EMP2、TTF-1在子宮內膜增生癥和子宮內膜樣腺癌中的表達及意義

何惠嫦，黃瑾，陳應智，高海洋，相媛媛

(中山市人民醫院婦科1、病理科2，廣東中山528400)

EMP2、TTF-1在子宮內膜增生癥和子宮內膜樣腺癌中的表達及意義

何惠嫦1，黃瑾1，陳應智2，高海洋1，相媛媛1

(中山市人民醫院婦科1、病理科2，廣東中山528400)

目的探討上皮膜蛋白2(EMP2)與甲狀腺轉錄因子1(TTF-1)在子宮內膜增生癥和子宮內膜樣腺癌中的表達及其臨床意義。方法選取1990年1月至2014年10月間在中山市人民醫院婦科就診、起初病理診斷為子宮內膜增生癥(包括單純型、復雜型、不典型增生)，經過10年隨訪發展和沒有發展為子宮內膜癌的患者標本107例，其中正常子宮內膜標本28例，子宮內膜增生癥癌變標本51例，子宮內膜癌標本28例，應用免疫組化S-P法檢測各組標本中EMP2、TTF-1表達情況。結果在正常增生期子宮內膜、子宮內膜增生癥、子宮內膜樣腺癌組織中EMP2蛋白的陽性表達率分別為10.7%、33.3%、82.1%，依次遞增，TTF-1的陽性表達率分別67.9%、45.1%、35.7%，依次遞減，差異均有統計學意義(P?0.05)；EMP2陽性者的比例隨手術病理分期、組織病理分級的升高而增加，差異有統計學意義(P?0.05)，而TTF-1陽性者的比例隨手術病理分期、組織病理分級的升高而逐漸下降，差異有統計學意義(P?0.05)。結論EMP2、TTF-1可能參與子宮內膜增生發展至子宮內膜癌的過程，對子宮內膜癌的早期診斷及預測預后有一定的價值。

上皮膜蛋白2；甲狀腺轉錄因子1；子宮內膜癌；子宮內膜增生癥；子宮內膜增生癥癌變；免疫組織化學

子宮內膜癌是女性生殖系統常見的三大惡性腫瘤之一，其中以子宮內膜樣腺癌最常見，且子宮內膜癌的發病率有升高和年輕化趨勢。子宮內膜腺癌發病的分子機制尚不明確，我們通過免疫組化SP法檢測子宮內膜樣腺癌及子宮內膜增生癥、正常子宮內膜組織中EMP2、TTF-1的表達，探討兩者在子宮內膜樣腺癌發病過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取1990年1月至2014年10月間在中山市人民醫院婦科因異常陰道出血行診刮病理診斷為子宮內膜增殖癥的患者107例，10年隨訪期間按因再次異常陰道出血而診刮術或因子宮良性病變行全子宮切除術的內膜病理檢查結果分組，其中正常子宮內膜組28例(空白對照組)，年齡31～54歲，中位年齡45歲；子宮內膜增生組(包括單純型增生、復雜型增生、不典型增生)51例，年齡25～45歲，中位年齡37歲；子宮內膜癌組28例，年齡31～64歲，中位年齡52歲。所有患者均有完整的臨床資料和存檔石蠟塊，術前均未接受放療或化療，且所有患者在年齡等因素方面比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法EMP2鼠抗人單克隆抗體、TTF-鼠抗人單克隆抗體、SP免疫組化染色試劑盒購自福州邁新生物有限技術公司，應用免疫組化S-P法檢測上述2組患者組織標本EMP2和TTF-1的表達情況。

1.3 結果判定PBS代替一抗為陰性對照。每張切片選10個高倍視野，每高倍視野記數100個正常細胞或瘤細胞消門EMP2陽性表達定位于胞質和胞膜。TTF-1陽性表達定位于胞核。免疫組化結果經2名病理醫師分別閱片和評分，結果一致方作為最后結果。免疫組化評分標準[1]：分別為陽性強度評分：無著色0分，淺黃1分，棕黃色2分，棕黑色3分；陽性細胞占所有細胞的比例評分：?5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。將兩項乘積分別評價：9～12分者為強陽性表達，4～8分者為弱陽性表達，0～3分者為陰性表達。強陽性及弱陽性均按陽性處理。

1.4 統計學方法應用SPSS13.0統計軟件進行數據分析，計數資料均采用χ2檢驗和Fisher確切概率法，均為雙側檢驗，以P?0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 EMP2、TTF-1在不同子宮內膜組織中的表達在正常增生期子宮內膜、子宮內膜增生癥、子宮內膜腺癌組織中EMP2蛋白的陽性表達率依次遞增(圖1、圖2)，TTF-1的陽性表達率依次遞減(圖3、圖4)。三種不同病理類型的子宮內膜組織中EMP2和TTF-1陽性表達率比較差異均有統計學意義(χ2= 31.62，6.27，P?0.05)，見表1。

2.2 EMP2在不同期別子宮內膜癌組織中的表達EMP2在晚期(Ⅲ～Ⅳ期)子宮內膜癌組織中的陽性表達率比早期(Ⅰ～Ⅱ期)稍高，G3～G2的陽性表達率比G1高，有淋巴結轉移者的陽性表達率比無淋巴結轉移者高，深肌層浸潤者的陽性表達率比無深肌層浸潤者高，以上各項指標比較差異均有統計學意義(χ2= 31.62，P?0.05)，見表2。

圖1 增生期子宮內膜EMP2弱陽性表達(×200)

圖2 子宮內膜癌EMP2強陽性表達(×200)

圖3 單純性子宮內膜增殖TTF1表達(×200)

圖4 子宮內膜癌TTF1弱陽性表達(×200)

2.3 TTF-1在不同期別子宮內膜癌組織中的表達TTF-1在晚期(Ⅲ～Ⅳ期)子宮內膜癌組織中的陽性表達率比早期(Ⅰ～Ⅱ期)低，G3～G2的陽性表達率比G1低，有淋巴結轉移和深肌層浸潤者的陽性表達率比無淋巴結轉移者低，深肌層浸潤者的陽性表達率比無深肌層浸潤者低，以上各項指標比較差異均有統計學意義(χ2=6.27，P?0.05)，見表3。

表1 三種不同病理類型的子宮內膜組織中EMP2和TTF-1陽性表達

表2 EMP2表達與子宮內膜患者臨床病例參數的關系（例）

表3 TTF-1表達與子宮內膜癌患者臨床病理參數的關系(例)

3 討論

3.1 子宮內膜增生與子宮內膜癌的關系子宮內膜增生癥包括單純型子宮內膜增生、復雜型子宮內膜增生、不典型子宮內膜增生，其中不典型子宮內膜增生屬癌前病變。子宮內膜增生癥發病率高于子宮內膜癌，若不治療，部分子宮內膜增生癥會緩慢發展成子宮內膜癌。Kurman等[2]研究發現單純型增生、復雜型增生、不典型增生惡變率分別為1%、3%、29%；子宮內膜癌占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%，近年來發病率有上升趨勢，已接近甚至超過宮頸癌發病率[3-5]。子宮內膜癌的確切病因尚不清楚，目前認為子宮內膜癌可能有兩種發病類型：雌激素依賴型和非雌激素依賴型。前一種類型占子宮內膜癌的大多數，均為子宮內膜樣腺癌，它的發生可能是在無孕激素拮抗的雌激素長期作用下發生子宮內膜異常增生甚至癌變，盡早發現子宮內膜增生發展子宮內膜樣腺癌的高風險人群，并作出相應激素治療及隨訪管理，有望降低子宮內膜樣腺癌的發病率或早期發現子宮內膜癌。

3.2 EMP2與子宮內膜增生、子宮內膜癌的關系EMP2是一種原癌基因產物，是含有167個氨基酸的多通道蛋白，屬于GAS3/PMP22(生長停滯特異性-3/外周髓鞘蛋白22)家族，定位于細胞質和細胞膜，作為一種細胞表面的連接受體，EMP2參與細胞與細胞之間的信號傳導，參與細胞的轉錄，主要通過調節某種特定信號復合物的活性來發揮作用[6-7]，從而引起細胞增殖失控，凋亡受阻，導致腫瘤發生。Habeeb等[8]和Freije等[9]研究發現在子宮內膜癌、卵巢癌、神經膠質瘤多種腫瘤中都有EMP2的超表達，并且EMP2表達的失控可能還與腫瘤的進展、惡化、預后有一定的相關性。在子宮內膜癌，EMP2通過調節血管表面生長因子的產生來影響腫瘤組織的血管再生，從而促進腫瘤生長。提示EMP2可作為子宮內膜癌預后的一個良好的預測指標。

本研究中EMP2在正常子宮內膜中低表達，陽性率只有10.7%，在子宮內膜增生癥組表達水平稍升高為33.3%，在子宮內膜癌中進一步升高，陽性率達82.1%。在子宮內膜癌患者中，隨著手術病理分期越晚、細胞組織學分級越高EMP2的陽性表達率越高，有淋巴結轉移、深肌層浸潤患者的EMP2陽性率較無淋巴結轉移和無深肌層浸潤患者的高。提示子宮內膜增生癥發展到子宮內膜癌的過程中EMP2可能起著某種促進作用。

3.3 TTF-1與子宮內膜增生癥癌變的關系TTF-1作為一種抑癌基因產物，是DNA連接蛋白，含有371個氨基酸，是相對分子量為38 kDa的核蛋白，在1989年Civitareale等[10]通過動物實驗發現TTF-1可以調節甲狀腺球蛋白基因的特異性表達，為甲狀腺球蛋白的特異性轉錄因子，從而命名為甲狀腺轉錄因子-1。Myong等[11]研究發現，TTF-1表達與細胞增殖抗原(Ki67)表達呈負性相關，意味著TTF-1表達水平越高，瘤細胞增殖率越低，提示患者的預后越好。Zhang等[12]首先發現了在正常子宮內膜組織中TTF-1的陽性表達。Sullivan等[13]研究表明，TTF-1陽性表達可以降低子宮內膜組織發展為子宮內膜癌的概率。這些研究結果表明，TTF-1在正常子宮內膜或子宮內膜增殖癥癌變的過程中起到了一定作用。

本研究中，TTF-1在正常子宮內膜中高表達，陽性率為67.9%，在子宮內膜增生癥組表達水平稍下降，陽性率為45.1%，在子宮內膜癌中的陽性率進一步下降，陽性率為35.7%。在子宮內膜癌患者中，隨著手術病理分期越晚、細胞組織學分級越高TTF-1的陰性表達率越高，有淋巴結轉移、深肌層浸潤患者的TTF-1陰性率較無淋巴結轉移和無深肌層浸潤患者的高。這些結果提示TTF-1可能參與了癌變過程，與子宮內膜癌的侵襲、轉移有關，并且在子宮內膜增殖癥癌變的過程中起到了抑制作用。

綜上所述，EMP2、TTF-1在正常子宮內膜、子宮內膜增生癥、子宮內膜癌中的表達分別呈階梯型升高和階梯型降低，表明兩者可能參與了子宮內內膜癌的發生發展過程，對子宮內膜癌的早期診斷及預測預后有一定的價值。有望成為新的分子導向治療靶點。EMP2、TTF-1有助于我們區分出在子宮內膜增殖癥患者中哪些屬于可能發生癌變的高風險人群，尤其是對育齡期子宮內膜增生癥的患者，幫助這些患者選擇一種最合適的治療方案。

[1]Morales SA,Mareninov S,Prasad P,et al.Collagen gel contraction by ARPE-19 is mediated by a FAK-Src dependent pathway[J].Exp Eye Res,2007,85(6)：790-798.

[2]Kurman RJ,McConnell TG.Characterization and comparison of precursors of ovarian and endometrial carcinoma：partsⅠandⅡ.[J]. Int J Surg Pathol,2010,18(3 Suppl)：181S-189S.

[3]謝幸,茍文麗.婦產科學[M].8版.人民衛生出版社,2013：313.

[4]Creasman WT,Odicino F,Maisonneuve P,et al.Carcinoma of the corpus uteri[J].J Epidemiol Biostat,2001,6(1)：47-86.

[5]Denschlag D,Tan L,Patel S,et al.StageⅢendometrial cancer：preoperative predictability,prognostic factors,and treatment outcome [J].Am J Obestet Gynecol,2007,196(6)：546.

[6]Fu M,Rao R,Sudhakar D,et al.Epithelial membrane protein-2 promotes endometrial tumor formation through activation of FAK and Src[J].PLoS One,2011,6(5)：e19945.

[7]Morales SA,Mareninov S,Coulam P,et al.Functional consequences of interactions between FAK and epithelial membrane protein 2 (EMP2)[J].Invest Ophthalmol Vis Sci,2009,50(10)：4949-4956.

[8]Habeeb O,Goodglick L,Soslow RA,et al.Epithelial membrane protein-2 expression is an early predictor lr endometrial cancer development[J].Cancer,2010,116(20)：4718-4726.

[9]Freije WA,Castro-Vargas FE,Fang Z,et al.Gene expression profiling of gliomas strongly predicts survival[J].Cancer Res,2004,64 (18)：6503-6510.

[10]Civitareale D,Lonigro R,Sinclair AJ,et al.A thyroid-specific nuclear protein essential for tissue-specific expression of the thyroglobulin promoter[J].EMBO J,1989,8(9)：2537-2542.

[11]Myong NH.Thyroid transcription factor-1(TTF-1)expression in human lung carcinomas：its prognostic implication and relationship with wxpressions of p53 and Ki-67 proteins[J].J Korean Med Sci, 2003,18(4)：494-500.

[12]Zhang PJ,Gao HG,Pasha TL,et al.TTF-1 expression in ovarian and uterine epithelial neoplasia and its potential significance,an immunohistochemical assessment with multiple monoclonal antibodies and different secondary detection systems[J].Int J Gynecol Pathol,2009, 28(1)：10-18.

[13]Sullivan PS,Maresh EL,Seligson DB,et al.Expression of thyroid transcription factor-1 in normal endometrium is associated with risk of endometrial cancer development[J].Mod Pathol,2012,25(8)：1140-1148.

Expression and clinical significance of EMP2 and TTF-1 in endometrial hyperplasia and endometrial adenocarcinoma.

HE Hui-chang1,HUANG Jin1,CHEN Ying-zhi2,GAO Hai-yang1,XIANG Yuan-yuan1.
Department of Gynecology1,Department of Pathology2,Zhongshan People's Hospital,Zhongshan 528400,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of epithelial membrane protein-2(EMP2)and thyroid transcription factor-1(TTF-1)in endometrial hyperplasia and endometrial adenocarcinoma.MethodsA total of 107 cases of patients,who admitted to Department of Gynecology of Zhongshan People’s Hospital and initially confirmed as by endometrial hyperplasia(including simple hyperplasia,complex hyperplasia,atypical hyperplasia)by pathology diagnosis from January 1990 to October 2014,were selected as the research subjects.After ten years of clinical follow-up,among of 107 cases of specimens,there were 28 cases of normal endometrial specimens,51 cases of endometrial hyperplasia specimens,28 cases of endometrial adenocarcinoma.The expression of EMP2 and TTF-1 were detected by immunohistochemical S-P method.ResultsThe positive expression rate of EMP2 in normal proliferative endometrium,endometrial hyperplasia(simple hyperplasia,complex hyperplasia,atypical hyperplasia),and endometrial adenocarcinoma tissue were 10.7%,33.3%and 82.1%,respectively,with an increasing trend;the positive expression rate of TTF-1 in three different tissues were 67.9%,45.1%and 35.7%,respectively,with a decreasing trend (P?0.05).The proportion of EMP2 positive patients increased with increase of surgical pathology and histopathological grade(P?0.05),while the proportion of TTF-1 positive patients decreased with increase of surgical pathology and histopathological grade(P?0.05).ConclusionEMP2 and TTF-1 may be involved in the occurrence and development from endometrial hyperplasia to endometrial carcinoma,which may be valuable for the early diagnosis and prognosis of endometrial carcinoma.

Epithelial membrane protein-2(EMP2);Thyroid transcription factor-1(TTF-1);Endometrial cancer;Endometrial hyperplasia;Cancerous endometrial hyperplasia;Immunohistochemistry

R737.33

A

1003—6350（2017）11—1732—04

2016-08-10)

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.11.004

廣東省中山市科技計劃局項目(編號：20132A080)

何惠嫦。E-mail：huhehuichang@163.com