某豬場PRRSV與PCV2雙重感染的診斷

(貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025）

某豬場PRRSV與PCV2雙重感染的診斷

徐 國，曾智勇*，代振江，葉百川，張愛瓊，咸 文，何小莉

(貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025）

2017年2月，貴州某豬場發生以仔豬皮炎和持續性腹瀉為特征的臨床病例。為查明病因，送檢發病保育仔豬2頭于實驗室進行病原診斷。根據流行病學情況、臨床癥狀、病理解剖與PCR/RT-PCR檢測，確診該豬場送檢保育豬存在豬藍耳病病毒與豬圓環病毒2型的雙重感染。

PRRSV；PCV2；雙重感染

豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)又稱豬藍耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒( PRRSV)引起的以豬發生呼吸道疾病和母豬發生繁殖障礙為特征的急性傳染病[1], 我國自1996年，郭寶清等[2]確定了本病在我國存在以來，全國多地相繼發生[3-5]。豬圓環病毒病感染是由豬圓環病毒2型（PCV2）感染所引起的一系列豬傳染病的總稱，臨床特征多種多樣，主要特征為體質下降、生長發育不良、腹瀉、呼吸困難，特別是腎臟、脾臟及全身淋巴結腫大、出血和壞死[6]。近年來，由PRRSV、PCV2感染后造成豬只免疫抑制，從而繼發其他病原感染呈上升趨勢，給養豬業造成了巨大的經濟損失。本文就貴州某豬場PRRSV與PCV2雙重感染的診斷作如下報道。

1 發病情況

該豬場存欄保育仔豬1 000余頭，保育豬腹瀉發病率約10%左右，部分發病仔豬有皮炎、丘疹，呼吸困難，大腿內側、陰囊部及耳根有發紺現象，隨病情的加重病死率亦隨之升高，達10%左右。

2 病理解剖

送檢病仔豬解剖可見腸系膜淋巴結、腹股溝淋巴結與頜下淋巴結腫大、出血（圖1），脾臟大面積梗死、表面有淡黃色纖維素性滲出物覆蓋（圖2），腎臟可見白斑（圖3）；胸腔臟器黏連，肺臟間質增寬且有彌散性出血,心包積有大量渾濁的淡黃色液體，心臟表面有大量纖維素性滲出物覆蓋，呈典型的“絨毛心”特征（圖4）。

3 病毒的PCR/RT-PCR檢測結果

根據臨床癥狀、病理解剖可初步診斷存在典型的副豬嗜血桿菌的感染，并疑似有豬瘟病毒（CSFV）、豬藍耳病病毒（PRRSV）或豬圓環病毒2型（PCV2）等病毒的混合感染。為確診感染的病毒性病原，應用實驗室設計合成的針對CSFV、PRRSV和PCV2的特異性引物（見表1），對疑似病原進行檢測。應用TaKaRa MinBEST Viral DNA/ RNA Extraction Kit Ver.5.0 試劑盒提取核酸，分別用表1中特異性引物與PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2試劑盒進行PCR/RT-PCR擴增，反應體系為：RNase Free dH2O 7.5 μL，2×1 Step Buffer 12.5 μL，上下游引物各0.5 μL，核酸模板3.0 μL，PrimeSc ript 1 Step Enzyme Mix 1.0 μL。PCR反應條件為：95 ℃預變性5 min；95 ℃變性60 s，57 ℃退火40 s，72 ℃延伸100 s，35個循環；72 ℃終延伸10 min。RTPCR反應條件為：50 ℃逆轉錄40 min；95 ℃預變性5 min；95 ℃變性30 s，57 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個循環；72 ℃終延伸10 min；反應結束后分別取5 μL PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。檢測表明，PCV2陽性、PRRSV陽性，CSFV陰性，見圖5。

圖1 頜下淋巴結出血腫大

圖2 脾臟表面覆蓋有纖維素性滲出物

圖3 腎臟見有白斑

圖4 心臟嚴重纖維束性增生

圖5 送檢豬PCR/RT-PCR檢測結果

表1 擴增目的片段的引物

4 分析討論

通過流行病學情況、臨床癥狀、剖檢病理和病毒PCR/RT-PCR檢測結果，確診該養殖場仔豬存在PCV2與PRRSV雙重感染。由于病理解剖觀察到，心包積有大量渾濁的淡黃色液體，心臟表面有大量纖維素性滲出物覆蓋，呈典型的“絨毛心”基本特征，以及病原檢測結果表明，PCV2與PRRSV感染后會繼發副豬嗜血桿菌等其他病原的感染，所以臨床上見有類似疾病當多角度分析病因。

因病毒性疾病主要依靠疫苗免疫，故建議在發生該類疾病的豬場緊急接種PCV2疫苗和PRRSV疫苗；其次，對發病豬進行隔離飼養以防止散毒，病死豬及污染物徹底焚燒或深埋，對污染的圈舍和四周環境用2%的燒堿進行嚴格消毒，對新購進豬要進行嚴格的隔離、檢疫，隔離期間定期進行血清學抗體檢測。另外，對于豬藍耳病與多種病原混合感染可采取全場用藥，用泰妙菌素150 g/t，阿散酸90 g/t，黃芪多糖2 kg/t，阿莫西林300 g/t，磺胺-6-甲氧嘧啶鈉1 kg/t(首次用量)，300 g/t(維持用量)，具有一定療效[3]。

[1] SUR J H, DOSTER A R, CHRISTIAN J S, et al. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus replicates in testicular germ cells, alters spermatogenesis, and induces germ cell death by apoptosis[J]. Journal of Virology, 1997, 71(12)﹕9170-9179.

[2] 郭寶清, 陳章水, 劉文興,等. 應用間接免疫熒光法從國內生殖障礙綜合征豬群中檢測生殖和呼吸綜合征陽性抗體的研究[J]. 中國獸醫科學, 1996(3)﹕3-5.

[3] 孟婷,吳敏秋,徐小琴,等.一起豬藍耳病與多種病原混合感染的診治[J].黑龍江畜牧獸醫,2011(2)﹕81-82.

[4] 馮玉龍,孫曉亮,高存帥,等.豬藍耳病與圓環病毒病混合感染的診治[J]. 黑龍江畜牧獸醫,2014(2)﹕72-73.

[5] 王洪光,湯德元,羅險峰,等.貴州省某豬場PRRSV,PCV-2和PRV混合感染的快速診斷[J].黑龍江畜牧獸醫,2013(21)﹕108-110.

[6] 陳溥言.獸醫傳染病學[M].5版.北京：中國農業出版社，2006：231.

2017-03-29）

貴州省省校合作計劃項目“攜帶遺傳標記的豬圓環病毒反向遺傳操作平臺的構建”,黔科合LH字[2014]7670號

徐國，男，在讀碩士，研究方向：動物傳染病病原分子生物學。E-mail:576144546@qq.com

*通訊作者：曾智勇，男，教授，博士，碩士生導師，從事動物傳染病病原分子生物學研究