舍飼綿羊尿結(jié)石的中藥預(yù)防效果研究

任 杰，韓一超，武果桃，衛(wèi)順生，孟冬霞，孟 帆，劉文俊，趙 娟，閆益波，徐 芳

(山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山西 太原 030032)

舍飼綿羊尿結(jié)石的中藥預(yù)防效果研究

任 杰，韓一超，武果桃，衛(wèi)順生，孟冬霞，孟 帆，劉文俊，趙 娟，閆益波，徐 芳

(山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山西 太原 030032)

為研究兩組復(fù)方中藥對(duì)舍飼綿羊尿結(jié)石預(yù)防效果，試驗(yàn)觀察各組腎臟，膀胱超微結(jié)構(gòu)，同時(shí)測(cè)定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血清和尿液中相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果顯示，兩中藥配方均能修復(fù)保護(hù)腎臟和膀胱的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，促進(jìn)肌酐、尿素氮排泄，降低了尿液pH值，以及減少尿液中磷的排泄和提高機(jī)體過氧化酶活性。表明兩組復(fù)方中藥均能對(duì)尿結(jié)石的發(fā)生起到預(yù)防作用。

舍飼綿羊;尿結(jié)石;復(fù)方中藥;腎;膀胱;過氧化物酶

舍飼綿羊在育肥過程中攝入大量高蛋白飼料，經(jīng)腎臟的代謝和重吸收后，各種代謝產(chǎn)物在血液、尿液中堆積，損傷泌尿系統(tǒng)，最終過飽和尿液形成結(jié)石阻塞尿路，繼發(fā)尿毒癥，最后常因膀胱破裂而死亡［1］。在綿羊尿石癥的形成過程中，血液、尿液中的一些生化指標(biāo)與腎臟某些功能的改變及結(jié)石的生成存在著互動(dòng)關(guān)系［2］，本試驗(yàn)探討利用復(fù)方中藥對(duì)綿羊腎臟、膀胱細(xì)胞損傷修復(fù)和保護(hù)來減少代謝紊亂對(duì)機(jī)體的傷害，同時(shí)對(duì)血液，尿液中代謝產(chǎn)物以及鈣、磷、鎂的整體調(diào)節(jié)，減少舍飼綿羊尿結(jié)石的發(fā)生，為尿石癥的中藥預(yù)防提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)中藥 金錢草、瞿麥、海金沙、扁蓄、車前子、牛膝等。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 體重25 kg左右育肥綿羊90只隨機(jī)平均分成對(duì)照組、配方1組、配方2組，試驗(yàn)共進(jìn)行24 d。

1.3 樣本采集

1.3.1 血液采集 試驗(yàn)結(jié)束后每組隨機(jī)選擇5只綿羊取樣，剖殺前由頸靜脈采血室溫下靜置分離血清置－20℃保存待測(cè)。

1.3.2 尿液采集 剖殺后用注射針自膀胱抽取尿液，1 000 r/min離心 10 min，取 8 mL尿液上清，－20℃凍存?zhèn)錅y(cè)。

1.3.3 腎臟、膀胱組織超薄切片取樣 綿羊剖殺后30 s內(nèi)迅速把組織切為1 mm3的小塊放入緩沖液中靜置2 h后，轉(zhuǎn)入固定液4℃保存。

1.4 測(cè)定方法和項(xiàng)目 血清、尿液用ILAB型全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行分析。測(cè)定尿素氮、肌酐、鈣、磷、鎂。新鮮尿液pH值用pH計(jì)(PHB-1，上海宇隆儀器有限公司)測(cè)定。過氧化物酶(SOD)用SOD試劑盒(南京建成生物工程研究所)測(cè)定。腎臟、膀胱超微切片由山西醫(yī)科大學(xué)制作。

1．5 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，應(yīng)用SPPS18統(tǒng)計(jì)分析軟件均值比較—單因素方差分析程序(ANOVA)分析和Duncan's多重比較檢驗(yàn)其差異顯著性。

2 結(jié)果

2.1 綿羊血清生化指標(biāo)測(cè)定 結(jié)果見表1。血清中尿素氮、肌酐對(duì)照組極顯著高于配方1組和配方2組(P＜0.01)，兩中藥組差異不顯著(P＞0.05)，過氧化物酶對(duì)照組極顯著低于配方1組和配方2組 (P＜0.01)，兩中藥組差異不顯著(P＞0.05)，鈣、磷、鎂三組含量差異都不顯著(P＞0.05)。

2.2 綿羊尿液生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果見表2 尿液中對(duì)照組尿素氮含量顯著低于配方1組、配方2組(P＜0.05)，兩中藥組差異不顯著(P＞0.05)。雖然兩中藥組肌酐含量明顯大于對(duì)照組但三組差異不顯著(P＞0.05)。鈣、鎂三組中差異都不顯著(P＞0.05)。對(duì)照組中的磷極顯著高于兩中藥組(P＜0.01)，兩中藥組差異不顯著(P＞0.05)。對(duì)照組中pH值極顯著高于兩中藥組(P＜0.01)，兩中藥組差異不顯著(P＞0.05)。

表1 綿羊血清生化指標(biāo)

表2 綿羊尿液生化指標(biāo)

2.3 腎臟、膀胱超微結(jié)構(gòu) 見圖1。對(duì)照組腎臟超微結(jié)構(gòu)A1、A2中細(xì)胞核變形嚴(yán)重，大部分核膜破裂，核內(nèi)容物外泄。多數(shù)線粒體嵴斷裂，雙層膜破裂，線粒體空泡化嚴(yán)重。微絨毛脫落嚴(yán)重，排列混亂。配方1組腎臟超微結(jié)構(gòu)B1、B2中細(xì)胞核變形，核膜部分破裂，核內(nèi)容物外泄，少數(shù)線粒體腫脹，個(gè)別空泡化。微絨毛部分脫落，排列比較整齊。配方2組腎臟超微結(jié)構(gòu)C1、C2中細(xì)胞核變形，核膜腫脹，多數(shù)線粒體完整，個(gè)別線粒體腫脹。可見微絨毛個(gè)別部分脫落，排列整齊。對(duì)照組膀胱超微結(jié)構(gòu)D中細(xì)胞核核膜破裂，核內(nèi)容物外泄。多數(shù)線粒體嵴斷裂，雙層膜破裂，溶酶體增多。配方1組膀胱超微結(jié)構(gòu)E中細(xì)胞核變形，核膜部分破裂，核仁溶解。少數(shù)線粒體腫脹。配方2組膀胱超微結(jié)構(gòu)F中核膜腫脹，核仁完整。多數(shù)線粒體完整，個(gè)別線粒體腫脹、空泡化。

3 討論

舍飼綿羊在育肥中后期大量的代謝產(chǎn)物在機(jī)體蓄積，如不能正常的排出體外，逐漸侵犯并激發(fā)了固有的正常腎組織發(fā)生病變，從而形成了腎臟器質(zhì)損傷，其排泄廢物的功能降低以及重吸收障礙。最終造成尿液離子過飽和與pH值升高，極易形成磷酸鹽結(jié)石。同時(shí)過飽和尿液對(duì)膀胱造成一定損傷。器官發(fā)生損傷時(shí)，細(xì)胞中各種細(xì)胞器均有不同程度的變化，其中線粒體是細(xì)胞中代謝的主要細(xì)胞器，其發(fā)生變化較明顯［3］。而過氧化物酶(SOD)能清除超氧陰離子，保護(hù)細(xì)胞免受損傷，是臟器受損的一個(gè)衡量指標(biāo)［4］。尿素氮、肌酐是反映腎功能的主要指標(biāo)，在正常情況下主要通過腎小球?yàn)V過，在腎小管幾乎不被重吸收而排出體外。腎臟器質(zhì)損傷后濾過功能明顯降低，出現(xiàn)血內(nèi)肌酐、尿素氮升高，尿中肌酐、尿素氮下降。腎臟功能的這些異常變化會(huì)導(dǎo)致重吸收障礙，以及尿液酸堿平衡的失調(diào)。重吸收障礙可能引起腎小管管腔內(nèi)HPO42－的升高和腎小管上皮泌氫功能障礙，導(dǎo)致尿液pH值的升高。而磷酸鹽結(jié)石是在尿液中存在大量的HPO42－和pH值升高的條件下形成［5］。

圖1 腎臟，膀胱超微結(jié)構(gòu)圖

本試驗(yàn)根據(jù)育肥綿羊生理特點(diǎn)以及中獸醫(yī)理論，選用金錢草、瞿麥、海金沙、扁蓄、車前子、牛膝等分別組成配方1和配方2［6］。方劑中金錢草具有清熱利濕、通淋、消腫之功效，是治療尿路結(jié)石的常用中草藥，化學(xué)成分主要為黃酮類化合物［7］，并證實(shí)具有良好的抗氧化性能力［8－9］。本試驗(yàn)兩配方中藥均以金錢草為君藥，中藥瞿麥、滑石、車前子、牛膝利尿通淋為臣藥結(jié)合使用，有效提高了血清中SOD活性，說明兩中藥配方能提高機(jī)體的抗氧化酶活性和抗氧化能力，對(duì)腎的損傷有一定的保護(hù)作用［10］。腎臟結(jié)構(gòu)和功能恢復(fù)后，促進(jìn)了血液中肌酐、尿素氮的代謝。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，兩中藥配方組均降低了血液中肌酐、尿素氮的含量同時(shí)促進(jìn)了尿液中肌酐、尿素氮的代謝。而尿結(jié)石成分鈣、磷、鎂的代謝，在試驗(yàn)結(jié)果顯示，三試驗(yàn)組中鈣、鎂在血清和尿液中含量無差異，說明在腎慮過功能和重吸收受到損傷的一定時(shí)期內(nèi)，血液中的鈣、鎂含量受到其他因素調(diào)節(jié)保持代謝平衡。草食動(dòng)物吸收的磷主要是通過糞便排出，通過尿液排出量較少，本試驗(yàn)中藥配方使得尿液中磷含量降低說明腎臟重吸收功能恢復(fù)，但血清無機(jī)磷與對(duì)照組無差異，推測(cè)多量的磷通過糞便排出體外。另外試驗(yàn)中尿液pH值降低說明腎小管泌氫功能恢復(fù)。以上綜合因素使得磷酸鹽結(jié)石的形成概率降低。

4 結(jié)論

兩中藥配方能明顯保護(hù)和修復(fù)腎臟、膀胱的細(xì)胞結(jié)構(gòu);促進(jìn)尿素氮、肌酐代謝產(chǎn)物的排泄;能提高機(jī)體的抗氧化酶活性，減輕機(jī)體的氧化損傷;同時(shí)通過降低尿液pH值和減少尿液磷的排泄，防止磷酸鹽結(jié)石的聚集，從而達(dá)到預(yù)防舍飼綿羊育肥階段結(jié)石形成的效果。

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Effect of compound traditional Chinese medicine on prevention of urinary stones in drylot feeding sheep

REN Jie，HAN Yi-chao，WU Guo-tao，WEI Shun-sheng，MENG Dong-xia，MENG Fan，LIU Wen-jun，ZHAO Juan，YAN Yi-bo，XU Fang

(Shanxi Academy of animal husbandry and Veterinary Research Institute，Taiyuan 030032，China)

To study the preventive effect traditional Chinese medicine(TCM)recipes on urinary stones in drylot feeding sheep，the ultrastructure of kidney and bladder were observed and the related indexes of serum and urine were measured．The results showed that both Chinese medicine recipes repaired the cell structure of kidney and bladder，promoted the excretion of creatinine and urea nitrogen，decrease the pH value of urine and reduce the excretion of phosphorus in urine and improve the activity of SOD．The results suggest that the two traditional Chinese medicine recipes can prevent the occurrence of urinary stones．

drylot feeding sheep;urinary calculi;compound traditional Chinese medicine;kidney;bladder;SOD

WU Guo-tao

S826

A

0529-6005(2017)06-0073-03

2016-12-16

山西省科技攻關(guān)項(xiàng)目(20140311019－1)

任杰(1977-)，男，副研究員，碩士，從事中藥藥理方向研究，E-mail:xmsrenjie@163.com

武果桃，E-mail:461061469@qq.com