胡嘉彥.PCR技術在豬圓環病毒2型檢測中的應用[J].畜牧與飼料科學，2015，36（1）：7-9.

[2]于新友，李天芝，王金良，等.一步法RT-PCR快速檢測豬流行性腹瀉病毒[J].養豬，2014（5）：118-120.

[3]劉洋，庫旭鋼，劉曉麗，等.豬流行性腹瀉病和豬圓環病毒病混合感染的診治[J].中國畜牧獸醫，2015，42（10）：2753-2761.

[4]Hirai T,Nunoya T,Ihara T,et al.Dual infection with PCV-2 and porcine epidemic diarrhea virus in neonatal piglets[J].Vet Rec,2001,148(15):482-484.

（編輯：柳青）

S858.285.3

A

1002-1957(2017)04-0124-02

2017-06-18

湖南省教育廳優秀青年基金資助科研項目（13B050）；湖南農業大學動物醫學院2015年大學生創新性實驗項目（dycx1513）作者簡介：王貴平（1973-），男，湖北咸寧人，副教授，博士，研究方向為豬傳染病防控.E-mail：wanggp003@163.com