支氣管哮喘過(guò)敏原血清特異性免疫球蛋白E及總免疫球蛋白E、嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白的測(cè)定及分析

周海霞 常蕊靜 姜鵬 加孜那·托哈依

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支氣管哮喘過(guò)敏原血清特異性免疫球蛋白E及總免疫球蛋白E、嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白的測(cè)定及分析

周海霞 常蕊靜 姜鵬 加孜那·托哈依

目的探討血清總免疫球蛋白E (TIgE)、嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(ECP)水平在過(guò)敏性哮喘診斷中的意義，為哮喘患者防治方案的個(gè)體化、具體化提供客觀依據(jù)。方法：采用自動(dòng)化快速檢測(cè)系統(tǒng)(CAP)對(duì)90例哮喘患者進(jìn)行6種吸入性、12種食入性混合過(guò)敏原特異性IgE(SIgE)及TIgE、ECP檢測(cè)。結(jié)果①90例哮喘患者中過(guò)敏原總陽(yáng)性率為68.89%，其中吸入性過(guò)敏原陽(yáng)性率為58.89%，食入性過(guò)敏原陽(yáng)性率為38.89%；②吸入混合過(guò)敏原中以Wx3(蒿屬、車前草、藜屬、一枝黃花、蕁麻)及Hx2(屋塵、塵螨、粉瞞、蟑螂)占多數(shù)，食物以Fx3(小麥、燕麥、玉米、芝麻、蕎麥)、Fx5(蛋白、牛奶、鱈魚、花生、黃豆)占多數(shù)；③TIgE陽(yáng)性率為64.44%，大多數(shù)哮喘患者以1～3種混合過(guò)敏原為主，過(guò)敏原種數(shù)、 ECP水平與TIgE顯著相關(guān)。過(guò)敏原種數(shù)與ECP無(wú)顯著相關(guān)性。SIgE陽(yáng)性組的血清TIgE明顯高于SIgE陰性組，P<0.01。SIgE陽(yáng)性組的血清ECP與SIgE陰性組相比無(wú)明顯差異，P>0.05。結(jié)論蒿屬、藜屬類植物為就診于我院哮喘患者導(dǎo)致支氣管哮喘發(fā)作最主要的變應(yīng)原，混合型過(guò)敏原為初步篩選患者主要的過(guò)敏種類，若篩查陽(yáng)性可進(jìn)一步進(jìn)行單項(xiàng)過(guò)敏原測(cè)定。TIgE可以用來(lái)提示過(guò)敏的概率,并幫助醫(yī)師決定是否對(duì)一組常見吸入性過(guò)敏原試驗(yàn)陰性的患者作進(jìn)一步檢查。ECP檢測(cè)不能判斷患者的過(guò)敏狀態(tài)。過(guò)敏原檢測(cè)在哮喘疾病的預(yù)防和治療中起著重要作用, 檢測(cè)變應(yīng)原對(duì)特異性免疫治療具有重要的指導(dǎo)意義。

成人支氣管哮喘； 混合變應(yīng)原； 免疫球蛋白E； 嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白

支氣管哮喘(簡(jiǎn)稱哮喘)是嚴(yán)重影響人們健康的常見病。據(jù)粗略統(tǒng)計(jì),我國(guó)約有3 000萬(wàn)人罹患哮喘[1-2]。其中60%～80%發(fā)病與特異性變應(yīng)原有關(guān)。致敏原一般可分為內(nèi)源性和外源性兩大類，哮喘是由外源致敏物觸發(fā)的變態(tài)反應(yīng)性疾病,這類致敏物就是變應(yīng)原。已經(jīng)被致敏的支氣管哮喘患者,氣道呈高反應(yīng)性,再次接觸特異性變應(yīng)原時(shí),就可發(fā)生哮喘。因此,變應(yīng)原是引起哮喘癥狀的重要危險(xiǎn)因素[3]。而外源性哮喘主要由攝人變應(yīng)原引起的變態(tài)反應(yīng)，血清吸入性及食入性變應(yīng)原特異性免疫球蛋白(specific immunoglobin E, SIgE)的檢測(cè)是確定過(guò)敏性哮喘的重要方法，由于地理環(huán)境和氣候的不同,各地誘發(fā)哮喘發(fā)病變應(yīng)原差異亦較大。SIgE測(cè)定是體外檢測(cè)變應(yīng)原的重要手段，絕大多數(shù)測(cè)定方法中測(cè)定的過(guò)敏原SIgE是血清中的游離SIgE水平。

資料與方法

一、 研究對(duì)象

收集我院2008年4月至2011年1月在變態(tài)反應(yīng)室行變應(yīng)原檢測(cè)的支氣管哮喘患者150例，篩選出90例因哮喘急性發(fā)作住院的患者，其中男性38例，女性52例;維族35例，漢族55例，年齡14～87歲,平均38.54±14.90歲。 納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合《支氣管哮喘防治指南》(2008年)支氣管哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；②患者既往周期性、季節(jié)性、發(fā)作性非常明顯，季節(jié)性加重的特點(diǎn)；③均為住院急性發(fā)作哮喘患者；④同意做該項(xiàng)檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：①對(duì)每例患者均詢問完整的病史(包括發(fā)病時(shí)間、發(fā)作持續(xù)時(shí)間、日常生活接觸的物品和工作環(huán)境、飲食習(xí)慣)并進(jìn)行詳細(xì)的體格檢查,排除藥物、運(yùn)動(dòng)、胃食管反流、心理因素等引起哮喘發(fā)作；②排除心源性哮喘、支氣管擴(kuò)張合并哮喘；③年齡小于14歲；④拒絕行該項(xiàng)檢查。

二、儀器與試劑

SIgE檢測(cè)采用自動(dòng)化快速檢測(cè)系統(tǒng)(CAP)進(jìn)行檢測(cè),CAP為瑞典Pharmacia Diagnostics AB公司產(chǎn)品,包括儀器(U-niCAP 100)、軟件(UniCAP 100 RM5.00)及配套的CAP診斷試劑。對(duì)所有患者進(jìn)行血清總抗體E(total immunoglobin E, TIgE)、血清嗜酸細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(eosinophil cationic protein, ECP)及相應(yīng)SIgE檢測(cè)。該檢測(cè)系統(tǒng)具有：高靈敏度及高特異性。CAP系統(tǒng)建立于新固體-IMMUNO CAP上，使檢出率與以往方法相比高15%，是目前世界上最先進(jìn)的檢測(cè)儀之一。采用Master CAP Assay Manager Version2.6軟件(為Pharmacia公司的專利)。

特異性IgE測(cè)定選用多價(jià)變應(yīng)原CAP，同時(shí)結(jié)合幾種性質(zhì)相似變應(yīng)原稱為“多價(jià)變應(yīng)原CAP”。吸入性過(guò)敏原過(guò)篩試驗(yàn)混合抗體包括：Ex1：貓上皮、馬皮屑、牛皮屑、狗皮屑；Gx3：黃花毛、黑麥草、梯牧草、黑麥、絨毛草；Hx2：屋塵、塵螨、粉瞞、蟑螂；Mx2：特意支孜、煙娶、白假絲酵母、鏈格、長(zhǎng)蠕孢；Tx4：白櫟、榆樹、梧桐、柳樹、楊樹；Wx3：蒿屬、車前草、藜屬、一枝黃花、蕁麻；Fx2：鱈魚、蝦、青貝、金槍魚、鮭魚；Fx3：小麥、燕麥、玉米、芝麻、蕎麥；Fx5：蛋白、牛奶、鱈魚、花生、黃豆；Fx7：西紅柿、釀酒酵母、大蒜、洋蔥、葡萄；Fx9：杏仁、獼猴桃、甜瓜、香蕉、葡萄；Fx10：豬肉、牛肉、蛋黃、雞肉、火雞肉；Fx12：黑麥、大米、馬鈴薯、蘑菇、南瓜；Fx14：西紅柿、菠菜、卷心菜、辣椒；Fx15：橙子、蘋果、香蕉、桃子；Fx16：草莓、梨子、檸檬、菠蘿；Fx17：蘋果、香蕉、梨子、桃子；Fx19：胡蘿卜、馬鈴薯、菠菜、黃瓜。TIgE測(cè)定包被在固相載體上的不是過(guò)敏原，而是抗IgE抗體。ECP測(cè)定包被在固體載體上的為抗ECP抗體。

三、研究方法

1. 標(biāo)本采集：患者急性發(fā)作期空腹靜脈常規(guī)抽血4 ml，其中2 ml置一次性SST管內(nèi)，輕微倒轉(zhuǎn)5次充分混勻,用于檢測(cè)ECP；另2 ml置冷凍管內(nèi),用于檢測(cè)IgE。兩管均在室溫下凝血(60±10)min，1 000×g離心10 min，分別將血清移至Eppendorf塑料管中，低于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2. 結(jié)果判定： SIgE濃度的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)如下：0級(jí)，SIgE濃度<0.35 kU/L，無(wú)IgE或不能檢出；Ⅰ級(jí)，SIgE濃度0.35～0.70 kU/L，SIgE濃度低；Ⅱ級(jí)，SIgE濃度>0.70～3.50 kU/L，SIgE濃度中等；Ⅲ級(jí)，SIgE濃度>3.50～17.50 kU/L，SIgE濃度高；Ⅳ級(jí)，SIgE濃度>17.50～50.00 kU/L，SIgE濃度特高；Ⅴ級(jí)，SIgE濃度>50.00～100.00 kU/L，SIgE濃度特高；Ⅵ級(jí)，SIgE濃度>100.00 kU/L，SIgE濃度特高。其中任一樣品的SIgE≥0.35 kU/L,即判定為該過(guò)敏原陽(yáng)性。以TIgE<60 kU/L作為正常人上限值,依據(jù)試劑說(shuō)明書以TIgE<或≥113 kU/L為診斷參考臨界值。ECP正常參考值：≤15 μg/L。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、混合過(guò)敏原陽(yáng)性率

90例支氣管哮喘患者吸入性過(guò)敏原及食物過(guò)敏原SIgE陽(yáng)性率為68.89%，其中53例患者吸入性過(guò)敏原SIgE陽(yáng)性率為58.89%，同時(shí)有35例對(duì)食入性過(guò)敏原SIgE陽(yáng)性率38.89%。吸入性過(guò)敏原以Wx3(蒿屬、車前草、藜屬、一枝黃花、蕁麻)及Hx2(屋塵、塵螨、粉瞞、蟑螂)占比例較高，分別為42.22%、33.33%。而食物性過(guò)敏原以Fx3(小麥、燕麥、玉米、芝麻、蕎麥)及Fx5(蛋白、牛奶、鱈魚、花生、黃豆)占比例較高，分別為15.55%、17.78%。在所有哮喘患者中，90例哮喘患者中，TIgE≥113 kU/L哮喘患者有58例(64.44%)，其中有47例(52.22%)SIgE陽(yáng)性，有15例(16.67%)患者具有混合過(guò)敏原陽(yáng)性結(jié)果,但TIgE仍在正常參考界值內(nèi)，有11例(12.22%)患者TIgE值≥113 kU/L，但無(wú)混合過(guò)敏原陽(yáng)性結(jié)果。

二、混合過(guò)敏原陽(yáng)性分布

62例過(guò)敏原陽(yáng)性的支氣管哮喘患者中過(guò)敏原的陽(yáng)性分布，在62例SIgE陽(yáng)性患者中過(guò)敏原分布以1～3種過(guò)敏原為主(62.92%)，過(guò)敏原種數(shù)2種以上混合過(guò)敏原占70.96%。

三、混合過(guò)敏原種數(shù)、ECP與TIgE相關(guān)性

62例過(guò)敏原陽(yáng)性的支氣管哮喘患者中過(guò)敏原種數(shù)、ECP均不符合正態(tài)分布，TIgE符合正態(tài)分布，故使用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)。過(guò)敏原的陽(yáng)性種類數(shù)、ECP與TIgE呈顯著正相關(guān)(r=0.308，rs=0.277，P<0.05)。過(guò)敏原的陽(yáng)性種類數(shù)與ECP無(wú)顯著相關(guān)(rs=0.064，P>0.05)。

四、SIgE陽(yáng)性組與SIgE陰性組血清ECP和TIgE比較

TIgE可反應(yīng)哮喘患者過(guò)敏狀態(tài)，SIgE陽(yáng)性組的血清TIgE明顯高于SIgE陰性組，t′=5.106，P<0.01有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SIgE陽(yáng)性組的血清ECP與SIgE陰性組相比無(wú)明顯差異Z=1 168，P=0.354P>0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 SIgE陽(yáng)性組與SIgE陰性組血清ECP和TIgE比較

討 論

支氣管哮喘是一種氣道變態(tài)反應(yīng)性慢性炎癥，這種炎癥使易感者對(duì)激發(fā)因子具有氣道高反應(yīng)性,并引起氣道收縮,激發(fā)因子主要是過(guò)敏原[5]。IgE又稱反應(yīng)素,是Ⅰ型超敏反應(yīng)的抗體,臨床檢測(cè)包括血清總IgE和特異性IgE水平。

變應(yīng)原也稱致敏原、過(guò)敏原、變態(tài)反應(yīng)原，是一組具有變應(yīng)性的抗原，是引起哮喘病的發(fā)病和發(fā)展的重要因素。變應(yīng)原主要分吸入性變應(yīng)原和食入性變應(yīng)原，引起哮喘病的變應(yīng)原以吸入性變應(yīng)原為主。已經(jīng)被致敏的支氣管哮喘患者,氣道呈高反應(yīng)性,再次接觸特異性變應(yīng)原時(shí),就可發(fā)生哮喘。因此,變應(yīng)原是引起哮喘癥狀的重要危險(xiǎn)因素[6]。據(jù)估計(jì)，三分之二的哮喘是過(guò)敏引起的，大于50%的重癥哮喘也是由過(guò)敏所致。

SIgE測(cè)定是體外檢測(cè)變應(yīng)原的重要手段，其試驗(yàn)的靈敏度及特異度都很高，特別是對(duì)花粉、螨類、寵物皮屑、牛奶、雞蛋、堅(jiān)果等變應(yīng)原的SIgE測(cè)定，靈敏度和特異度都可以在90%以上，有的甚至可接近100%。

本組90例支氣管哮喘患者吸入性過(guò)敏原及食物過(guò)敏原SIgE陽(yáng)性率為68.89%，其中53例患者吸入性過(guò)敏原SIgE陽(yáng)性率為58.89%，同時(shí)有35例對(duì)食入性過(guò)敏原SIgE陽(yáng)性率38.89%。說(shuō)明吸入性過(guò)敏原為哮喘患者主要過(guò)敏原，吸入性過(guò)敏原以Wx3及Hx2占比例較高，分別為42.22%、33.33%，這與我區(qū)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[7]。而食物性過(guò)敏原以Fx3及Fx5占比例較高分別為15.55%、17.78%。蒿屬、車前草、藜屬均為新疆常見植物，新疆天氣干燥,且因風(fēng)大,花粉、飛絮擴(kuò)散量也大，對(duì)于過(guò)敏體質(zhì)者，易誘發(fā)過(guò)敏。屋塵、塵螨、粉瞞、蟑螂所占比例僅次于蒿屬類，這是因?yàn)樾陆疄豸斈君R地區(qū)春秋季節(jié)時(shí)間短,且氣候干燥,不適宜塵螨、粉瞞類生長(zhǎng)，故陽(yáng)性率較沿海城市低[8]，但塵螨類仍是常見吸入過(guò)敏原，最常見最危險(xiǎn)的過(guò)敏原，這與以往的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[9-10]。食入性混合過(guò)敏原中Fx3及Fx5陽(yáng)性率較高，與新疆主要食用農(nóng)作物及人們生活習(xí)慣有關(guān)。新疆生產(chǎn)玉米、小麥，且喜歡食用面食，少數(shù)民族喜食奶制品。故找出過(guò)敏原種類，避免接觸主要導(dǎo)致哮喘發(fā)作的物質(zhì)，對(duì)哮喘預(yù)防及治療具有重要意義。以上過(guò)敏原陽(yáng)性率均為混合過(guò)敏原，一種混合過(guò)敏原陽(yáng)性，表示患者可能對(duì)其中一種或幾種檢測(cè)陽(yáng)性，可進(jìn)一步根據(jù)自己日常生活中經(jīng)常接觸的變應(yīng)原進(jìn)行具體檢測(cè)，找出主要的過(guò)敏原，混合過(guò)敏原陰性患者則無(wú)需行進(jìn)一步檢查，但不能忽視患者對(duì)其他物質(zhì)存在高敏狀態(tài)，此項(xiàng)檢查可為患者省去不必要的檢查。測(cè)出過(guò)敏原陽(yáng)性的患者，可在以后的生活中盡量避免接觸易致敏的變應(yīng)原，減少哮喘的發(fā)作次數(shù)，減少住院率。

本次監(jiān)測(cè)中有31.11%患者未見變應(yīng)原陽(yáng)性反應(yīng)，考慮這些病因中可能有較特殊的變應(yīng)原或存在其他發(fā)病機(jī)制。患者可在自己的日常生活中進(jìn)一步觀察，明確自己的發(fā)作原因，盡量避免接觸和使用與該變應(yīng)原相關(guān)的物品。值得注意的是，本組62例SIgE陽(yáng)性患者中1種混合過(guò)敏原陽(yáng)性比率僅為29.04%，70.96%的患者存在2種及2種以上混合變應(yīng)原過(guò)敏，這種現(xiàn)象提示哮喘患者使用單一變應(yīng)原脫敏治療效果欠佳，這與臨床情況相符，采用聯(lián)合特異性脫敏治療是否會(huì)提高治愈率，尚需進(jìn)一步研究。

TIgE的測(cè)定主要是測(cè)定患者體內(nèi)總IgE的含量，有報(bào)道顯示血清IgE診斷準(zhǔn)確性在40%～50%左右，但無(wú)特異性，血清總IgE的高水平常與變態(tài)反應(yīng)程度有關(guān)，并且過(guò)敏反應(yīng)并不總伴隨總IgE的升高[11]。

本次試驗(yàn)明顯表現(xiàn)出SIgE陽(yáng)性種數(shù)與TIgE的增高存在一致性。TIgE濃度正常并不能排除特異性過(guò)敏的存在。單一的SIgE濃度增高也不代表TIgE濃度一定增高。但是SIgE陽(yáng)性組的TIgE值明顯高于SIgE陰性組，說(shuō)明TIgE可以初步反映患者的過(guò)敏狀態(tài)。TIgE高的患者可高度懷疑患者處于過(guò)敏狀態(tài)。

本研究結(jié)果顯示，在檢測(cè)的所有符合過(guò)敏性支氣管哮喘診斷患者中,TIgE≥113 kU/L患者只有64.44%,有16.67%患者具有混合過(guò)敏原陽(yáng)性結(jié)果,但TIgE仍在正常參考界值內(nèi),表明2種抗體水平存在較大的交叉。

ECP是嗜酸粒細(xì)胞釋放的毒性蛋白之一，在變態(tài)反應(yīng)性炎癥中起重要作用，它可造成氣道上皮的損傷和脫落，并引起氣道高反應(yīng)。

本次研究得出支氣管哮喘急性發(fā)作患者中過(guò)敏原的陽(yáng)性種類數(shù)與ECP無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。說(shuō)明ECP不能反映患者的總體過(guò)敏狀態(tài)。ECP與TIgE存在正相關(guān)，但孫清寶等[12]對(duì)54例支氣管哮喘患者進(jìn)行研究提示：TIgE水平與ECP無(wú)顯著相關(guān)性，這可能與抽取樣本有關(guān)，本次抽取均為急性發(fā)作患者，故可能存在差異。

綜上所述,哮喘病是一種變態(tài)性疾病, 因此避免接觸變應(yīng)原是預(yù)防哮喘發(fā)作的最理想措施。但對(duì)于大多數(shù)患者來(lái)說(shuō),變應(yīng)原的尋找是非常困難的,通過(guò)過(guò)篩試驗(yàn)和總IgE的測(cè)定,首先明確是否為變態(tài)反應(yīng)性疾病非常重要。體外過(guò)敏原檢測(cè)是一種安全、可靠并可迅速篩查和尋找過(guò)敏原的檢測(cè)手段,適合任何人群,聯(lián)合檢測(cè)血清IgE和ECP可作為哮喘臨床診治的依據(jù),同時(shí)也為進(jìn)一步開展特異性的免疫治療、減少或有效控制哮喘發(fā)作提供依據(jù)。

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(本文編輯：黃紅稷)

周海霞，常蕊靜，姜鵬，等. 支氣管哮喘過(guò)敏原血清特異性免疫球蛋白E及總免疫球蛋白E、嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白的測(cè)定及分析[J/CD]. 中華肺部疾病雜志(電子版)， 2017， 10(3)： 300-303.

Measurement and analysis of allergens specific immunoglobin E and serum total immunoglobin E, eosinophil cationic protein of bronchial asthma

ZhouHaixia,ChangRuijing,JiangPeng,JiaZina·TuoHayi.

GeneralHospital,XinjiangMilitaryRegion,Urumchi830000,China

ZhouHaixia,Email:moguhaixia@163.com

Objective To investigate the allergens categories of adult with asthma and provide scientific basis for its prevention and treatment. To investigate the diagnostic value of serum total immunoglobin E(TIgE) test and eosinophil cationic protein in asthma. Methods Ninty patients with asthma were detected the reactions to 6 kind of inhalation and 12 kind of ingestion of the mixed-allergen-specific IgE(SIgE) and total immunoglobin E(TIgE) using rapid automated detection system (CAP). Results ①In 90 asthma patients, allergens total positive rate was 68.89%, the inhaled allergens positive rate was 58.89%, eating allergen positive rate was 38.89%; ②the majority of mixed inhaled allergens are Wx3 (artemisia, plantago, chenopodium genus, solidago, urtica) and Hx2(house dust, dust mites, flour hiding, cockroaches), the majority of mixed food allergens are Fx3 (wheat, oats, corn, sesame, buckwheat), Fx5(protein, milk, cod fish, peanuts, soybeans); ③TIgE positive rate was 64.44%, the majority of patients with asthma were with 1-3 main mixed allergens. Type, ECP levels were correlated with TIgE. Allergen type has no significant correlation with ECP. Serum TIgE in SIgE positive group was significantly higher than SIgE negative group,P<0.01. Compared with SIgE negative group, ECP was no significant difference with SIgE positive group,P>0.05. Conclusions Wx3(artemisia, plantago, chenopodiumgenus, solidago, urtica)is the most important mixed allergens of bronchial asthma in Xinjiang. Mixed allergen initial screen the major types of allergens in patients. If screen positive, the individual allergens can be further determined. When the result was negative in common inhalant allergens test, TIgE can be used to suggest the probability of allergies, and help doctors decide whether a group of patients need further examination. ECP can not judge allergies in patients. The results may provide the guideline to specific immunity therapy (desensitization treatment).

Bronchial asthma; Mixed allergen; Immunoglobin E; Eosinophil cationic protein

10.3877/cma.j.issn.1674-6902.2017.03.012

新疆自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2013211A062)

830000 烏魯木齊，新疆軍區(qū)總醫(yī)院

周海霞， Email: moguhaixia@163.com

R563

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2016-01-14)