飲料中合成著色劑檢測(cè)方法的驗(yàn)證

吳建明

摘 要：飲料通過酸性條件下聚酰胺粉吸附和堿性條件下無水乙醇-氨水-水解吸的處理，采用高效液相色譜法分離，可變波長(zhǎng)檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。驗(yàn)證結(jié)果表明方法線性方程相關(guān)系數(shù)均大于0.999， 平均回收率在90 %～110%之間，該檢測(cè)方法快速、靈敏、準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞：飲料；合成著色劑；高效液相法

1 試劑

乙酸；甲醇；聚酰胺粉（過200目篩）；乙酸銨；甲醇-甲酸溶液（6：4）；無水乙醇-氨水-水溶液（350：2：150）；pH4的水（檸檬酸溶液調(diào)pH到4）。

2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

準(zhǔn)確稱取檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、新紅、靛藍(lán)、亮藍(lán)各10mg，分別置10mL容量瓶中，加水到刻度，配成標(biāo)準(zhǔn)貯備液。分別一定量的各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)貯備液標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液混合至10mL容量瓶，用水定容至刻度為標(biāo)準(zhǔn)工作液。

3 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀帶二極管陣列檢測(cè)器；電子天平；恒溫水浴鍋或超聲儀；G3垂融漏斗。

4 分析步驟

4.1 試樣處理

稱取20g菊花茶飲料，放入100mL燒杯中，超聲驅(qū)除二氧化碳。樣品溶液加檸檬酸溶液調(diào)pH到6，將1g聚酰胺粉加入到樣品溶液中，攪拌片刻，以G3垂融漏斗抽濾，用pH為4的水洗滌3次～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗滌3次～5次再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3次～5次，直至色素完全解吸，收集解吸液，加乙酸中和，蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至10mL，待測(cè)。

4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別量取0.10mL，0.20mL，0.40mL，0.60mL，0.80 mL，1.00 mL標(biāo)準(zhǔn)工作液于10mL容量瓶中，用水定容，按標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液溶度折算出各個(gè)濃度點(diǎn)的具體濃度。

4.3 色譜條件

色譜柱：C18柱4.6×250mm，5μm；進(jìn)樣量：10μL；流速：1.0mL/min；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)： 二極管陣列檢測(cè)器波長(zhǎng)范圍：190nm～800nm；流動(dòng)相：甲醇：0.02mol/L乙酸銨溶液，按以下梯度洗脫表見表1。

5 方法驗(yàn)證

5.1 波長(zhǎng)選擇

樣品在254nm波長(zhǎng)下在5min中出現(xiàn)明顯雜質(zhì)峰與在4.7min的檸檬黃和在5.2min的新紅有明顯干擾，而樣品在檸檬黃最大吸收波長(zhǎng)425nm和新紅最大波長(zhǎng)505nm處均無雜質(zhì)峰干擾，故檸檬黃采用425nm波長(zhǎng)下測(cè)定，新紅采用505nm測(cè)定；其次因?yàn)榱了{(lán)在254nm波長(zhǎng)的響應(yīng)值小，容易引入較大偏差，在波長(zhǎng)603nm處有較大吸收峰，所以亮藍(lán)選擇603nm波長(zhǎng)下測(cè)定。最后因?yàn)榍{菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃采用254nm均有較理想的響應(yīng)值和無明顯干擾峰，所以均采用254nm測(cè)定。

5.2 線性范圍

按照4.2配置各合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)曲線，依次進(jìn)高效液相色譜儀測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)建立曲線圖，讀出其線性相關(guān)系數(shù)。

從表2數(shù)據(jù)可得出合成著色劑（檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃和亮藍(lán)）線性擬合相關(guān)系數(shù)均大于0.999，滿足方法要求。

5.3 樣品精密度實(shí)驗(yàn)

取20g的樣品，按照方法規(guī)定處理樣品，配制成樣品溶液，進(jìn)行測(cè)試。注：經(jīng)測(cè)定樣品中只含有檸檬黃，本次只針對(duì)檸檬黃的含量精密度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

從表3數(shù)據(jù)分析得出，測(cè)得樣品中檸檬黃結(jié)果含量為0.44mg/kg，RSD%為1.9%，滿足《GB/T 27404-2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》標(biāo)準(zhǔn)要求，重復(fù)性良好。

5.4 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

取20g的樣品兩份，加入0.2mL標(biāo)準(zhǔn)工作液按照方法規(guī)定處理樣品，配制成樣品溶液，進(jìn)行測(cè)試分別計(jì)算單個(gè)回收率和平均回收率。

從表4數(shù)據(jù)可得出各種色素的回收率在90%～110%內(nèi)，均滿足《GB/T 27404-2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》標(biāo)準(zhǔn)中回收率要求。

6 驗(yàn)證結(jié)果及評(píng)價(jià)

針對(duì)產(chǎn)品的特性，通過實(shí)驗(yàn)建立了菊花茶飲料中合成著色劑含量測(cè)定的方法，并對(duì)方法進(jìn)行了該方法進(jìn)行了驗(yàn)證，驗(yàn)證結(jié)果較令人滿意，合成著色劑各色素在相應(yīng)吸收波長(zhǎng)下線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%，回收率達(dá)到90%～110%，均能達(dá)到方法的要求。

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