白芨組培苗的播種技術研究

黃紅英，顏曉靜，陳英華，陳越峰，唐智超，馮紀南，唐巧燕，鄧斌

（湘南學院化學生物與環境工程學院，湖南郴州423000）

白芨組培苗的播種技術研究

黃紅英，顏曉靜，陳英華，陳越峰，唐智超，馮紀南，唐巧燕，*鄧斌

（湘南學院化學生物與環境工程學院，湖南郴州423000）

采用活性炭粉、面粉、瓊脂粉等材料對白芨種子進行混勻稀釋的方法，選用不同的混合比例設置多種對照進行播種并觀察白芨種子萌發情況。結果表明，白芨種子和瓊脂粉比例1∶3是最佳的混合配方。

白芨；稀釋；萌發

白芨是一種藥用價值極高的蘭科植物[1]，塊莖為我國傳統中藥，具有補肺、止血、消腫、生肌、斂瘡[2]等作用。由于其種子小、無胚乳、自然萌發率低的特點，現今的培育主要依靠原球莖的液體培養、種子無菌播種[3]、利用假鱗莖[4]和愈傷組織[5]等植物組織培養的瓶苗栽培方式。其中，操作最簡便、產出量最大的方法為直接利用種子的無菌播種方法，但是因為白芨種子小而聚集，使得撒種操作時不易分散，所以長出來的瓶苗太過緊湊，長勢不好，只能通過移瓶分株再栽培來彌補，這無疑增加了產業化生產的負擔。因此，白芨組培苗的播種技術研究很有實際意義。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

白芨蒴果，采自宜章縣御仙農業生態有限公司；MS培養基[6]，由實驗室自行配制；活性炭粉、面粉、瓊脂粉，市售。

1.2 儀器

YXQ-LS-50G型立式壓力蒸汽滅菌鍋；SW-CJ-2F型超凈工作臺；AUY200型電子天平。

1.3 試驗方法

1.3.1 MS培養基的配制

配方：1/2MS+1.0mg/LNAA+30 g/L白砂糖+6.0 g/L瓊脂粉，pH值5.8。

1.3.2 種子滅菌

選用未開裂的白芨蒴果，首先用流水沖洗白芨蒴果約30 min，用洗衣粉水刷洗白芨蒴果表面，用蒸餾水沖洗2～3遍。在超凈臺中用75%乙醇消毒30 s，無菌水沖洗1次，再用0.1%的HgCl2水溶液浸泡5 min，期間不停地搖動，使其消毒徹底，用無菌水沖洗5～6次，然后置于干燥的滅菌濾紙上吸盡水分，用解剖刀切開白芨蒴果，取出種子（為避免由于種子選擇不同造成結果誤差，試驗采取將使用的10顆白芨蒴果一起切開后在滅菌培養皿中全部混勻）。

1.3.3 選用不同的材料和比例進行種子稀釋

將取出的白芨種子在無菌操作臺分為大致相等的10份，放入已滅菌的培養皿中。在無菌操作室內根據種子的質量，按照種子∶分散材料=1∶1，1∶2，1∶3的比例逐個稱取活性炭粉、面粉、瓊脂粉，在培養皿中與相對應的種子充分混勻。

近年來，隨著社會轉型的不斷推進，改革進入深水期，與此同時社會矛盾糾紛也呈現多發高發態勢。社會矛盾糾紛的多元化解機制建設呼之欲出，在實踐過程中，調解、仲裁、行政裁決、行政復議、訴訟等多項糾紛解決制度發揮著各自的作用，為多元矛盾糾紛化解機制建構打下堅實基礎。

1.3.4 撒種

將種子分別按1∶1，1∶2，1∶3不同比例與活性炭粉、面粉、瓊脂粉混合均勻，定量接種，使每管混合物中種子數量大致相當，每個培養瓶撒1管種子（為避免撒種環節因操作者不同引起的誤差，本環節由1人操作。）

1.3.5 培養條件

種子播種后移至組培室中培養，培養溫度24± 2℃，光照12 h/d，光照強度2 000～3 000 LX[7]。

2 試驗結果

2.1 對照組的種子萌發

種子播種于培養基15 d后觀察到有萌發的跡象，種子吸脹，由黃褐色變成綠色；20 d時便可觀察到種子變為綠色小球體狀，即原球莖；26 d后原球發出綠色的芽尖；60 d后有種子繼續萌發，有些原球莖再培養，長出了幼葉，同時少數原球莖則會繼續長大但并不分化出幼葉。

2.2 與活性炭粉混勻稀釋的種子萌發

2.3 與面粉混勻稀釋的種子萌發

經過10 d的培養種子開始萌發，但伴隨著大部分的種子造成感染，未感染的23 d后長成原球莖。

2.4 與瓊脂粉混勻稀釋的種子萌發

種子在培養基上進行培養，13 d后種子開始萌發，20 d后原球莖形成，27 d后原球莖逐漸發育2片子葉，60 d后長成株高7～8 cm的幼苗。

不同比例混勻稀釋對種子萌發時間的影響見圖1，不同比例混勻稀釋對植物幼苗生長的影響見圖2。

圖1 不同比例混勻稀釋對種子萌發時間的影響

3 分析討論

由上述結果可以看出，混合不同的物質對種子進行稀釋播種，對種子的萌發率和萌發時間都有一定影響。混合材料為面粉或瓊脂粉的，種子萌發時間較短；混合材料為活性炭粉的，種子萌發時間最長。但面粉為混合材料比例1∶2和1∶3的組大部分造成了感染，而瓊脂粉播種的幾乎無感染現象。原因可能是面粉與瓊脂粉本身含有一定營養，促進了白芨種子的萌發；而活性炭粉可能是吸附了培養基中種子萌發的誘導劑和有機質，從而對種子萌發具有一定的抑制作用。面粉混合物的感染率高，因為它的高營養不僅帶給種子，也給細菌和真菌帶去了營養，造成感染，這種種子較難萌發，而且對失誤率也是考驗。60 d后種子萌發成幼苗，對照組的幼苗緊挨在一起不好分離；混合材料為面粉的長時間后長成坨狀，幼苗也不好分離。而瓊脂粉的小苗分散的最好，比例為1∶3分散效果最好，這樣再進行根的誘導時更容易。通過固體稀釋法把白芨種子按1∶1，1∶2，1∶3的比例混合面粉、活性炭粉和瓊脂粉再進行播種和無菌培養，發現1∶3的白芨種子和瓊脂粉比例白芨瓶苗的生產效果最好，可以減少白芨種子培育時的轉接次數，甚至可以達到一次成苗的效果。

總之，通過對傳統的白芨種子無菌播種育苗技術進行了改進和簡化，減少了移瓶次數，最大限度降低了生產過程中的污染率，減少了種子的萌發時間，提高了萌發率。使用改進后的技術，白芨種子到煉苗只需要120 d左右，節約了生產成本，對促進白芨人工栽培產業發展以及保護野生資源都具有重要的意義。

圖2 不同比例混勻稀釋對植物幼苗生長的影響

[1]葉靜，鄭曉君，管常東.白芨的無菌萌發與組織培養[J].云南大學學報（自然科學版），2010，32（S1）：422-425.

[2]林福林，楊昌云.中藥白芨的現代研究概況[J].中國醫院藥學雜志，2013，33（7）：571-573.

[3]袁寧.白芨組織培養技術體系研究[D].成都：西南交通大學，2008.

[4]李慧敏，楊冠海，李明靜.白芨瓶內假鱗莖誘導研究[J].南方農業學報，2013，44（10）：1 607-1 612.

[5]石云平，趙志國，唐鳳鸞.白芨愈傷組織誘導、增殖與分化研究[J].中草藥，2013，44（3）：349-353.

[6]張燕，黎斌，李思鋒.不同培養基上白芨的種子萌發與幼苗形態發生[J].西北植物學報，2009，29（8）：1 584-1 589.

[7]張建霞，付志惠，李洪林.白芨胚發育與種子萌發的關系[J].亞熱帶植物科學，2005，34（4）：32-35.◇

Study on Sowing Technology to Tissue Culture of Bletilla Striata

HUANG Hongying，YAN Xiaojing，CHEN Yinghua，
CHEN Yuefeng，TANG Zhichao，FENG Ji'nan，TANG Qiaoyan，*DENG Bin（Institute of Chemical Biology and Environmental Engineering，Xiangnan University，Chenzhou，Hu'nan 423000，China）

The materials such as activated carbon powder，flour，agar powder are used to blend with Bletilla seed to dilution. Different mix proportion is chosen to set a variety of controlled plant and observe of Bletilla seed germination.The conclusion is that 1∶3 proportion of agar powder and Bletilla seeds is a blend of the best formula.

Bletilla striata；dilution；germination

S630.5

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.05.022

1671-9646（2017）05a-0073-02

2017-04-01

中南林業科技大學橫向課題（2012XN09）；郴州市科技局項目（CZ2013090）。

黃紅英（1966—），女，碩士，教授，研究方向為植物學。

*通訊作者：鄧斌（1972—），男，博士（后），教授，研究方向為化學、環境及生物教學與研究。