蛋白芯片技術聯合結核菌素試驗對痰陰肺結核病快速診斷的價值研究

劉漢群

(英德市慢性病防治醫院結核科，廣東 英德 513000 )

目前，結核病是一種感染性疾病，且在全球內均具有威脅性。其中所有結核病患者中痰結核分枝桿菌涂片陰性肺結核患者所占比例最高[1]。臨床上快速、準確診斷結核病有利于病情的及時診斷和治療。目前，常用的臨床診斷方式分別為蛋白芯片技術、PPD試驗，本次我院特選取近一年來就診痰菌涂陰性肺結核患者臨床資料加以探究分析，最終結果匯報如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料

經數字表法隨機選取2014-03—2015-03間到英德市慢性病防治醫院就診痰菌涂陰性肺結核患者150例，按照隨機數字表的方法分為對照組A、對照組B和觀察組，每組50例。對照組A患者50例包括男27例，女23例，患者患病年齡19～68歲，平均患病年齡(45.9±6.7)歲；對照組B患者50例包括男28例，女22例，患者患病年齡20～68歲，平均患病年齡(45.8±6.9)歲；觀察組50例包括男26例，女24例，患者患病年齡19～67歲，平均患病年齡(44.9±6.5)歲。兩組入選的患者入選前均經患者及其家屬同意，并簽訂《知情同意書》，上報我院醫學倫理委員會獲得批準，同時兩組患者在臨床資料方面有可比性，差異無統計學意義(P<0.05)。

1.2 方法

對照組A：所有患者使用結核蛋白芯片進行臨床診斷，采取患者靜脈血，然后進行血清分離處理。使用結核芯片系統以及蛋白芯片閱讀儀( 生產廠家：南京大淵生物技術工程有限公司)，操作過程嚴格按照說明書指示進行：加入 4滴 A 試劑于芯片盒窗口內,完全浸濕膜后,室溫放置 1 min ,加入待檢測的血清 100 μl,完全滲入后再滴加6滴 B試劑，滲入后，再滴加10滴 C試劑，滲入后，最后再滴加6滴 D試劑 。待反應結束后 30 min 內,放置蛋白檢測芯片于芯片閱讀儀，加以檢測分析。并按照儀器廠家的說明設置參數后對檢查結果進行自動判別。使用結核生物蛋白芯片試劑盒(南京大淵生物技術工程有限責任公司提供)16kDa、38 kDa以及LAM3種特異性抗原進行檢測，仍有一種抗體檢測結果為陽性，則最終結果為陽性；如果3種抗體均為陰性，則最終結果判定為陰性。對照組B：所有患者臨床診斷方式為PPD皮試:采用衛生部藥品生物制品鑒定所生產的結核蛋白芯片診斷聯合PPD試驗，PPD試驗即使用比例為1:2500的PPD 稀釋液，在患者左前臂下 1/3掌側位置處注入 0.1 mL，在注入后72小時之內測量局部硬結，平均直徑在25mm以上則表示檢查結果為陽性。觀察組：聯合如上兩種檢查方式。

1.3 觀察指標

觀察和比較三組檢查的陽性檢出率、靈敏度和特異度。

1.4 統計學方法

采用SPSS11.0軟件進行統計學處理。計數資料采用例數和百分比(%)表示，組間比較采用χ2檢驗,以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組陽性患者疾病的陽性檢出率

對照組A、對照組B和觀察組陽性檢出率分別為54.00%、52.00%、80.00%，觀察組的陽性檢出率顯著高于其他兩組的陽性檢出率，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1：

表1 兩組陽性患者疾病的陽性檢出率

2.2 特異度和靈敏度的統計與比較

對照組A靈敏度為64.29%，特異度為87.50%；對照組B靈敏度為61.90%，特異度為75.00%；觀察組靈敏度95.24%，特異度87.50%；觀察組的靈敏度明顯高于對照組A、對照組B(P<0.05)，但觀察組的特異度與對照組A、對照組B相比無明顯差異(P>0.05)。詳見表2。

表2 三組檢測特異度和靈敏度比較

注：對照組A與觀察組靈敏度比較(χ2=10.620，P=0.001)，特異度比較(χ2=0.000，P=1.000)。對照組B與觀察組靈敏度比較(χ2=11.949，P=0.001)，特異度比較(χ2=0.000，P=1.000)。

3 討論

肺結核患者臨床診斷的最常用的檢查手段為PPD結核菌素試驗，這種檢測方法操作簡單，是嬰幼兒和青少年患者臨床診斷的常用方式[2-3]。 PPD皮試檢查結果為陰性表明排除了各種免疫抑制的因素外 ,患者機體沒有受到結核桿菌的自然感染或者人工感染，且一般情況下能夠作為確診患者未感染結核病的診斷依據[4-6]，但是對于早期結核病患者而言，其敏感性較低。因此目前臨床上一直在尋找更為敏感的檢驗方式,特別是對菌陰肺結核。

蛋白質芯片是最近幾年內新興的一種結核診斷方式，和基因芯片的作用相類似。蛋白質芯片的作用途徑是通過將蛋白質點到固相物質上,然后和想要檢測的患病組織或細胞等進行“雜交”,最后通過相關的自動化設備分析，得出最終結果[7-9]。這一技術極大地提高了結核抗體檢測的靈敏度、特異性,具有簡捷、速度快、大量和成本較低等檢測優勢。聯合結核蛋白芯片和PPD皮試檢測可互相補充 ,進一步提高臨床診斷的敏感度,為肺結核診斷提供可靠依據。

對于肺結核病患者而言，早期診斷和治療是十分關鍵的。本次研究發現，聯合檢驗的靈敏度明顯高于結核蛋白芯片檢驗和PPD實驗，但是其特異度與兩項檢驗單獨檢測無明顯差異，本次探究分析結果和李丹[10]等學者探究的最終結果相一致，充分的說明了聯合試驗的方式更有利于痰菌涂陰性肺結核快速診斷，陽性檢出率和檢查的靈敏度均比較高。聯合使用兩種診斷方式，雖然增加了檢查用時和費用，但是診斷結果的參考價值相對更高，臨床診斷可靠性更高，既滿足快速診斷的要求又能保證診斷結果的可靠性。

綜上所述，蛋白芯片技術聯合PPD試驗對痰菌涂陰性肺結核快速診斷的效果非常顯著，相對于單一蛋白芯片技術臨床診斷的效果更為顯著，應推廣聯合檢查診斷的其臨床應用范圍。

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