肝再生磷酸酶-3上調轉化生長因子-beta促進結腸癌LoVo細胞侵襲的機制研究

施景龍 羅興喜 許鶴洋 藍球生 黃永亮 褚忠華*

肝再生磷酸酶-3上調轉化生長因子-beta促進結腸癌LoVo細胞侵襲的機制研究

施景龍1羅興喜2許鶴洋2藍球生2黃永亮2褚忠華2*

目的探討轉化生長因子-beta（TGF?beta）通路在肝再生磷酸酶?3（PRL?3）促進結腸癌細胞侵襲和轉移中的作用機制。方法酶聯免疫吸附試驗ELISA檢測實驗組與對照組結腸癌細胞TGF?beta水平表達差異，Transwell侵襲小室法檢測LoVo細胞侵襲能力變化，Western blot檢測相關通路蛋白水平變化。結果ELISA實驗檢測結腸癌細胞轉染PRL?3后，穩定表達PRL?3的LoVo細胞（LoVo?P）與對照組（LoVo?C）相比，TGF?beta表達明顯升高（114±11 pg/mL比56±8 pg/ mL，P＜0.01）。Transwell侵襲實驗提示不同濃度的TGF?beta中和抗體（1、10、100 ng/mL）作用LoVo?P后其侵襲能力逐漸降低，對照組穿膜細胞數為142.7±11.3個，實驗組分別為96.1±8.2、67.3±9.4、48.6±6.4個（P＜0.05）。蛋白印記實驗提示PI3K/AKT信號通路參與了其誘導侵襲的過程，使用PI3K抑制劑LY294002（10 mg/mL）后，LoVo?P的AKT磷酸化蛋白的表達水平降低2.5倍（P＜0.05）。結論PRL?3能誘導結腸癌LoVo細胞分泌TGF?beta，激活PI3K/AKT信號通路進而促進結腸癌LoVo細胞侵襲。

肝再生磷酸酶-3；結腸癌；轉化生長因子-beta；侵襲

結直腸癌是我國常見惡性腫瘤之一，多數病人常常由于肝轉移而死亡。前期研究表明肝再生磷酸酶-3（phosphatase of regenerating liver?3，PRL?3）的表達與結腸癌的TNM分期呈正相關，提示其參與了結腸癌肝轉移的過程［1］，然而其具體機制尚不清楚，我們前期細胞因子芯片結果初步提示PRL?3能夠上調TGF?beta表達。本研究擬通過已構建穩定表達PRL?3結腸癌細胞株，檢測TGF?beta細胞因子在PRL?3誘導結腸癌細胞侵襲中的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

穩定轉染PAcGFP?PRL?3的人結腸癌LoVo細胞由中山大學孫逸仙紀念醫院醫研中心保種；……