Annexin A3在三陰乳腺癌中的表達及其臨床意義①

王 新，盧玉元

(佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154007)

Annexin A3在三陰乳腺癌中的表達及其臨床意義①

王 新，盧玉元

(佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154007)

目的：探索討論三陰乳腺癌(TNBC)組織中Annexin A3的表達及其臨床意義。方法：搜集本院從2012-01～2015-12共100例非三陰乳腺癌(non-TNBC)組織中使用隨機區組的方式選擇50例組織標本，TNBC組織標本50例,癌旁正常組織標本50例為對照組，各組間進行對比分析。應用免疫組織化學的方法檢測Annexin A3在TNBC組織、non-TNBC組織和癌旁組織中被表達的情況，探討Annexin A3能否有望成為TNBC的特異性指標，分析總結TNBC的臨床病理特征與Annexin A3表達情況有無相關性。結果：Annexin A3在TNBC 50例樣本組織中的陽性表達率為31/50(62%)，癌旁組織陽性表達率為5/50(10%)，前者與后者相較，前者明顯高于后者，差異具有統計學意義(P<0.05)。與non-TNBC(陽性表達率62%)比較，前者與后者統計學上差異不大，無意義(P>0.05)。患者年齡、病理類型、腫瘤大小、腋淋巴結有無轉移、臨床分期、家族史等均與Annexin A3在TNBC中的表達情況無明顯的相關性(P>0.05)。 結論： Annexin A3可能參與乳腺癌的發生和發展的過程，它可能是腫瘤患者預后差的一個危險因素。TNBC臨床病理特征與Annexin A3的表達無關聯。它雖然不是TNBC的獨特的檢測指標，但可作為一種有價值的乳腺癌的預后標記物，有望被作為乳腺癌患者的預后不佳的非特異性標志。

Annexin A3；TNBC；non-TNBC

乳腺癌是一種具備高度異質性的占全國惡性腫瘤比例7%～10%的女性常見惡性腫瘤，其發病率僅次于宮頸癌，其發病率近年來逐年上升并有超越宮頸癌的態勢。甚至于在某些地區，高居首位的影響女性健康的惡性腫瘤已經被認為是乳腺癌[1]。乳腺癌當中的ER、PR與Her-2表達均為陰性的一種類型被稱之為三陰乳腺癌(TNBC)。絕經前的年輕女性較為多發，主要特點為惡性程度高、預后較差[2]。它與BLBC相較，因其在免疫表型、組織形態和臨床表現等多方面都有很多相似之處，從而引起各國腫瘤學家的高度關注。Nielsen等[3]學者將ER、PR與Her-2的表達均為陰性作為基底樣乳腺癌的主要特征。TNBC在分子生物學行為、臨床病理特征等多方面都具有獨特性，而且與其他類型乳腺癌相比，其預后更差。因為病理特征的特殊性，故不能采取內分泌等相關治療，目前也沒有相應的免疫治療和靶向治療的藥物或者方法。為了找到合適的靶向治療依據和理想的腫瘤標志物，這次試驗采取免疫組化的方法檢測Annexin A3在TNBC組織中的表達情況及其臨床意。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集佳木斯大學附屬第一醫院住院部及門診部從2012-01～2015-12共100例非三陰乳腺癌(non-TNBC)組織中使用隨機區組的方式選擇50例組織標本，TNBC組織標本50例,癌旁正常組織標本50例為對照組，各組間進行對比分析。兩組患者性別均為女性，每組患者平均年齡分別為(34.7±10.5)歲和(36.6±10.5)歲。

1.2 試劑和方法

濃縮型鼠抗人Annexin A3單克隆抗體購于武漢博士德生物工程有限公司、SP試劑盒和DAB顯色劑均購于北京中杉金橋生物技術有限公司。采用免疫組化檢測 Annexin A3在non-TNBC,TNBC和癌旁組織中的表達,首先將選取的標本蠟塊按4μm厚度切片,每例5張切片，石蠟切片脫蠟后蒸餾水中漂洗5分鐘，高壓修復后取出切片放入蒸餾水沖洗兩次，滴加一滴3%的過氧化氫溶液以阻斷內源性過氧化物酶的活性，再次沖洗后滴加PH7.8的胃蛋白酶，滴加封閉液，滴加適當濃度的(Annexin A3稀釋度為 1∶200)一抗，PBS沖洗后滴加二抗，每張切片加2滴新鮮配制的DAB工作液，顯色情況通過顯微鏡觀察，蘇木紫染色 、分化液、返藍，酒精、二甲苯依次脫水，中性樹膠封片，晾干，PBS替代一抗作為陰性對照。

1.3 陽性結果判定

由本院病理科兩位主任醫師對疫組織化學結果進行審閱，Annexin A3主要被著色于細胞的細胞質。陽性強度評分和陽性細胞占所有細胞的比例評分作為免疫組化評分標準，評分方法：①細胞數表達為陽性的評分方法：每張切片隨機取5個高倍視野進行觀察并計數陽性數細胞，將陽性率分為1%～24%、25%～49%、50%～74%、≧75%四個等級，分別記分為1分、2分、3分、4分。②判斷染色強度的評分方式：0分為無染色，1分為顯色明顯比背景高的淡黃色顆粒，2分為淺棕黃色顆粒，3分為深棕黃色顆粒。陰性(-)結果為上述二者評分之和小于2分者，弱陽性(+)為2～3 分，中度陽性()4～5分，強陽性()為6～7 分[4]。

1. 4 統計學方法

采用χ2檢驗和四格表的精確概率法判斷Annexin A3在各族資料中的表達與各病理指標的相互關系,運用spearman等級相關檢驗來判斷Annexin A3在TNBC與non-TNBC組織之間的相互關系用

以P<0.05為差異具有統計學意義，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 免疫組化結果

Annexin A3主要被表達于組織的細胞核和細胞漿中，TNBC和癌旁組織中Annexin A3的陽性表達率分別為31/50(62%)和5/50(10%)。前后兩組進行比較，差異顯著，統計學上有意義(χ2=5.774P<0.05)。見圖1、圖2。

圖1 Annexin A3在TNBC中的陽性表達(En Vision×400)

圖2 Annexin A3在癌旁組織中的陽性表達(En Vision×400)表1 Annexin A3的表達與TNBC患者臨床病理特征的關系

分組nAnnexinA3陽性數陽性率(%)χ2值P值年齡(歲) <35191052.61.142>0.05 ≥35312167.4腫瘤家族史 無302066.70.693>0.05 有201155.0病理類型 浸潤性癌452760.00.764>0.05 其他類型5480.0腫瘤大小 ≤2cm7228.60.198>0.05 >2～5cn281967.9 ≥5cm151066.7腋淋巴結轉移 無301756.70.905>0.05 有201470.0臨床分期 Ⅰ期、Ⅱ期271866.70.543>0.05 Ⅲ期、Ⅳ期231343.5

2.2 TNBC臨床病理特征與Annexin A3之間的表達情況的相互關系

患者的年齡、病理類型、腫瘤大小、腋淋巴結轉移、臨床分期、家族史等因素與Annexin A3的陽性表達率無關(P均>0.05)，見表1。

2.3 TNBC與non-TNBC組織Annexin A3的表達情況對比

Annexin A3主要表達于二者的細胞核和細胞漿中，其在non-TNBC中的陽性表達率為31/50(62%)，與癌旁正常乳腺組織相比較差異有統計學意義(P<0.05)，其與TNBC組相比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 Annexin A3在各類乳腺癌組織中的表達情況(n=50)

注：*與TNBC組比較；**與癌旁正常組比較；***與 non-TNBC組比較。

3 討論

Annexin A3是一種約占體內細胞內總蛋白的2%[5]的磷脂結合蛋白超家族的成員之一，其超家族具有由70個氨基酸殘基組成的保守的中心結構域和特異的N端序列，其與胞吐作用中的膜融合、囊泡的運輸及鈣離子通道的形成以及不同通路中的信號轉導等膜轉運等有關，另外還參與了一些依賴于鈣調蛋白的通路，并能夠參與調控細胞的分化、細胞骨架蛋白間的相互作用及炎性反應等不同過程。它還具有獨特的 N 端序列，這種特異的N端序列與它所特有的功能相關聯。其與患者的臨床分期、有無淋巴結轉移、腫瘤是否復發及患者的生存率下降等密切相關。在大部分惡性腫瘤中，Annexin A3在不同程度上都可檢測到表達失調的情況，有研究[6～7]顯示在肺腺癌中，Annexin A3的表達明顯升高。Kollermann 等[8]的研究已經表明，Annexin A3的表達可以作為評價前列腺癌預后的獨立指標之一。由于TNBC的高度異質性，并且目前沒有發現有效的免疫治療和靶向治療等方式，雖對化療有一定療效，但其預后來看明顯不如其他類型乳腺癌患者，有研究顯示[9]，在傳統化療方案(紫衫類蔥環類為基礎)的基礎上加用希羅達能顯著改善TNBC患者的無復發生存期和總生存期。

為了尋找針對TNBC的獨特的靶點，為其治療和改善預后打開新的思路，本實驗試圖通過免疫組織化學(SP)法來檢測Annexin A3的表達情況，結果表明：在TNBC和癌旁組織中Annexin A3的陽性表達率分別為(62%)和(10%)，前后兩組進行比較，二者差異具有統計學意義(χ2=5.774，P<0.05)。表明在乳腺癌發生的早期分子生物學事件中，Annexin A3也參與其中，可能是腫瘤患者預后差的一個危險因素。TNBC患者的年齡、病理類型、腫瘤大小、腋淋巴結轉移、臨床分期、家族史等因素等與Annexin A3的表達均無明顯相關性(P均>0.05)。表明各項臨床病理特征與TNBC患者無相關性，不能作為評判TNBC獨特性或者嚴重程度的指標。Annexin A3在TNBC與non-TNBC組織中的表達情況，二者無明顯的差異，從統計學角度分析，差異無意義(P>0.05)，表明Annexin A3不是TNBC的獨特的檢測指標，不能作為TNBC指導治療的獨特要素。Annexin A3在TNBC與non-TNBC組織中的表達明顯比癌旁組織組高，差異有統計學意義(χ2均=14.67，P均<0.05)，說明Annexin A3只能作為乳腺癌的特異指標，不能作為TNBC的獨特性的指標，其有可作為一種有價值的乳腺癌的預后標記物，為以后的乳腺癌的治療和預后提供新的方法。

[1]王新，韓麗麗，趙海豐，等.PDCD4、mTOR在乳腺癌中的表達及意義[J].黑龍江醫藥科學，2016，39(1)：82-86

[2]Rakha EA,EI-Sayed ME,Green AR,et al.Prognostic markers in triple negative breast cancer[J].Cancer,2007,109(1)：25-32

[3]Nielsen TO,Hsu F D,Jensen K,et al.Immunohistochemical and clinical characterization of the basal-like subtype of invasive breast carcinoma[J].Clin Cancer Res,2004,10(16):5367-5374

[4]李義強，徐默.WWO和Ang-2在乳腺癌生成與發展過程的表達[J].黑龍江醫藥科學，2016，39(1)：72-73

[5]Mussunoor S，Murray GI. The role of annexins in tumour development and progression [J].Pathol，2008，216 (2)：131-140

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[7]邱海江，吳志明，王曉稼.Annexins 與惡性腫瘤的關系研究[J].腫瘤學雜志 ，2014，20(2)：156-161

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[9]馬靜，魏素菊.三陰乳腺癌的最新治療進展[J].中國腫瘤臨床,2011,38(19):1234-1238

王新( 1963 ～ ) 男，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫師，教授，碩士研究生導師。

盧玉元(1989～)男，甘肅酒泉人，在讀碩士研究生。E-mail:278389575@qq.com。

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1008-0104(2017)04-0079-03

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