胡椒堿含量檢測方法的改進

林宜國

摘要： 胡椒堿屬于桂皮酞胺類生物堿，是胡椒果實的主要提取物，在食品生產、醫療臨床應用、藥物理念、殺蟲防菌等領域具有極其重要的地位。本文所論的胡椒堿含量檢測方法是在現行國家標準基礎上，進一步簡化胡椒堿的前處理方法，使得分析過程更加準確，提高檢測結果準確率，縮短實驗時間。

Abstract： Piperine belongs to cinnamon phthalamide alkaloids， and is the main extract of pepper fruit. It plays an important role in the fields of food production， clinical application of medicine， drug concept， insecticide and insect control， and so on. The method of detecting the content of piperine in this paper is to simplify the pretreatment method of piperine on the basis of the current national standard， which makes the analysis process more accurate， improves the accuracy of the test result and shortens the experiment time.

關鍵詞： 胡椒堿；前處理；檢測

Key words： piperine；pretreatment；detection

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1006-4311（2017）24-0174-02

0 引言

胡椒堿是胡椒中主要的活性化學成分，屬于桂皮酞胺類生物堿，早在19世紀末，作為胡椒的主要成分胡椒堿就能被提純和合成，現今作為重要的一種化工中間體，更是被發現和研究出具有抗氧化、免疫調節、抗腫瘤、促進藥物代謝等作用。

胡椒堿含量是根據國家標準《GB/T 17528-2009 胡椒堿含量的測定 高效液相色譜法》實行檢驗檢測，其檢測要點是“由于胡椒堿溶液不穩定，見光易分解，避光操作很有必要。操作中用鋁箔或黑紙將燒瓶和容量瓶包裹起來，并盡可能快地測定”，但是在檢驗檢測實踐中，胡椒等固體樣品“蒸餾回流三小時”這項針對提取胡椒堿的操作即使燒瓶、冷凝管按要求包裹避光，都不能很好地隔絕光源照射和蒸餾過程的操作誤差，從而極大地影響儀器檢測出峰值，由此得出的檢驗檢測結果重復性、準確性都存在很大的偏差。本方法通過對胡椒堿檢測前處理方法進行改進，在操作過程中利用恒溫超聲波系統批量處理樣品，大大提高了檢驗檢測數據的真實性、穩定性，縮短實驗時間，提高工作效率。

1 試驗材料與方法

1.1 主要器材

高效液相色譜儀：MltiMate 3000 DGLC雙三元系列，包含有帶在線脫氣單元的雙三元梯度泵，自動進樣器，帶有一個六通閥的柱溫箱，二極管陣列檢測器。

超純水機

臺式離心機

高速組織攪拌機

樣品篩：孔徑為500μm

恒溫超聲波系統

萬分之一天平

微量移液器

1.2 主要試劑

去離子水；無水乙醇；甲醇（色譜純）；胡椒堿標準物質

1.3 操作步驟

1.3.1 胡椒堿標準溶液配制

胡椒堿標準儲備溶液：用25ml棕色瓶準確稱取0.2140g胡椒堿標準物質，用無水乙醇溶解并定容，此溶液濃度為：8.5600mg/ml。再用微量移液器吸取儲備液5.0ml，用無水乙醇定容50ml，此溶液濃度為：856.0μg/ml。

1.3.2 樣品制備

本方法使用整粒胡椒，產地茂名市。

①挑取顆粒飽滿胡椒粒約100g，用高速組織攪拌機將樣品粉碎，直至全部通過樣品篩，儲于棕色瓶中備用。

②準確稱取制好的樣品約0.7g，置于100ml棕色瓶中，加入無水乙醇25ml，加塞搖勻后置于恒溫超聲波系統超聲處理45min，超聲條件：20℃，功率250W，頻率20kHz。超聲完畢取出流水冷卻，定容，用0.22μl有機過濾膜過濾上清液，取其中2.0ml于棕色樣品瓶，上機待測定。

1.3.3 標準曲線制備

用微量移液器吸取標準儲備液以無水乙醇逐級稀釋濃度分別為：1.712μg/ml，4.8827μg/ml，17.12μg/ml，54.784μg/ml，171.2μg/ml的標準工作溶液；再稀釋濃度為200.0μg/ml的標準加標溶液。

1.3.4 色譜條件

色譜柱：Thermo Hypersil GOLD，4.6x160mm（P/N：25005-154630）

流動相：甲醇+水=72：28

流速：1.0ml/min

色譜柱溫度：30℃

檢測器波長：343nm

進樣量：10μl

2 數據與結論

2.1 實驗數據

2.1.1 胡椒堿標準品色譜圖（圖1）

依次進樣濃度為1.712μg/ml，4.8827μg/ml，17.12μg/ml，54.784μg/ml，171.2μg/ml的標準工作溶液，繪制標準曲線，相對標準偏差值（%）為：1.2953；判定系數：0.99994。

2.1.2 加標樣品色譜圖

本方法處理辣椒粉樣品檢測色譜圖，加標量為：200.0μg/ml 1ml（圖2）。

檢測得出含量為198.8798μg/ml，本方法加標回收率為99.44%。

國標方法處理辣椒粉樣品檢測色譜圖，加標量為：200.0μg/ml 1ml（圖3）。

檢測得出含量為172.2737μg/ml，國標方法加標回收率為86.14%。

2.1.3 樣品檢測色譜圖

本方法檢測結果平均值為27014.2860μg/ml，標準偏差17.0995，相對標準偏差0.06%。（圖4）

國標方法檢測結果平均值為24760.0502μg/ml，標準偏差1160.8453，相對標準偏差4.69%。（圖5）

2.2 結論

總結對比兩方法的樣品處理檢測數據分析顯示本方法加標回收率、樣品檢測重現性、樣品檢測結果的穩定性和相對標準偏差等數據均優于國標方法，說明本方法的準確度較高。本方法操作較國標方法，用恒溫超聲提取代替加熱回流提取，減少胡椒堿溶液見光易分解造成的檢測誤差，提高檢測結果的準確性；并且操作簡便易行，大大縮短了實驗時間。

參考文獻：

[1]國家標準GB/T 17528-2009，胡椒堿含量的測定[S].

[2]GB/T 12729.6-1991，香辛料和調味品 水分含量的測定（蒸餾法）[S].

[3]GB/T 12729.3-1991，香辛料和調味品 分析用粉末試樣的制備[S].