張改平

(河南農業大學 牧醫工程學院 河南 鄭州 450002)

動物免疫潛力與新概念疫苗

張改平

(河南農業大學 牧醫工程學院 河南 鄭州 450002)

當前疫苗研究已由利用微生物培養技術生產常規疫苗，利用基因工程技術生產基因工程疫苗的傳統疫苗學，發展到利用基因組學、蛋白質組學和結構生物學，研發分子疫苗或結構疫苗的反向疫苗學和結構疫苗學.針對動物免疫壓力過大的突出問題，提出“動物免疫潛力”新概念，建立新概念疫苗理論體系，并致力于動物疫病新概念疫苗研究.

動物疫病； 免疫潛力； 新概念疫苗

0 引言

疫苗免疫是動物疫病防控的重要手段之一，科學、合理使用疫苗保障了國家疫病防控政策的有效實施.常規疫苗在當前的動物疫苗市場仍然占主導地位，在動物傳染病的防控過程中發揮了重要作用.目前我國常規疫苗種類繁雜、生產廠家眾多，疫苗質量沒保障，良莠不齊.主要問題有：疫苗有效抗原成分低(雜質多、未純化)、疫苗產品缺少質控標準(生產和檢驗工藝難以標準化)、疫苗使用成本較高(需低溫貯藏和運輸)、用傳統工藝生產的滅活疫苗和減毒活疫苗存在生物安全風險(滅活不徹底、毒株返強或重組)等突出問題[1-2].為此，革命性升級疫苗產品，研制安全、高效、微量、精準的新型疫苗，實現疫苗的更新換代，是動物疫病防控的有效措施，是畜牧業高效發展的保障.

1 疫苗研究發展歷程

圖1 主要疫苗研發技術發展進程[15]Fig.1 Development of major vaccine research and preparation technologies[15]

疫苗(Vaccines)的概念最早來源于英國醫生愛德華·琴納(Edward Jenner)，他發明了牛痘接種預防天花，被稱為“疫苗之父”；另一位疫苗學先驅是法國的路易斯·巴斯德(Louis Pasteur)，他創建了炭疽減毒活疫苗和狂犬病活病毒疫苗，其后霍亂和傷寒滅活菌苗以及類毒素(白喉和破傷風)亞單位疫苗得以發展，形成以減毒活疫苗和滅活疫苗為主的常規疫苗[3].減毒活疫苗經歷了從使用動物病毒到物理致弱、動物或雞胚傳代和細胞培養傳代致弱的發展過程，滅活疫苗則從全菌或病毒滅活向類毒素、菌體提取物、純化多糖和蛋白質發展[4].隨著分子生物學、生物化學、生物信息學和結構生物學的發展，新型疫苗研究已由傳統的常規疫苗和基因工程疫苗向結構疫苗和靶向疫苗發展.人們根據疫苗發展進程將疫苗學分為3個階段：一是傳統疫苗學(conventional vaccinology)，包括常規疫苗和基因工程疫苗，即利用微生物培養技術生產常規疫苗和利用基因工程技術生產基因工程疫苗，該技術已成功應用于多種疫苗研發，但對難以培養或缺乏優勢保護性抗原的微生物疫苗尚無有效解決方案；二是反向疫苗學(reverse vaccinology)，即利用基因組學和泛基因組學技術更高效地選擇候選疫苗，該技術最早應用基于對B型腦膜炎球菌的基因組學分析，隨后泛基因組學、比較基因組學和消減基因組學與蛋白質組學、分子流行病學和結構生物學結合應用于疫苗靶抗原的精確選擇，并且鑒定了腦膜炎球菌H因子結合蛋白等新的毒力因子；三是結構疫苗學(structural vaccinology)，將組學技術與結構生物學有機結合，利用高解析度的結構信息，對保護性抗原進行重新設計和優化，去除無關成分而保留保護性表位，進而研制更高效、廣譜、安全、穩定的新型疫苗，深入了解抗原免疫原性和免疫優勢的結構基礎有助提高疫苗免疫效率和范圍[5-8].在結構疫苗研究方面，Jardine等根據人免疫缺陷病毒(HIV)廣譜中和抗體(bNAbs)VRC01與gp120的晶體結構設計了靶向種系抗體的eOD-GT6抗原，其具有與多重VRC01抗體及其種系前體的結合構象，將eOD-GT6免疫原與自組裝蛋白連接形成病毒樣顆粒，可激活種系和成熟B細胞產生中和性抗體[9-11].Nuccitelli等將不同菌株B型鏈球菌BP-2a蛋白D3結構域串聯形成嵌合免疫原，誘導產生針對6個菌株的廣譜免疫保護[11].Kanekiyo等將流感病毒HA蛋白與幽門螺桿菌鐵蛋白融合，形成自組裝納米疫苗，誘導產生H1N1的廣譜中和性抗體[12].Correia等證明利用計算機設計的呼吸道合胞病毒中和表位多肽可以維持天然蛋白的表位空間構象，并誘導產生強的中和性抗體，其與天然蛋白的結合構象與原始單抗極為相似[13].Liu等設計合成靶向淋巴結的CpG-DNA/多肽分子疫苗，疫苗可在淋巴結富集并能激活T細胞反應，增強抗腫瘤效應[14].圖1是當前主要疫苗研發技術從科學發現到技術轉化和產品研發所需要的發展進程，分別表示相關技術從科學發現到研發技術成熟和尚待發展的時間[15]，提示疫苗研究進入新的發展階段，同時也面臨巨大挑戰.

2 動物免疫潛力的概念

當前動物疫苗種類繁多，而且動物免疫次數多、免疫劑量大，使動物機體免疫系統承受壓力過大，從而導致免疫保護效果欠佳.針對這一突出問題，我們提出“動物免疫潛力”的新概念：認為動物擁有巨大的免疫潛力，同時這種免疫潛力又是有限的[2].在正常情況下，動物機體生理能力是用于生產的，若過多用于免疫，就會影響生產，所以使用疫苗的種類和次數不能超出動物的免疫潛力.假如一個動物的免疫潛力是1 000點，在正常情況下，預防一種傳染病只需50～100點，理論上推算至少可以預防100種這個動物的傳染病，其免疫潛力很大，足以滿足動物疫病防控的需要.但由于傳統工藝生產的疫苗過于混亂、與免疫無關的雜質太多，導致理論上用100點的免疫潛力就可以預防的一種動物傳染病，在實際中卻要消耗3 000點免疫潛力才可以達到免疫保護的目的，從而導致該動物10 000點的免疫能力并不能預防100種傳染病，而是只能預防3種，這不是疫苗免疫本身有問題，而是加載的無效疫苗成分太多，無謂地消耗了大量的動物免疫潛力.因此，在生產實踐中常出現因免疫過度而導致免疫效果差的現象，就會出現類似1+2=3，而3+2<3的結果.

3 新概念疫苗研究

在我國現有的動物飼養管理條件下，在養殖過程中實現完全的疫病凈化非常困難，用疫苗防控動物疫病仍是必需的手段，但當前的動物疫苗產品中存在過多的無效成分，極大浪費了動物的生理能力和免疫能力，致使疫苗免疫效果差、疫病防控不力.因此，應針對這一問題，開展全新的新概念疫苗研究，來實現節省動物的免疫能力，同時提高免疫保護效果的目的，讓3+2=5 而不是3+2=0.

人們常說的新概念疫苗多以新技術命名，如基因工程疫苗、基因疫苗、亞單位疫苗、病毒空殼疫苗等.我們根據“動物免疫潛力”新概念建立了以動物實際需求進行分子疫苗設計的“新概念疫苗”理論，其基本原則是精確、微量、純化、安全、高效，不浪費動物免疫力.具體內容為：(1) 精確：包括抗原位點、表位結構和免疫啟動的精確設計和激活；(2) 微量：要求抗原量在微克級即可產生有效保護；(3) 純化：高純度，雜質極少；(4) 安全：實現真正的生物安全(不含基因)，無病原擴散；(5) 高效：多種疫苗聯合使用，占用動物極少的免疫潛力但能實現有效保護.實現了疫苗真正意義的高效(聯合使用)，其核心就是不浪費動物免疫能力.理想的新概念疫苗應該具備6個特點：(1) T、B淋巴細胞協調工作；(2) 高度安全；(3) 真正高效；(4) 容易保存；(5) 精確、微量、純化、不浪費免疫能力；(6) 低成本工廠化合成生產.

我們研究團隊致力于動物病毒新概念疫苗研究，系統開展了動物病毒的免疫識別研究，發現了雞傳染性法氏囊病病毒、雞新城疫病毒、禽流感病毒和豬瘟病毒等主要動物病毒蛋白的系列B細胞抗原表位，并在GenBank注冊B細胞抗原表位序列12 個，繪制了主要動物病毒蛋白的B細胞表位圖譜；同時也開展了動物MHCI與CTL表位、動物MHCII與Th表位研究，并分析其免疫識別規律和免疫保護效力，為新概念疫苗研究奠定了基礎[16-21].

新概念疫苗的研究策略見圖2，包括疫苗的分子設計、疫苗抗原的重組表達、結構化疫苗裝配和通用佐劑等.新概念疫苗設計要從B細胞的識別與抗體反應、T細胞的識別與CTL反應、中和抗體與非中和抗體反應，以及免疫佐劑(Th反應的通用性和Toll樣受體的作用)等因素綜合考慮.根據動物病毒抗原表位的結構和識別規律，設計系列T/B細胞疫苗和免疫佐劑，并利用多種表達系統對設計抗原進行高效表達和鑒定.我們利用大腸桿菌表達系統，表達了雞傳染性法氏囊病毒(IBDV)和豬圓環病毒2型(PCV2)的結構抗原，并制備了病毒樣顆粒，取得良好免疫效果[22].同時，與西北農林科技大學合作開展結構抗原的乳腺生物反應器研究，相關抗原基因完成核移植，并獲得妊娠母羊；與武漢大學合作開展結構抗原的轉基因水稻表達研究，構建了雞新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、CSFV和FMDV等病毒結構抗原的植物表達質粒，通過農桿菌介導的遺傳轉化，陽性轉化植株通過篩選和分化，培育成轉基因水稻植株，并純化了水稻表達蛋白.在獲得重組蛋白單體的基礎上，探索開展結構化疫苗的研制，包括嵌合VLP、多聚蛋白體和納米疫苗等，通過自組裝、分子識別或化學連接制備嵌合VLP，在VLP表面展示多價抗原；利用氨基、羧基、巰基等不同的功能基團通過同源或異源蛋白交聯或定點、定向連接形成特定結構的多聚蛋白體；將靶抗原與各種納米顆粒偶聯制備多價納米疫苗，以期研制“精確、微量、純化、安全、高效”的新概念疫苗，建立新概念疫苗免疫評價技術體系，實現動物疫苗的更新換代，構建新型疫苗防控技術體系，為我國動物疫病防控提供新的技術支撐.

圖2 新概念疫苗研制策略Fig.2 New concept of vaccine development strategy

[1] 張改平.新概念疫苗研究[C]//中國畜牧獸醫學會學術年會. 廣州，2014:5.

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(責任編輯：王浩毅)

Animal Immune Potential and New Concept Vaccine

ZHANG Gaiping

(CollegeofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine,HenanAgriculturalUniversity,Zhengzhou450002,China)

Currently, vaccine research has been changed from conventional vaccinology, including preparation of conventional vaccines and genetically engineered vaccines by using microbial culture techniques and genetic engineering technique, to reverse vaccinology and structural vaccinology, including development of molecular vaccines and structural vaccines using genomics, proteomics and structural biology. In view of the prominent problem of animal immune stress, the new concept of animal immune potential was put forward. The theory system of new concept vaccine was established.And it was committed to the research of new concept vaccine of animal disease.

animal disease; immune potential; new concept vaccine

2017-04-26

國家自然科學基金重大項目(31490601)；河南省重大科技專項(141100110100).

張改平(1960—)，男，河南內黃人，中國工程院院士，教授，主要從事分子免疫學研究，E-mail: zhanggaiping2003@163.com.

S858

A

1671-6841(2017)03-0123-04

10.13705/j.issn.1671-6841.2017140