應用FISH技術對孕早期胚胎停育及自然流產的遺傳學因素分析*

沈 菲，張成芳，趙 娟，覃亦偉，李 輝，陳廣新

(廣州市花都區人民醫院，廣東 廣州 510800)

染色體數目檢測技術是目前確認早期胚胎停育及自然流產的遺傳學因素的主要手段之一。近幾年 FISH檢測分析技術的臨床應用范圍廣泛，是一種快速準確的生物學診斷技術[1]。本次我院為探討分析采用熒光原位雜交技術即FISH技術分析孕早期胚胎停育及自然流產的遺傳學因素的效果及意義，選取2015-06—2016-06間廣州市花都區人民醫院就診患者100例進行分析，結果匯報如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

用數字表法選取2015-06—2016-06間本院就診患者100例，年齡25～36歲，平均年齡(28.4±5.9)歲，其中孕周小于15 周發生不明原因自然流產的患者病例50例，通過 B 超檢查為胚胎停止發育的患者50例，孕周7～13周，平均孕周(9.5±3.2)周。所有入選病例均經患者本人同意，并自愿簽訂知情同意書。

1.2 方法

FISH技術試驗過程：首先需要通過冷磷酸鹽緩沖液(PBS) 沖洗處理絨毛組織標本，去掉存留的污染母血細胞。使用倒置體視顯微鏡，使用眼科鑷挑選絨毛組織，需要注意的是要盡量避免混入蛻膜組織。根據標本量，使用濃度為0.3 ng/mL的膠原酶 B消化持續5～10 min，再使用濃度為0.25% 的胰蛋白酶持續消化10 min。然后，通過離心技術處理，去掉消化液后，使用濃度為 0.075 mol/L的KCl 低滲處理30 min，按照3∶1的比例液經過預固定、固定后，沉淀在同一載玻片，分別滴取 3 個雜交區。最后，對處理后的薄片進行熒光原位雜交實驗，觀察在患者的流產組織中是否存在數目異常的染色體及具體異常情況。

1.3 試驗結果評價標準[2]

FISH 結果的判讀依據為：每組的探針計數大于或等于100 個細胞，對每種指標進行單獨判斷，正常細胞比>90%，則說明該項指標正常；若異常細胞比例> 60%，則說明該項指標存在異常；如果全部單個指標異常細胞的比例均<10%，檢測正常結果。如果某一項指標的異常檢測比在10%～60%，需要增加觀測樣本的細胞數，如果異常細胞的所占比例低于判斷非嵌合體狀態的異常標準(60% )，其可能原因為胎兒染色體異常嵌合體、母體細胞污染等，需要進行進一步的遺傳判斷。

1.4 觀察指標

統計分析Fish技術檢測染色體異常類型檢出率及不同異常類型的檢出情況。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 異常染色體檢出率

經統計，異常染色體異常患者50例，異常檢出率50%，染色體異常情況比例較高。

2.2 不同類型異常染色體檢出情況

異常染色體檢出50例，其中16-三 體和22-三 體異常占比率均較高(圖1、圖2)為32.00%，XXX 、21-三體最低均為2.00%，差異有統計學意義(P<0.05)，可見染色體數目異常為導致早產或停育的主要因素。見表1。

表1 不同異常類型的檢出情況

圖1 16-三體

圖2 22-三體

3 討論

環境因素、內分析因素以及遺傳學因素等都是導致胚胎停育的重要因素，而胚胎停育后大約15%的患者會出現自然流產。目前，從遺傳學的角度講，染色體的數目異常是胚胎停育和發生早期流產的根本因素。而受精卵卵裂時染色體不分離等都是導致胚胎染色體數目異常的主要因素，而染色體異常又可以主要分為染色體數目減少或增加一條這兩種情況，即三體性或者單體性情況。而如果胚胎中存在多倍體或單倍體染色體核型，則很可能由于基因劑量效應的作用而使胚胎無法繼續發育即停育[3]。大量研究結果顯示，染色體數目異常胚胎中僅部分 21-三體和性染色體多倍體或單倍體情況的胚胎能夠發育成熟。即便如此，這些患者大多數會在生長發育、智力或者生殖等方面出現嚴重的缺陷。本次調查研究結果顯示：異常染色體檢出率50.00%，其中16-三體異常占比率最高為32.00%，XXX 、21-三體最低均為2.00%，差異有統計學意義(P<0.05)，這一結果也可充分說明染色體數目異常為導致早產或停育的主要因素之一。且和鄭雷等[4]探究分析結果符合，說明經FISH技術診斷染色體異常情況檢出率較高，且提示染色體數目異常為胚胎停育的主要遺傳學因素。

FISH 檢測分析技術應用的最大優勢為這一技術不局限于檢測分裂期的細胞，既能夠適用中期染色體，也可適用于檢測間期核及細胞周期的各個階段[5]。由此可見，通過FISH 檢測方法能夠檢測流產組織，并能夠充分發揮該實驗技術的檢測優勢。另外，這一檢測技術主要能夠通過熒光信號標記染色體，所以通過對熒光信號的判讀便能夠了解待檢標本的染色體數目是否存在異常情況，進而發現由于染色體數目異常而導致的流產病因，為孕早期胚胎停育及自然流產的遺傳學因素判斷提供可靠依據[6]。但是與此同時，FISH檢測技術也存在一定的局限性，其主要針對22、21、18、16、13和X/Y這6種較為常見染色體的數目異常情況具有良好的檢測效果，而針對其他染色體的檢測效果不佳，因此在檢測過程中也會有漏診情況的發生。這也是目前FISH檢測技術無法完全取代核型分析檢測技術的重要原因，但是FISH檢測技術仍可作為早期篩選、診斷的有效手段。

綜上所述，從遺傳學角度，患者染色體數目異常是其早期胚胎停育或發生自然流產的主要因素，而16 號染色體三倍體的改變則是最常見的異常情況。FISH技術分析方法能夠對孕早期停育的胚胎和流產組織進行有效的檢測，為該病遺傳學因素分析提供了可靠依據。

[1] 崔洪艷，陳敘，岳天孚.FISH 技術檢測自然流產或死胎死產組織中染色體異常的臨床研究[J].中國婦幼保健，2011，26(33):5220-5221.

[2] 韋紅衛，杜娟，夏紅衛，等.FISH 技術在檢測自然流產胚胎染色體異常中的應用研究[J].中國優生與遺傳雜志，2012，20(8):40-41.

[3] 宋蘭林，熊麗，劉思平，等.FISH 技術在快速診斷自然流產胚胎染色體數目異常中的應用[J].南方醫科大學學報，2011，31(9):1605-1607.

[4] 鄭雷，何曉春，李巍，等.FISH 方法進行孕早期胚胎停育及自然流產的遺傳學因素分析[J].實用婦產科雜志，2013，11(29):863-865.

[5] 徐雪琴，李燦錚，林小玲，等.溫州地區110 例早孕胚胎停育絨毛染色體核型分析[J].中國優生與遺傳雜志，2012，20(12):54-55.