HPLC法同時測定維C銀翹片中對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯 那敏、維生素C的含量

覃配芬+韋金燕

摘 要：目的 建立HPLC法同時測定維C銀翹片中對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏、維生素C含量。方法 采用Hypersil NH2（4.6 mm×200 mm，5 μm）色譜柱，以乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調pH至2.2）為流動相，柱溫30℃，波長246 nm。結果 對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏、維生素C線性范圍分別為0.16～1.60μg（r=0.9996）、0.08～0.80μg（r=0.9999）、0.04～0.4 μg（r=0.9991）；加樣平均回收率（n=6）分別為98.7%、98.1%和98.7%，RSD分別為0.4%、1.5%和1.1%。結論 此方法簡便、快速、準確。

關鍵詞：維C銀翹片 對乙酰氨基酚 馬來酸氯苯那敏 維生素C HPLC

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2017）07（b）-0253-03

維C銀翹片為2015年版中國藥典收載的藥品，由山銀花、連翹、荊芥、牛蒡子、馬來酸氯苯那敏、對乙酰氨基酚和維生素C等13味組成，質量標準采用HPLC分別測定綠原酸、牛蒡苷、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏和維生素C五個成分。該文擬建立HPLC同時測定對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏和維生素C三個成分含量，可為維C銀翹片的生產控制和質量標準提高提供實驗依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

依利特P200Ⅱ高效液相色譜儀（大連依利特分析儀器有限公司）；BP211D型電子天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；SG3300HD型超聲波清洗器（上海冠特超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

對照品：對乙酰氨基酚（批號：100018-200408）、馬來酸氯苯那敏（批號：10047-9904）、維生素C（批號：100425-201504）。對照品物質均購自中國食品藥品檢定研究院。

試劑：乙腈為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。

藥品：維C銀翹片制劑，取自廣西純正堂制藥有限公司和廣西花紅藥業股份有限公司。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 混合對照品溶液

精密稱取對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏和維生素C對照品適量，加0.5%焦亞硫酸氫鈉溶液（用磷酸調節pH值至2.2）制成含對乙酰氨基酚80 μg/mL、馬來酸氯苯那敏40 μg/mL和維生素C20 μg/mL的混合溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液

取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取細粉0.1 g，置50 mL量瓶中，加0.5%焦亞硫酸氫鈉溶液（用磷酸調節pH值至2.2）稀釋至刻度，超聲處理10 min（功率300 W，頻率40 kHz），搖勻，濾過，精密吸取濾液1 mL，置10 mL量瓶中，加0.5%焦亞硫酸氫鈉溶液（用磷酸調節pH值至2.2）稀釋至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，備用。

2.1.3 陰性樣品溶液

取維C銀翹片中藥干膏提取物（不含對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏和維生素C），按“2.1.2”項下方法制備。

2.2 色譜條件

色譜柱：Hypersil NH2（4.6 mm×200 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調節pH至2.2）（70∶30）；檢測波長：246 nm；進樣量：10 μL。

2.3 含量測定方法學考察

2.3.1 線性關系考察

分別精密吸取“2.1.2”項下混合對照品溶液2、4、8、10、15、20μL進行測定，以峰面積（Y）為縱坐標，進樣量（X，μg）為橫坐標，繪制標準曲線，各成分的回歸方程、線性范圍見表1。

2.3.2 專屬性試驗

分別精密吸取陰性樣品溶液、混合對照品溶液和供試品溶液各10 μL，進樣測定，對照品及供試品中對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏和維生素C的色譜峰分離良好，陰性樣品中指標成分在相應保留時間處均無吸收峰，表明方法專屬性良好，見圖1～圖3。

2.3.3 精密度試驗

精密吸取同一混合對照品溶液，按“2.2”項下色譜條件連續進樣6次進行測定，測得對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏和維生素C峰面積的RSD分別為0.4%、0.6%和0.9%，表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，分別于配制后的0、2、4、8、10、12 h按“2.2”項下色譜條件進行測定，測得對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏和維生素C峰面積的RSD分別為0.6%、1.1%和1.6%，表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.3.5 重復性試驗

取維C銀翹片樣品，研細，取6份，每份0.1 g，精密稱定，分別按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件進樣測定，測得對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏和維生素C的平均標示量百分含量分別為99.8%、99.7%和95.7%，其RSD分別為1.2%、1.6%和2.1%，表明該方法重復性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的維C銀翹片樣品6份，每份0.1 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，分別精密加入含有混合對照的0.5 %焦亞硫酸氫鈉溶液（用磷酸調節pH值至2.2）（對乙酰氨基酚3.5 mg/mL、馬來酸氯苯那敏0.035 mg/mL和維生素C1.5 mg/mL）10 mL，按“2.1.2”項下方法制備加樣供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件下進行測定，計算回收率及RSD，對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏和維生素C的加樣平均回收率（n=6）分別為98.7%、98.1%和98.7%，RSD分別為0.4%、1.5%和1.1%。

2.4 供試品測定

取5批維C銀翹片樣品，3批來自廣西花紅藥業股份有限公司（編號：170101、170102、170103）；2批來自廣西純正堂制藥有限公司（170s301、170302），按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件進行測定，以外標法計算標示百分含量，結果見表2。

3 討論

文獻多采用C18柱反相色譜測定[1，2]，該文采用NH2柱正相色譜分析，溶劑分別采用甲醇和0.5%焦亞硫酸氫鈉溶液（磷酸調pH4、pH3、pH2.2）對比分析，甲醇為溶劑，維生素C不穩定，峰形差，對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏峰拖尾。不同pH值的0.5%焦亞硫酸氫鈉溶液對上述三成分的色譜分析有明顯影響，pH2.2時對乙酰氨基酚與馬來酸氯苯那敏峰形最佳，維生素C嚴重拖尾現象得到改善。結果表明，此方法干擾少，具有專屬性、穩定性高、重現性好，操作簡便，可作為控制本品質量的手段之一。

參考文獻

[1] 高光偉，馮向東，黃海欣.HPLC同時測定維C銀翹片中綠原酸、對乙酰氨基酚、維生素C、馬來酸氯苯那敏的含量[J].中成藥，2008，30（2）：207-210.

[2] 陳雯，于玲，周偉，等.HPLC同時測定復方銀翹氨敏膠囊中對乙酰氨基酚與維生素C的含量[J].中國藥事，2010，24（9）：898-900.