北京地區 25例犬吉氏巴貝斯蟲病例分析

鄭思艷，陳艷云，袁春燕，夏兆飛

(中國農業大學動物醫學院，北京 海淀 100193)

北京地區 25例犬吉氏巴貝斯蟲病例分析

鄭思艷，陳艷云，袁春燕，夏兆飛

(中國農業大學動物醫學院，北京 海淀 100193)

為調查北京地區犬吉氏巴貝斯蟲病的感染與治療情況，2014年10月至2016年1月期間，本試驗對中國農業大學動物醫院就診的25例犬吉氏巴貝斯蟲感染病例進行調查統計，記錄其臨床癥狀，分析全血細胞計數(Complete Blood Count，CBC)、生化檢測結果和三氮脒的治療效果。結果顯示，25例患犬均出現不同程度的貧血，73.3%(11/15)的患犬出現了免疫介導性溶血性貧血(Immune mediated hemolytic anemia，IMHA)，使用三氮脒和輸血療法治療后，71.2%(10/14)的患犬取得良好的療效，但目前跟蹤的病例中，21.4%(3/14)的患犬已復發。

犬;吉氏巴貝斯蟲;CBC;PCR檢查

犬巴貝斯蟲病，由巴貝斯蟲通過蜱媒傳播，寄生于脊椎動物血液紅細胞中的一種寄生蟲病［1－2］，常引起間歇性發熱、進行性貧血、血小板減少、脾腫大等臨床癥狀，嚴重感染導致死亡。該病在蜱流行區發病率較高，因此，東南亞、北美、南美等地廣泛流行［1－4］。我國已報道的犬巴貝斯蟲病多為吉氏巴貝斯蟲感染，偶見韋氏巴貝斯蟲感染，在我國江蘇、河南的部分地區呈地方性流行，隨著我國養犬業的快速發展，近年來有流行和暴發的趨勢，這對寵物犬構成嚴重的危害［5－7］，因此對本病的及早診斷和治療尤為重要。

1 試驗對象與試驗方法

1.1 試驗對象 2014年10月至2016年1月期間，從中國農業大學動物醫院就診病例中選取25例有蜱接觸史的患犬。

1.2 發病動物病例整理 記錄其年齡、品種、性別、臨床癥狀、實驗室檢驗(包括CBC和生化檢查)結果;對使用三氮脒治療的患犬，跟蹤其治療效果，監測分析其各項實驗室檢驗指標的變化。

1.3 PCR檢測

1.3.1 DNA提取 參照QIAamp DNA mini kit試劑盒說明書提取DNA。

1.3.2 PCR擴增 參照Muhlnickle C J等人設計的引物和反應體系［1］，擴增巴貝斯蟲的 18S rRNA基因。

1.3.3 電泳 將PCR反應結束后，取5μL產物置于1.0%瓊脂凝膠上電泳。電泳后，紫外燈下觀察結果。

1.3.4 PCR測序 將PCR產物送至奧美德諾公司測序，然后將測序結果與NCBI中的18S rRNA序列進行比對，同源性≥97%者判為吉氏巴貝斯蟲(B．gibsoni)。

2 結果

2.1 年齡、品種和性別分布 本次調查顯示，發病犬的年齡從7月齡至16歲不等，平均發病年齡為3.87±3.68歲，患犬多為公犬(16只，64%)，母犬8只(32%)，絕育犬1只(4%);患犬品種以雜種犬(4只，16%)、德國牧羊犬(4只，16%)、金毛尋回犬(3只，12%)居多，其他品種如拉布拉多尋回犬、雪納瑞犬、貴賓犬和西施犬等也有發病

2.2 臨床癥狀 24例患犬主要表現黏膜蒼白、精神沉郁、食欲減退、發熱、消瘦、嘔吐等癥狀，僅1例(4%)患犬就診時表現為明顯黃疸。見表1。

表1 臨床癥狀

2.3 實驗室檢驗結果

2.3.1 CBC檢查結果 患犬于初診時表現為紅細胞總數(2.68±1.48 ×1012/L)下降、紅細胞比容(18.53±7.88%)下降、血紅蛋白(6.83±3.76 g/ dL)下降、平均紅細胞體積(72.39±12.76 fL)輕度升高，網織紅細胞(214.92±193.17 K/μL)輕度升高;另外，白細胞總數(21.61±13.82 ×109/L)升高，血小板(83.67±102.06 K/μL)下降。見表2。

表2 患犬治療前后血液檢查結果

2.3.2 血清生化檢查結果 患犬于初診時總膽紅素(21.09±29.87μmol/L)和直接膽紅素(12.2± 21.59μmol/L)輕微升高;天門冬酰胺氨基轉移酶(80.57±34.59 U/L)和堿性磷酸酶(396.6± 253.48 U/L)升高;肌酐(201.56±470.17μmol/L)和尿素氮(27.02±34.16μmol/L)升高;肌酸激酶(597.5±948.04 U/L)和乳酸脫氫酶(485.43± 465.35 U/L)升高。見表3。

表3 患犬初診就診時生化檢查結果

2.3.3 PCR檢查結果 25只患犬中，23只(92%)血涂片鏡檢 B．gibsoni陽性，PCR檢查均為陽性(100%)。如圖1。

2.4 治療及監測 25例患犬中，其中僅有14例接受了三氮脒的治療，4例患犬因嚴重貧血同時進行輸血治療，有4例患犬的主人直接放棄治療，5例失聯;電話回訪結果顯示，接受治療的14例患犬中，10例(71.4%)于首期治療后病情得到控制，但目前有3例(21.4%)復發;4例(28.6%)因貧血及其他嚴重的并發癥死亡。

圖1 18S rRNA擴增結果(陰性條帶排除B．gibsoni)

3 討論

我國已報道的犬巴貝斯蟲病多為B．gibsoni感染，在我國江蘇、河南的部分地區呈地方性流行，對寵物犬構成嚴重危害［7］。本次調查在中國農業大學動物醫院(全年接診量約65 000例)完成，歷時14個月，期間僅有25例犬被診斷為B．gibsoni感染，整體發病率并不高。這一結果提示北京并非犬B．gibsoni高發區，和流行病學特征相符。雖然北京并非蜱流行區，但根據Jefferies等人于2007年的報道，咬傷也可能會導致蟲體經過直接的血液接觸傳播，這一途徑不需要傳播媒介，鑒于此，還應加強B．gibsoni流行病學的監控。

B．gibsoni感染的潛伏期從數天到數周不等，患犬主要表現精神沉郁、體重下降、黃疸、淤血等癥狀，實驗室檢驗多表現再生性貧血、肝酶升高等，嚴重血管內溶血的病例還會出現黃疸［8］。本次調查中，所有患犬均表現出不同程度的精神沉郁，96%的患犬有食欲不振和黏膜蒼白的癥狀，僅有一例有明顯黃疸;實驗室檢驗結果證實所有黏膜蒼白的病例均出現了嚴重貧血(3.24±2.18× 1012/L)，貧血程度和病程有一定關系，精神沉郁超過1周的患犬貧血極其嚴重，這可能跟病原體在紅細胞內進行胞內復制，引發血管內和血管外溶血性貧血有關。機體對抗蟲體的免疫介導反應和自身抗原的改變能加重溶血性貧血，巨噬細胞受刺激后能引起發熱和肝脾腫大。本次調查中，73.3%(11/15)的病例出現了IMHA，不但誘發了嚴重貧血，也會誘發骨髓代償作用，使外周血白細胞升高(伴有核左移);另外，本次調查中，患犬的血小板也明顯下降，由于這些患犬無明顯出血現象，排除了血小板消耗的因素，最有可能的原因是免疫介導性的。

該病主要依靠實驗室診斷，外周血血涂片見到病原體結合臨床癥狀即可確診，但隨著PCR技術和血清學檢查的應用，診斷率大大提高。本次調查中，25例患犬中23例血涂片檢查為陽性，但所有PCR檢查均為陽性，這一結果提示血涂片檢查有一定的漏診率，在臨床工作中，若高度懷疑該病，可通過PCR檢查輔助診斷。

目前尚無犬B．gibsoni感染的標準治療方案，主要治療原則為殺蟲和輔助治療(如輸血治療)［9］。亞洲一些國家地區普遍使用三氮脒(一線藥物，3 mg/kg體重，肌肉注射，每天一次，連用3 d)和阿托喹酮(atovaquone，13.3 mg/kg體重，口服，每天3次)［10］，國內主要使用 DIMINAPHEN granules(主要成分為三氮脒和安替比林，10 mg/kg體重，皮下注射/肌肉注射，隔天1次，連用3次)。阿托喹酮和阿奇霉素(10 mg/kg，口服，每天1次)聯合應用治療效果良好。報道顯示，三氮脒治療的患犬復發率較高，近年來一些病例使用阿托喹酮治療后也會復發，基因檢測證實病原體已出現CYTb基因(抗阿托喹酮的基因)突變［11］。本次調查中，14例患犬接受了DIMINAPHEN granules的治療，10例(71.4%)患犬于首期治療后癥狀得到緩解，1例于治療當天死亡;1例于治療半個月時死亡，另外2例治療20 d后仍未見好轉。這些預后不良的病例于初次診斷時已出現嚴重的IMHA，提示本病需及時診斷，在治療時還應注意加強對IMHA的控制。目前跟蹤回訪顯示，3例患犬已復發，復發時患犬均表現嚴重貧血。由于本次調查未涉及耐藥性研究，尚不清楚復發病例的病原對三氮脒的耐藥性，需要進一步研究。

4 結論

本次調查中，北京地區犬B．gibsoni發病率并不高;主要通過血涂片檢查診斷，但PCR檢查能提高檢出率;北京地區主要的特異性治療藥物為DIMINAPHEN granules，治療效果和并發的IMHA有很大關系;有些病例出現復發，需進一步進行耐藥性研究，以指導臨床工作。

［1］ Muhlnickel C J，Jefferies R，Morgan－Ryan，et al．Babesia gibsoni infection in three dogs in Victoria［J］．Aust Vet J，2002．80: 606-610．

［2］ Passos L M F，Geiger S M，Ribeiro M F B，et al．First molecular detection of Babesia vogeliin dogs from Brazil［J］．Veterinary Parasitology，2005，127(1):81-85．

［3］ Iguchi A，Shiranaga N，Matsuu A，et al．Efficacy of Malarone (R)in Dogs Naturally Infected with Babesia gibsoniL［J］．JOURNAL OF VETERINARY MEDICAL SCIENCE，2014，76 (9):1 291-1 295．

［4］ Jefferies R，Ryan U M，Jardine J，etal．Blood，Bull Terriers and Babesiosis:further evidence for direct transmission of Babesia gibsoni in dogs［J］．Aust Vet J，2007，85(11):459-463．

［5］ 權中會，魏莉，趙獻軍，等．西安地區犬吉氏巴貝斯蟲病的診斷與治療［J］．中國獸醫雜志，2012，48(4):64-65．

［6］ 徐孝宙．一例犬吉氏巴貝斯蟲病的診治［J］．黑龍江畜牧獸醫，2010(10):106．

［7］ 尚澤松，張才，張振芳，等．豫西地區犬巴貝斯蟲病及媒介流行病學特征［J］．河南科技大學學報(自然科學版)，2014 (4):73-76．

［8］ Imre M，Farkas R，Ilie M S，et al．Survey ofbabesiosis in symptomatic dogs from Romania:Occurrence of Babesia gibsoni associated with breed［J］．Ticks and Tick－borne Diseases，2013，4 (6):500-502．

［9］ Hii S F，Kopp S R，Thompson M F et al．Canine vector-borne disease pathogensin dogs from south－east Queensland and northeast Northern Territory［J］．Aust VetJ，2012，90:130-135．

［10］ Lin E C，Chueh L，Lin C，et al．The therapeutic efficacy of two antibabesial strategies against Babesia gibsoni［J］．Veterinary Parasitology，2012，186(3-4):159-164．

［11］ Sakuma M，Setoguchi A，Endo Y．Possible Emergence of Drug-Resistant Variants ofBabesia gibsoni in Clinical Cases Treated with Atovaquone and Azithromycin［J］．Journal of Veterinary Internal Medicine，2009，23(3):493-498．

Babeia gibsoni infection in 25 dogs in Beijing

ZHENG Si-yan，CHEN Yan-yun，YUAN Chun-yan，XIA Zhao-fei

(College of VeterinaryMedicine，China Agricultural University，Beijing 100193，China)

To investigate the infection and treatment of canine babesiosis in Beijing area，present study was conducted from Octorber 2014 to January 2016 to studied the infection of25 cases of canine babesiosis in the animal hospital of China Agricultural University．We recorded the clinical symptoms，performed complete blood count CCBC，biochemical test and diminazene treatment effect．The results showed that25 cases had differentdegrees of anemia，and the rate was 73.3%(11/15)in dogs with immune mediated hemolytic anemia．The use of diminazene and blood transfusion therapy，achieved good therapeutic effect and the response rate was 71.2%(10/14)．But in the case of the current track，21.4%(3/14)of the affected dogs had recurrence．

B．gibsoni;CBC;PCR

XIA Zhao-fei

S858.292

A

0529-6005(2017)06-0053-03

2016-06-29

鄭思艷(1989-)，女，碩士生，研究方向為小動物內科學，E-mail:zhengsiyan@cau．edu．cn

夏兆飛，E-mail:drxia@126．com