抑癌基因p53、PTEN與子宮內膜癌預后相關性分析

王文翔，鐘 蘭，楊開選，彭芝蘭

抑癌基因p53、PTEN與子宮內膜癌預后相關性分析

王文翔1，鐘 蘭2，楊開選3，彭芝蘭2

目的 探討抑癌基因p53、PTEN與子宮內膜癌臨床病理特點及預后的相關性。方法 回顧性分析99例子宮內膜癌患者的臨床病理資料，按照影響預后的高危因素分組。采用免疫組化法檢測其組織中p53、PTEN的表達，分析其與臨床病理特征、生存率的相關性。結果 p53蛋白過度表達在子宮內膜癌手術病理分期中差異有統計學意義(P=0.028)，同時與Ⅰ型、G1+G2級、Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結轉移差異有統計學意義。單因素分析Log-rank檢驗顯示組織學分型及分級、手術病理分期、淋巴結轉移與生存率相關，p53蛋白過度表達陽性者生存率低。Cox′s比例風險回歸模型進行多因素分析，病理分期和p53蛋白過度表達是內膜癌獨立預后影響因素。PTEN表達缺失在分期越晚、分級越高的病例中更多，同時PTEN 表達缺失與p53蛋白過度表達無關。PTEN表達缺失與組織學分級、期別、淋巴結轉移有無等與子宮內膜癌生存率無相關性(P>0.05)。結論 p53過度表達是子宮內膜癌獨立的預后影響因素，對Ⅰ型子宮內膜癌、G1+G2級、Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結轉移的病例，p53過度表達陽性者生存率低。PTEN在分化越差和分期越晚的病例中表達缺失越多；PTEN表達缺失和子宮內膜癌患者的生存率無相關性。

子宮內膜癌；p53；PTEN；免疫組化；預后

子宮內膜癌為女性生殖道常見惡性腫瘤之一，分為雌激素依賴型(Ⅰ型)和非雌激素依賴型(Ⅱ型)。內膜癌的預后與分期、病理類型、組織學分級、淋巴結有無轉移、浸潤深度等相關，但尚缺乏有效的子宮內膜癌的預后標記物，以避免對低危患者予以過度治療，并確保對具有侵襲性的病例給予恰當的進一步治療。本研究選擇抑癌基因p53和PTEN(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)的表達作為內膜癌預后因素進行探討，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集四川大學華西第二附屬醫院病理科2007年至2016年住院的首次手術患者切除組織的石蠟包埋標本。納入標準：①術前未接受放化療，術后病理確診為原發性子宮內膜癌，術后根據高危因素進行輔助治療。②臨床和病理資料齊全。③納入所有Ⅱ型子宮內膜癌和Ⅰ型子宮內膜癌G3級，依據病例對照研究的原理在Ⅰ型子宮內膜癌G1+G2已死亡的病例中隨機納入5例，余G1+G2隨機納入。排除標準：①雙癌；②有嚴重術后并發癥或合并癥。

1.2 方法 用免疫組織化學SP法(p53和PTEN試劑盒為默沙克生物科技有限公司生產)檢測子宮內膜癌中p53過度表達和PTEN表達缺失，由兩名病理科醫師閱片。

1.3 結果判讀 p53蛋白過度表達判斷標準：細胞核染為顆粒狀棕黃色或棕褐色。隨機選取10個高倍鏡視野計算陽性細胞數：陰性0分，<10%為1分，10%～50%為2分，>50%為3分；同時設定染色陰性0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。兩組相乘結果：0分、1～3分判定為P53蛋白過度表達陰性，4～6分、7～9分為p53過度表達陽性。PTEN表達缺失判斷標準：細胞核染為顆粒狀棕黃色或棕褐色，隨機選取10個高倍鏡視野計算表達缺失細胞數：陰性0分，<10%為1分，10%～40%為2分，>40%為3分；同時設定染色陰性0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。兩組相加結果：0分、1～2分判定為PTEN表達缺失陽性，3～4分、5～6分為PTEN表達缺失陰性。

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0統計軟件進行數據處理，生存率計算采用Kaplan-Meier 法，與生存相關的單因素分析采用log-rank檢驗，多因素分析采用Cox回歸分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床病理特征 99例患者臨床病理特征分布情況：Ⅰ型子宮內膜癌73例(73.74%)，Ⅱ型子宮內膜癌26例(26.26%)；手術病理分期：Ⅰ期50例(50.51%)，Ⅱ期9例(9.09%)，Ⅲ期33例(33.33%)，Ⅳ期7例(7.07%)；組織學分級：G1級25例(25.25%)，G2級7例(7.07%)，G3級41例(41.41%)；99例中18例未清掃淋巴結，81例清掃了淋巴結的病例中29例有淋巴結轉移，52例未查見淋巴結轉移；35例死亡，57例存活，存活病例中無復發病例。

2.2 隨訪結果 以信訪、電話訪和家訪結合的形式進行隨訪，起始時間為手術時間，終止時間為2015年6月30日，失訪7例(7.07%)，35例死亡，57例存活，存活病例中無復發病例。隨訪時間3～130個月，3 a生存率61.95%。Ⅰ型子宮內膜癌死亡21例，Ⅱ型子宮內膜癌死亡14例。

2.3 p53、PTEN表達與臨床病理特征相關性 p53表達與臨床病理類型、手術病理分期、組織學分級、淋巴結轉移分別對應的P值為0.083、0.028、0.068、0.186。在手術病理分期中差異有統計學意義。PTEN表達缺失在分期越晚、分級越高的病例中越多，差異有統計學意義。PTEN表達缺失與病理類型、淋巴結轉移表達無關。同時PTEN 表達缺失與p53蛋白過度表達無關(P=0.965)，見表1。

2.4 p53、PTEN表達與生存率的相關性 p53過度表達與Ⅰ型子宮內膜癌、G1+G2級、Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結轉移患者生存率差異有統計學意義。單因素分析Log-rank檢驗結果顯示組織學分型、手術病理分期、組織學分級、淋巴結是否有轉移與子宮內膜癌生存率相關，差異均有統計學意義。將組織學分型、手術病理分期(P=0.021)、組織學分級、淋巴結是否有轉移、p53過度表達用Cox’s比例風險回歸模型進行多因素分析，結果顯示手術病理分期和p53過度表達是子宮內膜癌獨立的預后影響因素。PTEN表達缺失率49.5%，PTEN表達缺失與組織學分級、期別、淋巴結轉移等進行相關性分析，Log-rank檢驗P>0.05，均無統計學意義。

表1 p53、PTEN表達與臨床病理特征相關性分析例 (%)

3 討論

子宮內膜癌生存率與組織學分型、手術病理分期、組織學分級、淋巴結是否有轉移相關，本研究也證實此相關性。近年來關于分子標記與子宮內膜癌預后相關因素不斷報道，如p53、PTEN、bcl-2、MDM2、beta-catenin、環氧化酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2) 等。

p53屬于抑癌基因，在DNA受損時，p53可誘導細胞凋亡或阻止細胞分裂，從而發揮抑癌作用。50%～60%的人類各系統腫瘤中發現有p53基因突變，約20%～30%子宮內膜癌中發現有p53基因突變。研究發現p53基因突變是多種惡性腫瘤的預后因素，如乳腺癌、卵巢癌、結腸癌、皮膚癌等[1-2]。有學者報道，p53的過度表達是子宮內膜癌發生的早期標記物之一[3], 在子宮內膜癌中p53過度表達與腫瘤侵襲性和腫瘤分級相關。當p53基因發生突變時，p53蛋白半衰期延長并在細胞核中積聚，可通過免疫組織化學進行檢測。

國內外文獻中關于p53過度表達和PTEN表達缺失對子宮內膜癌預后的影響存在分歧[4-5]，多數學者認為p53過度表達和子宮內膜癌預后不良相關，而與Ⅰ型子宮內膜癌G3級和Ⅱ型子宮內膜癌預后無相關性。本研究通過單因素分析顯示：在Ⅰ型子宮內膜癌、Ⅰ+Ⅱ期、G1+G2級、無淋巴結轉移中，p53表達陽性較陰性者生存率低。在G3級、Ⅱ型子宮內膜癌、Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴結轉移者中，p53表達陽性和陰性兩者間的生存率差異無統計學意義。本研究結果顯示p53表達是獨立于FIGO分期、分級、病理類型、淋巴結轉移的子宮內膜癌獨立預后因素。 要進一步證明p53表達與子宮內膜癌預后的相關性，還需進一步研究以及得出臨界值和一抗的統一標準。以前的研究中，有取陽性率5%為臨界值，也有取10%和80%的，有研究對200例Ⅰ型子宮內膜癌病例進行預后研究，結果顯示陽性率≥50%組較5%～50%組、≤5%組預后差(P=0.0001)，后兩組與預后無相關性[6]。本研究結果顯示Ⅱ型子宮內膜癌p53蛋白過度表達陽性率為27%，遠低于以往文獻報道的68%～100%，可能由于本研究取的臨界值(cut-off)較以往取的0%、5%、10%高，使陽性率相應降低所致。

PTEN基因于1997年被發現，是迄今為止發現的第一個具有磷酸酶活性的抑癌基因，同時也極易發生突變[7]。近年來研究發現前列腺癌、乳腺癌、肺癌、膠質母細胞瘤、黑色素瘤和子宮內膜癌中有PTEN基因突變，Ⅰ型子宮內膜癌33%～83%有PTEN基因異常[8]，國內學者通過組織芯片技術發現PTEN的表達缺失與Ⅰ型子宮內膜癌的形成和發展有關[9]。本研究結果顯示PTEN表達缺失和病理分型、淋巴結轉移無關，分化越差的病例中PTEN表達缺失越多，在越晚期的病例中表達缺失越多。當PTEN表達缺失率繼續增高時，抑癌作用減弱，腫瘤侵襲性迅速增加，這和PTEN作為抑癌基因的作用相符。但Lacey研究發現，在子宮內膜癌的持續進展中，與PTEN的缺失表達無關，同時也無敏感性和特異性[10]。

綜上，本研究提示p53蛋白過度表達是子宮內膜癌獨立的預后影響因素，對Ⅰ型子宮內膜癌、G1+G2級、Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結轉移的病例，p53過度表達陽性者較陰性者生存率低。p53過度表達與Ⅰ型子宮內膜癌G3級和Ⅱ型子宮內膜癌生存率無相關性。PTEN在分化越差和分期越晚的病例中表達缺失越多，PTEN表達缺失和子宮內膜癌患者的生存率無關。

[1]Coleman DJ,Chagani S,Hyter S,et al.Loss of keratinocytic RXRα combined with activated CDK4 or oncogenic NRAS generates UVB-induced melanomas via loss of p53 and PTEN in the tumor microenvironment[J].Mol Cancer Res,2015,13(1):186-196.

[2] Mutuiri AP,Nzioka A,Busaria SV,et al.Expression of p53 and HER2/Neu in Kenyan women with primary ovarian carcinoma[J].Int J Gynecol Pathol,2016,35(6):537-543.

[3] Nquyen TT,Hachisuqa T,Urabe R,et al.Significance of p53 expression in background endometrium in endometrial carcinoma[J].Virchows Arch,2015,466(6):695-702.

[4] 高新萍,趙麗君,沈丹華,等.子宮內膜癌患者血清及病理分子標志物與其病理特征關系的研究[J].中國婦產科臨床雜志,2014,15(6):519-522.

[5] 歐陽艷紅.p53和PTEN在子宮內膜癌的表達及其意義[J].西南軍醫,2010,12(3):421-422.

[6] Alkushi A,Lim P,Coldman A,et al.Interpretation of p53 immunoreactivity in endometrial carcinoma: establishing a clinically relevant cut-off level[J].Int J Gynecol Pathol,2004,23(2):129-137.

[7] Mirantes C,Eritja N,Dosil MA,et al.An inducible knockout mouse to model cell autonomous role of PTEN in initiating endometrial，prostate and thyroid neoplasias[J].Dis Model Mech,2013,6(3):710-720.

[8] Li L,Ross AH.Why is PTEN an important tumor suppressor[J].Cell Biochem,2007,102(6):1368-1374.

[9] 張桂香,莊新榮,趙學東.組織芯片技術檢測PTEN、p53及hTERT在Ⅰ型子宮內膜癌中的表達特征[J].中國婦幼保健,2014,29(28):4618-4620.

[10]Lacey JV Jr,Mutter GL,Ronnett BM,et al.PTEN expression in endometrial biopsies as a marker of progression to endometrial carcinoma[J].Cancer Res,2008,68(14):6014-6020.

Correlation Analysis between P53, PTEN and Endometrial Carcinoma Prognosis Factors

WANG Wen-xiang1, ZHONG Lan2, YANG Kai-xuan3, PENG Zhi-lan2

(1.Department of Gynecology and Gynecology Oncology, Central Hospital of Xinxiang, Xinxiang 453000,China; 2. Department of Gynecology, West China Second Hospital, Chengdu 640001,China; 3. Department of Pathology, West China Second Hospital, Chengdu 640001,China)

ObjectiveTo study the relationship between p53 and PTEN and clinicopathological characteristics and prognosis of endometrial carcinoma.MethodsThe clinical and pathological data of 99 patients with endometrial carcinoma were retrospectively analyzed, and the risk factors were classified according to the prognostic factors. The expression of p53 and PTEN in tissues was detected by immunohistochemistry, and the correlation between the expression of p53, PTEN and clinicopathological features and survival rate was analyzed.ResultsThere was significant difference in the overexpression of p53 protein in surgical-pathologic staging (P=0.028). The overexpression of p53 protein was associated with the survival rate on type I endometrial carcinoma, G1+ G2 grade, Ⅰ+ Ⅱ stage, and no metastatic patients. Univariate analysis Log-rank test results showed that histological type and grade, surgical-pathologic stage, lymph node metastasis were associated with survival rate, p53 protein positive overexpression has low survival rate. Pathological staging and p53 protein overexpression were independent prognostic factors of en-dometrial cancer by Cox′s proportional hazard regression model. The expression of PTEN was absent in the later stage and higher grade, and the expression of PTEN was not correlated with histological grade and stage,pathological type and lymph node metastasis. While the loss of PTEN expression was not associated with overexpression of p53 protein(P>0.05).Conclusionp53 protein overexpression was an independent prognostic factor of endometrial carcinoma. The typeⅠendometrial carcinoma, G1+ G2 grade, Ⅰ+ Ⅱ stage, no lymph node metastasis with p53 protein overexpression had lower survival rate. PTEN expression was absent in the worse differentiation and clinical staging, and it was not related to the survival rate in the patients.

endometrial carcinoma；p53；PTEN gene；immunohistochemistry；prognosis

1672-688X(2017)02-0088-04

10.15926/j.cnki.issn1672-688x.2017.02.003

2016-12-09

1. 新鄉市中心醫院婦瘤一科，河南新鄉 453000 2. 四川大學華西第二醫院婦產科，四川成都 640001 3. 四川大學華西第二醫院病理科，四川成都 640001

王文翔(1987—)，女，山西孝義人，主治醫師，從事婦科腫瘤的臨床及基礎研究。

彭芝蘭，女，主任醫師，博士研究生導師，E-mail：pengzhiled@163.com

R711.74

A