川貝母鑒定方法進展研究

周亭亭??

摘要：目的，比較目前川貝母各種現行質量標準的研究進展。方法，對基源鑒定、性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別和DNA指紋技術分別進行闡述和比較。結果，DNA指紋鑒定技術是一種綜合性的評價方法，與傳統方法相比，在評價川貝母的真偽方面有獨特的優越性，且專屬性強、穩定性高的特點。結論，DNA指紋檢測技術的建立解決了目前我國中藥易混品種難以鑒定的問題，這將對未來中藥質量控制的方法學研究提供嶄新的平臺，也為中藥走向世界提供可信的質量監控技術。

關鍵詞：川貝母 基源鑒定 性狀鑒別 顯微鑒別 理化鑒別 DNA指紋鑒定法

中圖分類號：R282文獻標識碼：A文章編號：1009-5349（2017）11-0192-02

川貝母（Fritillariae Cirrhosae Bulbus），味苦、甘，微寒，歸肺、心經。具有潤肺散結、止咳化痰等功效，可用于治療虛勞咳嗽、吐痰咯血等癥。其來源于百合科植物卷葉貝母（Fritillaria Cirrhosa D.Don）、暗紫貝母（Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia）、甘肅貝母（Fritillaria przewalskii Maxim）或梭砂貝母（Fritillaria delavayi Franch）的干燥鱗莖，其商品名分別被稱為“松貝母”“青貝母”及“爐貝母”。主產于我國四川、云南及甘肅等地。[1]川貝母是我國極為重要的名貴中藥材，歷史悠久、療效確切，因此臨床應用十分廣泛。但由于貝母屬植物多達60余種，同科屬品種較多，種間變異復雜，名稱也相似，而正品川貝母多為野生，資源珍稀，且價格昂貴，故市場上偽品、混品較多，以假亂真、以次充好的現象層出不窮，嚴重影響中藥材川貝母的市場秩序。川貝母價格昂貴，且年產量較低，故川貝母的化學成分研究文獻報道不多，主要的有效成分是貝母甲素、貝母乙素等生物堿。[2]中藥材川貝母的現行質量評價方法很多，但是都存在各自的局限性。

一、基源鑒定

基源鑒定又稱為來源鑒定，是一種應用動、植物的分類學知識，對中藥材的來源進行辨別的方法。基源鑒定是通過觀察觀察樣品形態、核對文獻、核對標本等對樣品進行鑒定。閻博華等[3]從古代文獻和現代文獻兩方面進行了川貝母基源考證，對形成正宗川產地道藥材具有極其深遠的意義。對于現在中藥材的生產以及開發利用，基源鑒定無疑提供了十分可靠的依據。但這種鑒定方法存在較大的局限性和片面性，尤其是對于近緣物種、易混淆品種的區分。

二、性狀鑒別

性狀鑒別也是較為傳統的一種方法，是通過對中藥材樣品的質地、色澤、外觀形態等感觀特征進行綜合判斷進而確定藥材真偽。姜碧清[4]應用此法將川貝母及其類似品、混淆品、偽品的性狀特征進行了整理。劉紅延[5]用此經典方法成功將正品川貝母與其常見偽品一輪貝母、光慈姑、及東小貝的主要性狀差異觀察出來。性狀鑒別的鑒定十分快速，但是其結果的準確性主要取決于鑒定者的經驗，客觀性不強。故對于像川貝母這樣近緣物種繁多的中藥材品種并不適用，且對于破碎、粉末或腐爛的樣品無法鑒別。

三、顯微鑒別

顯微鑒別是一種歷史較為悠久的鑒定中藥材品質的方法，是通過仔細觀察樣品的內部組織構造的特征來完成的。中藥材川貝母顯微鑒別主要有兩種，一種是以淀粉粒為主，另一種鑒別特征是以鱗葉上（內）表皮為主。[6]高慶凌[7]采用顯微鑒別對梭砂貝母、湖北貝母、浙貝、東貝母和平貝母的表皮進行了研究。但是此法需要破壞樣品，并且該方法不能揭示細胞內在的信息，因此無法完成近源物種的鑒別。

四、理化鑒別

理化鑒別方法主要是評價中藥材的質量優劣，可以做到定性分析也可以做到定量分析。主要是針對中藥材供試品的有效化學成分進行分析。對于那些同名異物的中藥材或者性狀非常相似又不能用其他方法鑒別的情況，又或者是含有不同種類化學成分的中藥材樣品，均應選擇此法進行分析和評價。

薄層色譜法是應用最為廣泛的一種方法，其重現性良好，但對于川貝母這種正偽品成分相似的中藥材，會產生鑒別困難的情況。黃小鷗[8]等以貝母甲素、貝母乙素及西貝堿為依據，建立了浙貝母、湖北貝母和平貝母等的薄層色譜方法。紅外光譜是根據不同成分的特殊吸收峰作為判定依據，此法主要優點是不破壞樣品、所提供的信息量大。楊復森[9]應用近紅外光譜儀采集光譜，對貝母類藥材、川貝母類藥材及商品 “松貝”及其偽品進行快速鑒別。高效液相色譜法的檢測靈敏度較高，一般用于含量測定，但分析成本以及儀器的日常維護費用都很高。皮慧芳等[10]應用高相液相色譜法進行了研究，得出以下結論：湖北貝母花與鱗莖當中生物堿成分的區別，并研究出花與鱗莖中湖貝甲素和浙貝甲素的含量高低有很大不同。

五、DNA指紋鑒定法

近年來，應用分子生物學方法鑒定中藥材的報道越來越多，PCR、RAPD、RFLP等技術越來越被大家所熟知。川貝母是一種種間變異小、亞種極多且受地域等生長環境影響較大的中藥材，而其藥用價值極高，治療效果也得到臨床認可，因此市場上偽品、混品較多，以假亂真、以次充好的現象層出不窮，嚴重影響中藥材川貝母的市場秩序，造成患者用藥安全隱患。應用DNA指紋鑒定技術鑒定川貝母真偽的報道很少，2010版《中國藥典》增補本將此方法作為川貝母的國家鑒定標準，足見DNA指紋鑒定技術的優越性。用DNA指紋鑒定技術進行川貝母的鑒定不僅專屬性強，穩定性也極高。DNA指紋鑒定技術專屬性高，靈敏度好。因為這種方法是上升到分子水平對川貝母樣品進行分析和評價。主要用到的分子生物學技術為PCR技術。譚瑩等[1]應用聚合酶鏈式反應等技術對川貝母進行了系統性的研究，建立了川貝母DNA指紋鑒定方法，為川貝母與其偽品的鑒定和分析提供了科學依據，也為川貝母當前混亂的市場提供了技術保障。李明成等[11]探討了貂心mtDNA（線粒體DNA）的特征，并建立了貂心脫氧核糖核酸指紋特征鑒定方法；谷玉娟等[12]比較了鹿茸特異性引物鑒別和隨機擴增多態DNA（RAPD）鑒別；劉桐輝等[13]比較了鹽析法及酚-氯仿抽提法提取龜甲mtDNA的優缺點，建立了中藥材龜甲DNA分子標記鑒定方法。

DNA指紋鑒定技術就是這樣一種綜合性的評價方法，與傳統方法相比，在評價藥物的真偽方面有獨特的優越性。這種方法的建立解決了目前我國中藥易混品種難以鑒定的問題，這將對未來中藥質量控制的方法學研究提供嶄新的平臺，也為中藥走向世界提供可信的質量監控技術。該法可廣泛地推廣應用到我國藥品生產和檢驗的基層單位，進而規范中藥材市場，保障患者的用藥安全。

參考文獻：

[1]譚瑩，張麗華，李明成，王冰梅.中藥材川貝母DNA指紋鑒定研究[J].中國藥學雜志，2011（1）：14-16.

[2]曹新偉，張萌，李軍，肖培根，陳四保，陳士林.川貝母生物堿類成分的研究[J].中草藥，2009（1）：15-17.

[3]閻博華，豐芬，邵明義，曾潔萍.川貝母基源本草考證[J].中醫研究 2010（3）：69-71.

[4]姜碧清.川貝母及其類似品、混淆品、偽品的性狀鑒別特征[J].中國藥業，2010（14）：73.

[5]劉紅延.川貝母及常見偽品性狀鑒別[J].時珍國醫國藥，2004（9）：639.

[6]張榮發.川貝母的研究進展[J].中國藥業，2006（8）：62-64.

[7]高慶凌.幾種貝母表皮的顯微特征[J].中材，1989（5）：24-25.

[8]黃小鷗，莫可豐，何報作，陳小波，陸神義.5種貝母類藥材的定性鑒別[J].中國藥房，2009（21）：1654-1656.

[9]楊復森，武衛紅.川貝母品質評價方法研究進展[J].齊魯藥事，2012，v.3104：228-230+241.

[10]皮慧芳，張久亮，吳廣，阮漢利，張勇慧，吳繼洲.高效液相色譜法分析湖北貝母花中生物堿成分[J].中國醫院藥學2007（8）：1078-1080.

[11]Zhang Li-hua，YANG Ming-yan，WANG Bing-mei，et al.Application of Molecular biology techniques on the identification of Martes zibellina L.hearts and its counterfeits[c].CNPTM09，2009：448-451.

[12]谷玉娟，張麗華，傅桂蓮.鹿茸線粒體DNA的指紋鑒定研究[J].中國藥學雜志，2013（3）：170-173.

[13]劉桐輝，王錦，李明成，張麗華，王淼.中藥材龜甲細胞色素b基因特異性鑒定研究[J].中國藥學雜志，2012（3）：182-185.

責任編輯：孫瑤