CCR7和D2-40在宮頸鱗癌中的表達及其與淋巴結轉移的關系①

宋亞男，宋繼榮

(佳木斯大學附屬第一醫院婦產科，黑龍江 佳木斯 154003)

CCR7和D2-40在宮頸鱗癌中的表達及其與淋巴結轉移的關系①

宋亞男，宋繼榮

(佳木斯大學附屬第一醫院婦產科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：探討在宮頸鱗癌中趨化因子受體7(CCR7)和D2-40的表達狀況,二者與淋巴結轉移的相關性。方法：使用免疫組化方法分別測定64例宮頸鱗癌(25例有淋巴結轉移，39例無淋巴結轉移)和30例正常宮頸中CCR7、D2-40的表達狀況,淋巴管內皮細胞用D2-40染色，計數微淋巴管密度(MLVD)。 結果：CCR7和D2-40 標記的MLVD均在有盆腔淋巴結轉移組中高表達，與無盆腔淋巴結轉移組及正常宮頸組比較有顯著差異，且CCR7和D2-40 標記的MLVD呈正相關。 結論：CCR7、D2-40高表達于有盆腔淋巴結轉移的宮頸鱗癌患者,且兩者為正相關。將CCR7結合D2-40檢測目的就在于更精確的判斷宮頸鱗癌淋巴結轉移。

CCR7；D22-40；宮頸鱗癌；轉移

女性惡性腫瘤排名第2位的是宮頸癌[1],宮頸癌的早期治療效果較好,治療效果較差的為中晚期,關系到其預后較為關鍵的要素為淋巴結轉移。CC族趨化因子受體CCR7, 絕大多數在內皮細胞和免疫細胞的胞膜上表達,參與機體反應主要通過與其配體作用。近期，研究證明[2,3]腫瘤轉移和CCR7與配體結合相關，因此大家把腫瘤淋巴結轉移的原因聚焦在CCR7上。目前普遍認為D2-40為有代表性的標記淋巴管物質[4],在探究腫瘤淋巴管與腫瘤生物學相關性方面被普遍運用[5],對腫瘤組織微淋巴管形成、癌細胞是否出現浸潤和轉移的判定有很大幫助。在宮頸癌病例中,鱗癌病例所占比例為75%～80%,本課題探討在宮頸鱗癌中趨化因子受體7和D2-40的表達狀況,二者與淋巴結轉移的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料

實驗組織均來自2014-01～2016-10在佳木斯大學附屬第一醫院婦產科行手術治療后的保存蠟塊，其中宮頸鱗癌組織64例(包括有盆腔淋巴結轉移25例，無盆腔淋巴結轉移39例),30例正常宮頸組織。

入組標準：(1)病理醫師需對切片進行反復確診；(2)患者有完整病歷資料、組織切片及存檔蠟塊；(3)患者術前未行抗腫瘤相關治療；(4)患者除外其他惡性腫瘤疾病。

1.2 主要試劑

鼠抗人CCR7單克隆抗體(北京博奧森生物技術有限公司)。鼠抗人D2-40免疫組織化學單克隆抗體、即用型快捷免疫組織化學Max Vision 檢測試劑盒、DAB 顯色試劑盒(福州邁新生物技術開發有限公司)。

1.3 方法

CCR7和D2-40均選用檸檬酸緩沖液(pH=6.0)高溫高壓抗原修復法對常規組織切片進行抗原修復,采用免疫組化染色，具體實驗方法參考試劑盒標注。按1∶100濃度稀釋CCR7。已知CCR7陽性組織及淋巴管瘤切片分別作CCR7和D2-40陽性對照,PBS取代一抗作陰性對照。DAB顯色,復染，封片,再用光鏡察看。

1.4 結果判定

CCR7陽性陰性的判定方法: 細胞膜和(或)細胞質顯現棕黃色記為著色。(1) 依照著色細胞占細胞總數比例評分,3分：≥50%；2分：10%～50%；1分：<10%；0分：無陽性細胞。(2)依照細胞著色強度評分,3分：重度染色(棕褐色)；2分：中度染色(棕黃色)；1分：輕度染色(淺黃色)；0分：無染色。兩種評分<3分記作陰性(-),≥3分記作陽性(+) 。D2-40結果判定方法: 首先低倍鏡(×100)下察看正常組織、瘤周及癌瘤內細胞著色最密集區域,再高倍鏡(×400)下計算淋巴管數目,每個陽性染色的單個微小脈管、內皮細胞簇和內皮細胞均算為1個微淋巴管。各例取3個視野,算其平均值。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 CCR7、 D2-40標記的MLVD在正常宮頸和宮頸鱗癌中的表達

CCR7在兩種組織中存在陽性表達，較少表達于成熟血管外周，較多表達于不成熟的血管外周。D2-40在兩種組織中存在陽性表達，D2-40在微淋巴內皮細胞的胞質內染色，呈棕黃色至棕褐色，染色區域主要集中在瘤周淋巴管上皮細胞，瘤間質內淋巴管稀疏染色。CCR7和D2-40均在宮頸鱗癌組織中高表達，與正常宮頸組織比較有顯著差異，見表1。

表1 CCR7、 D2-40標記的MLVD在正常 宮頸和宮頸鱗癌中的表達

2.2 CCR7、 D2-40標記的MLVD在有淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組中的表達

CCR7和D2-40均在有淋巴結轉移組中高表達，與無淋巴結轉移組比較有顯著差異，見表2。

表2 CCR7、 D2-40標記的MLVD在有淋巴結 轉移組和無淋巴結轉移組中的表達

2.3 宮頸鱗癌中CCR7與MLVD表達的相關性

D2-40標記的MLVD計數在CCR7陰性組(13.87±5.22)低于陽性組(17.77±5.17),差別有統計學意義(P<0.05)。根據Spearman相關分析得出CCR7和MLVD的關系為正相關(rs=0.444，P<0.05)。

3 討論

細胞的遷移主要依靠趨化因子發揮作用,細胞從趨化因子低濃度方向向高濃度方向移動,趨化因子受體在靶細胞表面有選擇性表達。CCR7屬于CC趨化因子受體亞家族的成員,功能性表達于多種組織和細胞類型, 其在機體發揮作用是通過結合相應配體CCL19、CCL21[6]，特別是在腫瘤生長和轉移相關研究中占據重要地位。大部分集中在外周免疫器官或組織的CCL21為CCR7的重要配體，CCL21發揮趨化作用的對象為大量免疫細胞。腫瘤細胞表面CCR7與淋巴結T細胞區CCL21結合, 誘發細胞內機動蛋白聚合，此過程促進偽足形成，偽足為腫瘤細胞發生浸潤和轉移至關重要的條件，導致腫瘤細胞沿淋巴結發生運動浸潤繼而轉移到遠處。在宮頸癌中,Kodama[7]等發現在宮頸鱗狀上皮細胞癌中CCR7高表達,并且和淋巴管或淋巴結轉移有著緊密的聯系。D2-40作為單克隆抗體,能夠忽略血管內皮細胞，而精確的標識淋巴管內皮細胞[8],可應用在腫瘤的淋巴管內皮,在腫瘤組織微淋巴管形成、判定癌細胞發生轉移方面有很大幫助。國內研究示[9]D2-40抗體測定腫瘤的淋巴管具備特異性強和敏感度高的特點,有助于預測淋巴結轉移及預后,在宮頸鱗癌治療方面發揮至關重要的作用。文獻報道, D2-40水平在惡性腫瘤(如肺癌、口腔癌、結直腸癌、胃癌等)中和淋巴結轉移呈正相關。CCR7通過上調VEGF-C(淋巴管生成因子)使腫瘤淋巴管增生,通過與相應受體特異性結合,活化酪氨酸激酶傳導通路,促進腫瘤淋巴管形成,目前標識淋巴管具有特異性的物質為D2-40,故用此計算微淋巴管密度。本研究顯示: CCR7、D2-40高表達于有盆腔淋巴結轉移的宮頸鱗癌患者,且兩者為正相關。直接蔓延及淋巴轉移為宮頸癌的重要轉移方式,浸潤與轉移是造成患者死亡的主要原因[10]，因此宮頸癌的淋巴結轉移更得到大家的重視。CCR7、D2-40作為評價宮頸鱗癌淋巴結轉移潛能的標志物,聯合監測為淋巴結轉移提供更為有效的指標,同時對臨床治療方案選擇起指導作用,為宮頸癌醫治及抑制淋巴結轉移提供充足的參考資料。

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宋亞男(1990～)女，黑龍江佳木斯人，在讀碩士研究生。

宋繼榮(1969～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫師，碩士研究生導師。E-mail:786577037@qq.com。

R737.33

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1008-0104(2017)04-0164-02

2016-12-19)