糖尿病易感與MTHFR SNP rs1801133基因多態性的相關性①

王瑞瑞，潘佳秋，李麗疆，張永晨

(1.佳木斯市中心醫院內分泌科，黑龍江 佳木斯154002；2.佳木斯大學附屬第一醫院內分泌科，黑龍江 佳木斯 154003；3.佳木斯市公安局刑事技術支隊，黑龍江 佳木斯 154007)

糖尿病易感與MTHFR SNP rs1801133基因多態性的相關性①

王瑞瑞1，潘佳秋2，李麗疆2，張永晨3

(1.佳木斯市中心醫院內分泌科，黑龍江 佳木斯154002；2.佳木斯大學附屬第一醫院內分泌科，黑龍江 佳木斯 154003；3.佳木斯市公安局刑事技術支隊，黑龍江 佳木斯 154007)

目的：探討糖尿病易感與MTHFR SNP rs1801133基因多態性的相關性以及胰島素抵抗2型糖尿病、空腹血糖以及體重指數(BMI)與糖尿病的相關性的關系。方法：熒光原位雜交法檢測MTHFR SNP rs1801133基因多態性，研究基因多態性與糖尿病易感的相關性、胰島素患者體重指數、胰島素抵抗合并高血壓的關性。結果：BMI(kg/m2)胰島素抵抗組為27.9±6.5，對照組為23.8±1.9，差異顯著(P<0.01)；BMI及血糖濃度有一定關聯，差異有顯著性(P<0.05)；與胰島素抵抗合并高血壓具有一定關聯，差異有顯著性(P<0.05)。治療前rs1801133 TT基因型治療前空腹血糖明顯高于基因型，12.4±2.3 、CC9.3±2.2差異有顯著性(P<0.05)，合并用藥后血糖濃度具有關聯，CT基因型血糖高于其他兩個基因型，TT與CT基因型比較差異有顯著性6.35±0.55，5.9±0.57，(P<0.05)。結論：高體重指數是糖尿病胰島素抵抗的高度危險因素； MTHFR SNP rs1801133 基因多態性可能與糖尿病易感及糖尿病合并高血壓有關聯；THFR SNP rs1801133基因多態性與胰島素抵抗患者治療前后血糖濃度有一定關聯。

糖尿病易感；MTHFR SNP rs1801133；基因多態性

隨著人們經濟水平的提高和生活飲食方式的改變，基礎代謝異常尤其是糖代謝異常對人類健康已經構成了主要的影響，糖尿病(Diabetes)發病率呈逐年上升的趨勢[1]，在糖尿病及相關疾病高血壓[2]、冠心病成因與治療的探討中，基因多態性對2型糖尿病形成與治療的影響是醫務工作者關心的主要課題之一[3]，已經有許多研究者獲得了可喜的成果，JiazhongS等人對亞甲基四氫葉酸還原酶(Methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)基因多態性的相關性等進行研究[4]。Alharbi K K研究了rs934167 、rs1801123和rs1801278，結果顯示rs934167 CC型空腹血糖低于CT+TT型，rs1801123TT型與空腹血糖相關，低于CT+CC型，rs1801278 CC型血漿胰島素水平低于CT+TT型，表明基因多態性與空腹血糖相關和血漿胰島素水平相關[5]。本實驗擬選擇MTHFR SNP rs1801133多態性與胰島素抵抗2型糖尿病、空腹血糖以及體重指數(BMI)與糖尿病的相關性進行研究，為臨床治療2型糖尿病提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料

例病組：入選2014-07～2015-04黑龍江東部地區漢族人群，在我市三甲醫院內分泌科住院及門診2型糖尿病患者。

a組：按照1999年WHO/ISH高血壓診斷標準,選擇坐位舒張壓(DBP)90～109mmHg(1mmHg=0.133kPa)、收縮壓(SBP)160～179mmHg，年齡、性別不限，具有2型糖尿病、血壓高于標準的患者為糖尿病合并高血壓組。體重指數(BMI)>25。

b組：按照HOMA胰島素抵抗指數(HOMA-IR)進行評價，HOMA-IR =(FPG mmol/L×Fins pmol/L)/22.5以HOMA-IR≥1.75作為胰島素抵抗組[6]。

c組：選取在本院體檢，無糖尿病史和高血壓病史者作為健康對照組。

血液標本采集：使用一次性真空采血管(EDTA 抗凝，紫帽管)采集2～3mL靜脈全血(不需空腹)，于 4℃或～20℃低溫保存，保存時間不宜超過 24h。

1.2 儀器

TL-988實時熒光定量PCR，西安天隆科技儀器有限公司。HC-3017高速離心機，科大創新股份有限公司中佳分公司。數顯恒溫水浴鍋HH-S2，金壇市醫療儀器廠。移液槍Thermo，美國賽默飛世爾公司。掌式離心機，珠海博邁杰生物科技有限公司。

1.3 方法

采用熒光原位雜交法對以上分組人員的IRS 1 SNP rs2943650，MTHFR SNP rs1801133兩個基因位點進行SNP檢測。

1.3.1 基因多態性檢測方法

①樣品檢測取 每份樣品分別取150μL新鮮全血加入含有1000μL氯化銨溶液的Eppendorf 管中，顛倒混勻后室溫放置5min，3000r/min(700g)離心5min，用移液器吸出上清液。在富集了白細胞的管中加入100μL耀金保，震蕩混勻，室溫放置20～30min。吸取本液1.0～1.5μL加入待測基因對應的耀金分試劑中，漩渦混勻，瞬時離心，上機檢測；檢測條件：95℃預變性600s；95℃變性30s，62℃復性75s，45或50個循環。在樣品檢測的同時，加測3種不同基因型的質控品作為對照。②對照組檢測，方法同上。 ③基因型的判斷：當一條基因熒光曲線值高于另一條基因熒光曲線，且兩條曲線的St差值比雜合子要大，或者其中一條曲線的St值為-1，根據曲線顏色判斷為野生或突變純合子。當兩條熒光曲線幾乎同時升起，且趨勢大致相同，達到平臺期的時間也相近，兩條曲線St值等于或小于質控品的雜合子St值之差，判斷為雜合子[7]。并將檢測的樣品熒光曲線圖與質控品曲線圖進行比較。MTHFR SNP rs1801133熒光擬合曲線如圖a。

圖a MTHFR SNP rs1801133(C>T)熒光擬合曲線

1.4 統計學方法

采用統計學軟件SPSS11.0軟件進行統計分析，計數資料采用χ2檢驗，以P<0.05為具有顯著性。

2 結果

2.1 糖尿病易感的相關性

2.1.1 患者的一般情況

本實驗對照組共收集樣本90例，胰島素抵抗患者樣本108例，兩組性別、年齡、體重指數(Body Mass Index，BMI)見表1。

表1 胰島素抵抗組與對照組一般資料

兩組性別年齡差異沒有顯著性(P>0.05)，其中胰島素抵抗組體重指數明顯高于對照組，差別有高度顯著性(P<0.01)。

2.1.2 基因多態性與胰島素抵抗的關系

分別對胰島素抵抗組和對照組樣本進行檢測rs1801133基因多態性，計算各基因型的分布頻率，檢測見表2。

表2 rs1801133基因多態性與胰島素抵抗的關系

rs1801133三種基因型分布頻率差異有顯著性(P<0.05)，b組CT基因型頻率高于c組，而TT基因型低于c組。分層統計分析后，均具有顯著性。

3.1.3 基因多態性與胰島素抵抗患者BMI、空腹血糖關系

分別對胰島素抵抗患者測定空腹血糖，按基因位點總結各基因型與糖尿病伴有 高血壓患者BMI、空腹血糖關系，見表3。

表3 rs1801133基因多態性與高血壓患者 BMI、空腹血糖關系

rs1801133位點各基因型患者的BMI指數TT>CT>CC，對應的空腹血糖濃度也呈遞增趨勢，既TT>CT>CC，差異有顯著性(P<0.05)。

3 討論

①本試驗MTHFR SNP rs1801133(C>T)基因型的判斷采用熒光擬合曲線法，方便、快捷、準確②本試驗結果表明糖尿病組體重指數明顯高于對照組，差別有高度顯著性(P<0.01)。表明BMI體重指數是糖尿病的高度危險因素。③本實驗表明MTHFR SNP rs1801133位點各基因型患者的BMI指數TT>CT>CC，對應的空腹血糖濃度也呈遞增趨勢，從基因型分布頻率進一步說明BMI體重指數是糖尿病的高度危險因素。④本實驗的胰島素抵抗組選取的基因位點MTHFR SNP?rs1801133在CC、CT、TT三種基因型分布頻率差異有顯著性(P<0.05)，與文獻報道相符。⑤在本實驗中的前期實驗研究也顯示在對胰島素受體底物MTHFR SNP1 rs2943650等位基因與高血壓糖尿病的關系研究中得出，TT>TC>CC，具有顯著性(P<0.05)。由此可推斷此位點T等位基因變異對于2型DM合并高血壓有指導意義，與文獻報道相符。

[1]唐金玲.有胰島素抵抗的2型糖尿病患者細胞因子及CRP測定的意義[J].中國現代 藥物應用,2014,8(3):165-166

[2]佐璐,方芳,楊軍,等.佳木斯地區健康人群與高血壓患者CYP3A4 *1G 基因多態性分析[J].黑龍江醫藥科學,2015,38(1):7-9[3]叢培麗,方舟,荊紅英,等.CYP2C19 *1*17基因多態性對氯吡格雷臨床療效不良反應影響的系統評價[J]. 黑龍江醫藥科學,2015,37(2):47-49

[4]JiazhongS,YnaehengX,JingeX,et al.Methylenetetrhaydrooflatereduetase Polymoprhismassoeiatedwithsusc Petibilitytoeoronaryheartdiseasein Chinesety Pe2dibaetie Patienis[J]Moleeularnad Cellular Endoerinology,2005，(229):95-10

[5]Alharbi K K, Khan I A, Abotalib Z,et al. Insulin receptor substrate-1 (IRS-1) Gly927Arg: correlation with gestational diabetes mellitus in Saudi women [J]. Biomed Res Int, 2014, 2014:146-495

[6]柳紅芳,李潔,李慧萍,等.2型糖尿病胰島素抵抗患者中醫證候特征及血脂水平的臨床研究[J].北京中醫藥大學學報,2009,16(1):1-4

[7]袁曉珍. 實時熒光PCR技術在丙型肝炎病毒基因型檢測中的應用[J].廣東醫學,2011,32(5):16-18

王瑞瑞(1985～)女，黑龍江佳木斯人，在讀碩士研究生，主治醫師。

張永晨(1983～)男，黑龍江佳木斯人，法醫師。E-mail：xiaoweiwei100@163.com。

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