當歸多糖對雞抗氧化功能的影響

靳錄洋，徐小芳，谷新利

(1．新疆石河子工程技術學校，新疆 石河子 832000;2．石河子大學動物科技學院，新疆 石河子 832003)

當歸多糖對雞抗氧化功能的影響

靳錄洋1，徐小芳2，谷新利2

(1．新疆石河子工程技術學校，新疆 石河子 832000;2．石河子大學動物科技學院，新疆 石河子 832003)

為了觀察不同濃度的當歸多糖(ASP)對正常羅曼雛雞血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化物酶(CAT)、谷胱甘肽還原酶(GR)活性及丙二醛(MDA)含量的影響。將80只1日齡健康羅曼雛雞隨機分為4組，每組20只。分別于1日齡皮下注射生理鹽水以及不同濃度的ASP(12．5 mg/mL、25 mg/mL、50 mg/mL)，0．2 mL/只，連續注射7 d，分別在第7、14、21、28、35、42天采血，測定血清中SOD、GSH－Px、CAT、GR的活性及MDA含量。試驗結果表明，使用ASP后，血清SOD、GSHPx、CAT、GR活性均表現顯著升高(P＜0．05)，MDA含量均表現顯著降低(P＜0．05)。結論是ASP可提高雞的抗氧化能力。

ASP;抗氧化;雞

正常情況下自由基的產生和消除保持著動態平衡，任何增強氧化作用和(或)降低抗氧化能力的因素均可打破這一平衡，致氧自由基增加［1］。機體抗氧化作用增強，可以減少自由基對機體生物膜完整性的破壞，從而提高機體免疫力和抗病能力［2］。現代藥理實驗研究表明，當歸多糖具有調節免疫［3］、影響造血系統［4］、抗病毒［5］、抗腫瘤［6］和抗氧化［7］等多種功能。本試驗從當歸中提取當歸多糖，以探討當歸多糖在不同濃度、不同時間的抗氧化作用，為研究開發新藥提供依據。

1 材料與方法

1.1 中藥 當歸購自石河子市醫藥公司，粉碎，過40目篩，備用。

1.2 試劑 無水葡萄糖(天津市天達凈化材料精細化工廠);苯酚(天津市化學試劑三廠);乙醇(天津市化學試劑二廠);濃硫酸(烏魯木齊化學試劑廠)，以上試劑均為AR級。血清中超氧化物歧化酶(批號:20070123);谷胱甘肽過氧化物酶(批號: 20070124);過氧化氫酶(批號:20070127);谷胱甘肽還原酶(批號:20070127);丙二醛(批號:20070127)。

1.3 儀器 CQ－250型超聲波提取儀(上海躍進醫用光學器械廠);RE－52旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠);BS2202S電子天平(北京塞多利斯儀器系統有限公司);SHB－B95A型循環水式多用真空泵(鄭州長城科工貿有限公司);722S可見光分光光度計(上海棱光技術有限公司);DK－S28型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏實驗設備有限公司);XW－80A旋渦混合器(寧波新芝生物科技股份有限公司); TDL－5臺式離心機(上海安亭科學儀器廠);GZX-9240MBE電熱恒溫鼓風干燥箱(上海博迅實業有限公司醫療設備廠);YXQ－LS－30S11立式壓力蒸汽滅菌器(上海博迅實業有限公司醫療設備廠)。

1.4 中藥多糖的提取 稱取當歸200．0 g，粉碎，加入20倍蒸餾水，浸泡12 h后在超聲波提取儀中超聲提取30 min，過濾。濾渣中加入適量蒸餾水，再超聲提取30 min，過濾。濾渣中加入適量蒸餾水，再超聲提取30 min，過濾后合并3次濾液。將濾液離心4 800 r/min離心10 min，取上清液;上清液于旋轉蒸發儀中，60℃水浴蒸發濃縮;將水浴降溫至10℃，關抽氣泵，放冷凝水，儀器冷卻后關開關;倒出濃縮物，用蒸餾水涮洗濃縮瓶，一起倒入大燒杯中;緩慢加入95%乙醇，并不停攪拌，防止出現片狀沉淀(約4～5倍乙醇)，放入冰箱內4℃靜置過夜;次日再用95%乙醇二次醇沉，放入冰箱內4℃靜置過夜;次日將沉淀抽濾，后放入真空干燥箱中干燥，稱重，得當歸多糖29．775 g(多糖含量27．73%)。

1.5 中藥多糖含量測定

1.5.1 葡萄糖標準溶液的配制 精密稱取無水葡萄糖12．1 mg加蒸餾水溶解，定容于100 mL容量瓶中，配成0．121 mg/mL葡萄糖標準溶液，備用。

1.5.2 5%苯酚溶液的配制 稱取苯酚5g加蒸餾水溶解，定容于100 mL容量瓶中，配成5%苯酚溶液，備用。

1.5.3 標準曲線的繪制 精密吸取葡萄糖標準溶液0．2、0．4、0．5、0．6、0．75 mL置于20 mL的干燥試管中，依次加蒸餾水使體積均為1．0 mL，另取1．0 mL蒸餾水作空白對照。向各管再分別加入5%苯酚溶液2．0 mL，搖勻，迅速滴加濃H2SO45．5 mL，充分搖勻，放入60℃水浴，30 min，在分光光度計上讀取波長為490 nm的吸光度值，繪制標準曲線，數據處理得回歸方程:A=0．008 6C+0．005 4(R2= 0.999 5)。

1.5.4 提取物的含量測定 精密稱取干燥至恒重的多糖12．1 mg，置于100 mL容量瓶中，加少量蒸餾水溶解并稀釋至刻度，配成0．121 mg/mL多糖溶液，備用。精密吸取樣液1 mL，另取1．0 mL蒸餾水作空白對照。向各管再分別加入5%苯酚溶液2．0 mL，搖勻，迅速滴加濃H2SO45．5mL，充分搖勻，放入60℃水浴，30 min，在分光光度計上讀取波長為490 nm的吸光度值。當歸多糖的吸光度為0．294，將多糖的吸光度依次帶入回歸方程:A=0．008 6C+0.005 4得C，再用C/0．121，得當歸多糖含量27.73%。

1.6 試驗用雞及設計 試驗中注射劑量均指經過換算實際進入雛雞體內純多糖的含量。多糖注射前用蒸餾水溶解，配成溶液，115℃，30 min高壓滅菌，備用。

試驗雞由石河子市養雞場提供，臨床檢查健康。80只1日齡健康羅曼雛雞隨機分為4組，每組20只。1日齡開始用藥。方案如下:

Ⅰ組: 皮下注射生理鹽水0．2 mL/只，連續注射7 d。

Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組: 皮下注射ASP濃度分別為12．5 mg/mL、25 mg/mL、50 mg/mL，0．2 mL/只，連續注射7 d。

1.7 飼養管理 購自新疆天康飼料廠的飼料常規飼養，4組雞的飼養方法、飼養條件、環境、飼料品質及飼養管理均一致。

1.8 檢測項目及方法 血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽還原酶、丙二醛測定均采用南京建成生物技術有限公司生產的試劑盒。

各組雞分別在第7、14、21、28、35、42天采血(每組隨機抽取10只)，測定血清中SOD、GSH－Px、CAT、GR的活性及MDA含量(均按照其說明書進行操作)。

1.9 數據處理 數據用SPSS13．0軟件統計，以平均數±標準誤(Mean±SE)表示，顯著性分析采用方差分析和多重比較。

2 結果與分析

2.1 ASP對SOD活性的影響 表1表明，皮下注射ASP，多糖組都能不同程度的提高血清中SOD的活性，第7、14、21、28天都有不同程度的提高，之后逐漸降低。Ⅱ組與Ⅰ組相比，在第7天時差異不顯著，第21、35、42天時差異顯著(P＜0．05)，第14、28天時差異極顯著(P＜0．01);Ⅲ組與Ⅰ組相比，在第7天時差異顯著(P＜0．05)，第14、21、28、35、42天時差異極顯著(P＜0．01);Ⅳ組與Ⅰ組相比，在第7天時差異不顯著，第14、28、35、42天時差異顯著(P＜0．05)，第21天時差異極顯著(P＜0．01)。

表1 不同濃度的多糖對SOD活性的影響

2.2 ASP對MDA含量的影響 表2表明，皮下注射ASP，多糖組都能不同程度的降低血清中MDA的含量，第7、14、21、28天都有不同程度的降低，之后逐漸增大。Ⅱ組與Ⅰ組相比，在第21、28天時差異顯著(P＜0．05)，第7、14、35、42天時差異不顯著(P＞0．05);Ⅲ組與Ⅰ組相比，在第7、35、42天時差異顯著(P＜0．05)，第14、21、28天時差異極顯著(P＜0．01);Ⅳ組與Ⅰ組相比，在第14、21、28天時差異顯著(P＜0．05)，第7、35、42天時差異不顯著(P＞0．05)。2.3 ASP對GSH－Px活性的影響 表3表明，皮下注射ASP，多糖組都能不同程度的提高血清中GSH－Px的活性，第7、14、21、28天都有不同程度的提高，之后逐漸降低。Ⅱ組與Ⅰ組相比，在第35、42天時差異不顯著(P＞0．05)，第7、14天時差異顯著(P＜0.05)，第21、28天時差異極顯著(P＜0.01);Ⅲ組與Ⅰ組相比，在第42天時差異顯著(P＜0．05)，第7、14、21、28、35天時差異極顯著(P＜0．01);Ⅳ組與Ⅰ組相比，在第7、14、35、42天時差異不顯著(P＞0．05)，第21、28天時差異極顯著(P＜0．01)。

表2 不同濃度的多糖對MDA活性的影響

表3 不同濃度的多糖對GSH－Px活性的影響

2.4 ASP對CAT活性的影響 表4表明，皮下注射ASP，多糖組都能不同程度的提高血清中CAT的活性，第7、14、21、28天都有不同程度的提高，之后逐漸降低。Ⅱ、Ⅳ組與Ⅰ組相比，在第42天時差異不顯著(P＞0．05)，第7、14、35天時差異顯著(P＜0．05)，第21、28天時差異極顯著(P＜0．01);Ⅲ組與Ⅰ組相比，在第7、42天時差異顯著(P＜0．05)，第14、21、28、35天時差異極顯著(P＜0．01)。

表4 不同濃度的多糖對CAT活性的影響

2.5 ASP對GR活性的影響 表5表明，皮下注射ASP，多糖組都能不同程度的提高血清中GR的活性，第7、14、21、28天都有不同程度的提高，之后逐漸降低。Ⅱ組與Ⅰ組相比，在第7、14、21、35、42天時差異顯著(P＜0．05)，第28天時差異極顯著(P＜ 0．01);Ⅲ組與Ⅰ組相比，在第14、21、28、35、42天時差異極顯著(P＜0．01)，第7天時差異不顯著(P＞0．05);Ⅳ組與Ⅰ組相比，在第7天時差異不顯著(P＞0．05)，第14、35、42天時差異顯著(P＜0．05)，第21、28天時差異極顯著(P＜0．01)。

表5 不同濃度的多糖對GR活性的影響

3 討論

3.1 皮下注射不同濃度的ASP后，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組血清中SOD、GR、GSH－Px、CAT的活性均表現升高，在第28天時達到峰值，之后逐漸下降，而MDA的含量均表現降低，在第28天時降到最低，之后逐漸升高。本試驗結果表明，ASP能明顯提高雞血清中SOD、GR、GSH－Px、CAT活性，并能明顯降低雞血清中MDA含量。劉少平［8］等研究結果與本試驗結果一致。提示ASP具有抗氧化活性。

3.2 濃度之所以是一個重要因素，是因為清除自由基速率是由其濃度和速率常數決定的。抗氧化劑的活性在生物體內和體外常常有很大區別，造成這種差別的重要原因之一是抗氧化劑和底物在生物膜中所處的微環境與體外不同。決定抗氧化能力的另一主要因素是抗氧化劑引發自由基產生。當抗氧化劑清除自由基時，轉換成其他自由基，也可能會發生某些化學反應，這些反應決定了整個體系的抗氧化能力，有時高濃度的抗氧化劑還會起到促氧化作用［9］。本試驗結果表明，皮下注射不同濃度的ASP后，血清中SOD、CAT、GSH－Px、GR的活性以及MDA的含量表現均以濃度為25 mg/mL組最優，而濃度為50 mg/mL組與12．5 mg/mL組相比其活性時高時低。提示ASP的抗氧化活性不是劑量越大越好，其機理有待于進一步研究。

3.3 本試驗結果表明，皮下注射不同濃度的ASP后，血清中SOD、GSH－Px、GR、CAT活性在第7、14、21、28天時逐漸升高，之后逐漸下降;血清中MDA含量在第7、14、21、28天時逐漸降低，之后逐漸升高。提示當歸多糖體內作用時間與其抗氧化活性具有一定相關性，但其作用機理有待于進一步研究。

3.4 皮下注射不同濃度的ASP后，在第42天時，血清中GSH－Px、CAT活性以及MDA含量與對照組相比，濃度為12．5 mg/mL、50 mg/mL組差異不顯著。提示在測定血清中GSH－Px、CAT活性以及MDA含量時，濃度為12．5 mg/mL、50 mg/mL組在第42天已經恢復到正常值。

3.5 本試驗結果表明，皮下注射不同濃度的ASP后，血清中SOD、GR的活性在第42天時，與對照組相比，濃度為12．5 mg/mL、50 mg/mL組差異顯著(P＜0．05)，濃度為25 mg/mL組差異極顯著(P＜0．01)，提示血清中SOD、GR活性的測定時間需要延長;血清中GSH－Px、CAT的活性以及MDA的含量在第42天時，與對照組相比，濃度為25 mg/mL組差異顯著(P＜0．05)，提示測定血清中GSHPx、CAT活性以及降低 MDA含量時，濃度為25 mg/mL組測定時間需要延長。

4 結論

ASP能使血清中總超氧化物歧化酶(TSOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－Px)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽還原酶(GR)的活性明顯升高，使丙二醛(MDA)的含量明顯降低。提示ASP作為天然抗氧化劑，具有很好的研究價值與應用前景。

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S853.72

B

0529-6005(2017)06-0076-04

2016-12-15

新疆生產建設兵團博士基金(2007JC09)

靳錄洋(1979-)，男，講師，本科，主要從事臨床獸醫診療技術研究，E-mail:450562450@qq．com