關于川貝清肺糖漿中甘草酸檢驗方法的探討

莫艷嬌

摘 要：目的：建立高效液相色譜法測定川貝清肺糖漿中甘草酸的含量。方法：采用C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm），以乙腈、0.05%磷酸為流動相，流速為1 mL/min，檢測波長為250nm，以外標法測定含量.結果：甘草酸在0.0738μg～1.845μg的范圍內峰面積與測定濃度呈良好的線性關系，r=1.0000（n=7），平均回收率為99.2%，RSD為1.5%（n=9）.結論：高效液相色譜法專屬性好，簡便、快速，準確，重現性好.

關鍵詞：HPLC法 川貝清肺糖漿 甘草酸 含量測定

川貝清肺糖漿由枇杷葉、苦杏仁、川貝母、麥冬、地黃、甘草、桔梗、薄荷等組成的復方制劑，現行標準中僅檢查性狀和相對密度，無含量測定等項目，這對藥品內在質量的全面控制是一個欠缺，為保證藥品質量，根據現行藥品質量標準及參考有關報道，在大量試驗的基礎上，對川貝清肺糖漿中甘草（甘草酸）含量測定方法進行了研究。

一、樣品及試藥

1.1儀器

高效液相色譜儀：Waters2695/2996

1.2材料

甘草酸（中檢所，批號為100018-200408，供含量測定用）；川貝清肺糖漿（廣西大力神制藥股份有限公司提供，批號為160601）；乙腈（色譜純，廣州西隴化工）；水為重蒸餾水；磷酸（色譜純，重慶光復）。

二、方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱選用島津科技有限公司GL公司的C18（ODS3）色譜柱（150mm×4.6mm，5μm）；乙腈為流動相A，0.05%磷酸為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫；流速為1ml/min；檢測波長為250nm。在此波長下主成分峰的出峰位置無雜峰干擾；進樣量10μl。在該色譜條件下，甘草酸峰峰形好，前、后均無雜峰影響。見附圖1。

考慮到樣品溶劑對色譜的干擾，根據《中國藥典》附錄中樣品溶劑宜盡量采用流動相作溶劑的要求，采用本法的流動相作為溶劑時，在甘草酸峰的前后有雜質峰，影響分離度。經試驗用水作溶劑，在該色譜條件下無干擾。見附圖2。

2.2專屬性試驗（空白試驗）

按處方制成不含甘草酸的樣品，按擬定方法測定，結果表明在甘草酸出峰處無吸收峰出現。見附圖3。

2.3線性關系與范圍考察

稱取甘草酸對照品9.232mg，置100ml量瓶中加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置5ml量瓶中加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得含甘草酸對照品0.0369mg/ml（36.9ug/ml）的溶液。分別進樣2、5、10、15、20、30、50ul，記錄峰面積。以甘草酸的峰面積Y對進樣量X（ug）進行線性回歸，得回歸方程為：

Y=875010X-3459 r=1.0000（n=7）

結果見表1。

結果表明，進樣量在0.0738ug～1.845ug

（7.38ug/ml～184.5 ug/ml）的范圍內峰面積與測定濃度呈良好的線性關系。

2.4重復性試驗

取同一批號樣品（批號：160601）6份，按含量測定項下方法制備供試品溶液，在擬定的色譜條件下，進樣，測定甘草酸的含量，結果顯示本方法重復性良好，結果見表2。

2.5精密度試驗

在上述的重復性試驗中，連續進樣6次，

A B

C

A.對照品溶液 B.樣品溶液 C.陰性對照溶液

2.6穩定性試驗

取對照品溶液（0.04065mg/ml），于0，2，4，8，12h分別進樣，依法測定甘草酸峰面積值，結果顯示，溶液至少在12小時內是穩定的。結果見表4。

2.7加樣回收試驗

精密量取已知含量的同一批供試品（批號：160601，含量為0.25mg/ml）3份各20ml，置100 ml量瓶中，各精密加入一定量的甘草酸對照品（見表5），加水至刻度，搖勻，得3個不同濃度的樣品溶液。各取3份做平行試驗，計算加樣回收率。測定結果令人滿意。結果見表6。

三、討論

3.1流動相的選擇

流動相的選擇上，有關文獻報道均有不同，如以甲醇-0.2mol /L乙酸胺溶液（用冰醋酸調節pH值至4.2）（58： 42）、甲醇-0.2mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸（67：3：1）、乙腈-0.5%磷酸溶液（含1mmol/L醋酸銨溶液）（33：67）、10mmol/L醋酸銨溶液（pH=6.86）-乙腈（79.5∶20.5），等。以上流動相，經試驗甘草酸峰形均不理想。采用《中國藥典》2015版一部甘草含量測定項下的流動相，梯度洗脫的方法，經試驗得到較好的分離效果，甘草酸峰形也很好。

3.2溶劑選擇

甘草酸的溶劑選擇上，各報道中各有不同，因甘草酸易溶于水、乙醇，分別采用乙醇、水、甲醇及流動相溶解，其中流動相和乙醇、甲醇的溶解度較好但所得分離效果較差，有雜質峰對甘草酸峰產生影響，各項條件均不能滿足《中國藥典》的要求；而用水作溶劑得到的色譜峰峰形好，各項條件均滿足《中國藥典》的要求，故本文選水作為溶劑。

3.3檢測波長選擇

甘草酸的吸收波長，有250nm、252 nm、255 nm等，但大部分定250nm為吸收波長，經對對照品在200nm～400 nm進行掃描，最大吸收在250nm處，故定250nm為檢測波長能得到較好的檢測結果。

四、結論

川貝清肺糖漿為《衛生部頒標準》品種， 標準中質量監控項目簡單，不利于藥品的質量監控。為了保證藥品的質量，在參考有關報道和大量試驗的基礎上，對川貝清肺糖漿中的甘草進行含量測定。本文采用HPLC法測定甘草（甘草酸）的含量，方法靈敏、專屬性強、操作簡便、結果準確.

參考文獻

[1]《中國藥典》2015年版一、四部，化學工業出版社.

[2]薛非凡、曾麗、王麗玉、李炳森，川貝清肺糖漿質量標準研究，《中國藥業》2014年12期.

[3]陳建琴，川貝清肺糖漿中苦杏仁苷、甘草苷和甘草酸的雙波長UPLC法測定，《中國醫藥工業雜志》2015年 第8期.

[4]薛翌佳，HPLC測定川貝清肺糖漿中甘草酸的含量，《海峽藥學》2014年 第12期.

[5]鄧陽、丁雯雯、顏苗、盛志峰、龔慧，HPLC法測定甘草制劑中甘草酸的含量，《湖南中醫雜志》 2013年08期.