原發性血小板增多癥的相關基因在維、哈、漢族患者中的基因表達及臨床意義

秦玉婷，尼羅帕爾?吐爾遜，郝建萍

（新疆醫科大學第一附屬醫院血液病中心二病區，新疆 烏魯木齊 830054）

原發性血小板增多癥的相關基因在維、哈、漢族患者中的基因表達及臨床意義

秦玉婷，尼羅帕爾?吐爾遜，郝建萍*

（新疆醫科大學第一附屬醫院血液病中心二病區，新疆 烏魯木齊 830054）

目的 探討原發性血小板增多癥（ET）的JAK2、CALR及MPL基因在維吾爾族、哈薩克族、漢族患者中的基因表達及臨床意義。方法 選取2015年7月～2017年2月新疆醫科大學第一附屬醫院收治的維族、哈族、漢族的ET患者96例作為ET組，選擇同期健康體檢者20例為健康對照組，比較不同民族ET患者骨髓或外周血JAK2、CALR及MPL基因表達的變化。結果 ET組患者JAK2、CALR、MPL基因陽性表達率均高于對照組，（P＜0.05）；漢族JAK2、CALR、MPL基因陽性率均高于維族和哈族，差異有統計學意義（P＜0.05），而維、哈族的三項基因陽性率比較差異小，差異無統計學意義（P＞0.05），JAK2同時陽性表達均高于CALE及MPL的陽性表達率，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 JAK2、CALR、MPL基因是ET患者的分子標志物，且在漢族血統中陽性表達更加明顯，維、哈族以JAK2基因陽性表達為主，是其主要的分子標志物。

ET；JAK2、CALR、MPL基因；臨床意義

ET是以骨髓中巨核細胞異常增生，外周血小板升高，且功能發生異常為主要表現的骨髓增殖性腫瘤[1]。維吾爾族、哈薩克族是新疆的主體少數民族，除了顯著的地域分布差異外，民族分布差異也是其主要的流行病學特征之一。ET發生率為1.5/10萬，近年來隨著ET診斷標準中較低的血小板計數閾值、檢測水平的提高以及人們就診意識的增加，ET發病率呈升高趨勢。本研究利用新疆地域和民族的優勢，檢測維族、哈族、漢族ET患者JAK2、CALR、MPL基因突變，分析維、哈、漢ET患者JAK2、CALR、MPL基因的表達及臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年7月～2017年2月新疆醫科大學第一附屬醫院收治的維族、哈族、漢族的ET患者96例作為ET組，每個民族各32例患者，其中維族男20例，女12例，平均年齡（63.01±5.57）歲；哈族男21例，女11例，平均年齡（63.17±4.96）歲；漢族男19例，女13例，平均年齡（63.20±4.87）歲。同期采取自愿原則選擇在我院體檢的健康體檢者20例作為健康對照組，其中男14例，女6例，平均年齡（63.65±5.24）歲，不同民族及分組患者的一般資料比較差異小，（P＞0.05）。

1.2 方法

抽取受試者骨髓或者外周液2 mL，應用鹽析法提取白細胞基因組DNA。合理調整DNA的終濃度為：100～200 mg/L。PCR擴增參考Steensma等方法進行引物的設計和PCR的檢測，分別檢測維族、哈族、漢族ET患者及對照組健康體檢者的JAK2、CALR、MPL基因突變情況。

1.3 統計學方法

采用SPSS 16.0統計軟件，以（P＜0.05）為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組的JAK2、CALR、MPL基因陽性表達情況

ET組患者JAK2、CALR、MPL基因陽性表達率均高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），表1。

表1 ET患者JAK2、CALR、MPL基因陽性表達情況 [n（%）]

2.2 不同民族JAK2、CALR、MPL基因陽性表達情況

漢族JAK2、CALR、MPL基因陽性率均高于維族和哈族，差異有統計學意義（P＜0.05），而維族和哈族JAK2、CALR、MPL基因陽性率比較，差異無統計學意義（P＞0.05），JAK2同時陽性表達均高于CALE及MPL的陽性表達率，差異有統計學意義（P＜0.05），表2。

表2 不同民族ET患者JAK2、CALR、MPL基因陽性表達情況比較 [n（%）]

3 討 論

ET是骨髓增殖性腫瘤中的一種，臨床主要表現為出血傾向、血栓塞以及脾臟腫大等癥狀。近幾年來，ET發病率持續走高，除與發病人數增加有關外，還可能與血細胞自動計數儀的廣泛應用，以及2008年世界衛生組織對ET診斷標準提出的較低血小板計數閾值及JAK2基因突變普查等因素有關，使大量未有顯著臨床表現ET患者能夠早期被發現及明確診斷[2]。

ET的發生受多種致病因素影響，然而基因突變是其發病機制中的重要環節之一，也是ET患者的重要診斷依據及患者預后的重要評價指標之一。大量的基礎及臨床研究顯示，約有50%以上ET患者存在JAK2 V617F突變，3%～5%存在MPL W515K基因突變，然而大量研究發現[3,4]，僅JAK2 V617F突變陽性及MPL W515K突變陽性未能對所有ET患者的發病原因進行明確解釋，有一半以上的ET患者未發現以上兩種基因突變。近年來，隨著分子生物學的快速發展以及二代測序技術在臨床中的大量應用，于2013年國外研究者在JAK2 V617F及MPLW515K基因陰性的ET患者外周血的CALR基因9號外顯子區檢測到了高頻突變，檢出率高達60%以上。CALR基因是由8個內含子和9個外顯子構成，定位在人染色體的19p13.2，主要存在于真核細胞內質網中的鈣離子結合蛋白，對維持細胞內鈣離子穩態發揮著重要的作用，同時CALR基因可以與糖皮質激素蛋白受體、雄激素受體等核激素受體相結合，發揮調節基因轉錄、協助蛋白質加工折疊、抑制腫瘤血管新生、參與抗原遞呈以及細胞凋亡等作用。

新疆地區以維族、哈族為主，許多研究證實新疆地區因地域分布的不同以及民族分布的差異使主要的流行病學特征也與漢族存在較大差異。維族、哈族繼承了突厥血統，而突厥是黃白混血人種，有其特殊的遺傳因素、文化差異和生活習慣。本研究中，ET組患者JAK2、CALR、MPL基因陽性表達率均顯著高于對照組，表明JAK2、CALR、MPL基因陽性表達是ET診斷的主要分子標準物，其中以JAK2陽性表達率最高。患者未表現為兩種及以上基因表達陽性。同時維族、哈族及漢族ET患者JAK2、CALR、MPL基因陽性表達比較結果顯示，漢族JAK2、CALR、MPL基因陽性率均顯著高于維族和哈族，而維族和哈族JAK2、CALR、MPL基因陽性率比較差異小，表明JAK2、CALR、MPL基因陽性表達在漢族ET患者中突變更顯著，而在維族和哈族突變率相對較低，且維、哈族JAK2基因陽性表達高于CALR、MPL基因。這可能是因維族和哈族與漢族存在較大的地域及種族差異，而維族和哈族均來源于突厥血統，二者種族及地域差異不大故三種基因陽性表達率相似。

綜合上述研究，JAK2、CALR、MPL基因是ET患者的分子標志物，且在漢族血統中陽性表達更加明顯，而且維、哈族以JAK2基因陽性表達為主，是其主要的分子標志物。本研究比較了維族、哈族以及漢族ET患者JAK2、CALR、MPL基因突變情況，彌補了以往研究的不足，對于維、哈族ET患者的早期診斷及早期治療、減少出血與栓塞的發生率及致殘率有重要意義。

[1] 康志華.骨髓增殖性腫瘤的分子標志研究進展[J].中華檢驗醫學雜志,2011,34:5-9.

[2] 許 笑.原發性血小板增多癥及原發性骨髓纖維化患者MPL515突變的篩查[J].中華檢驗醫學雜志,2012,35(7):634-635.

[3] 張修文.150例原發性血小板增多癥患者CALR基因突變檢測及臨床觀察[J].中華血液學雜志,2015,36(5):378-381.

[4] 姜乃可.骨髓增生異常綜合征患者IDH、JAK2、FLT3 NPMI和c-KIT基因突變的綜合檢測與分析[J].中華血液學雜志,2012,33(7):578-581.

本文編輯：吳玲麗

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ISSN.2095-8242.2017.018.3438.02

一附院自然青年基金資助（20152RQN21）

郝建萍